遺傳性耳聾基因篩查對(duì)遲發(fā)性耳聾的預(yù)防作用分析

陳文強(qiáng)　熊怡

【摘要】 目的：探討遺傳性耳聾基因篩查對(duì)遲發(fā)性耳聾的預(yù)防作用。方法：選取2015年1月-2017年

3月在本院出生的新生兒5 547例，采集其足跟末梢靜脈血，提取DNA，采用耳聾基因芯片技術(shù)檢測(cè)4個(gè)耳聾基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA）的9個(gè)突變位點(diǎn)，同時(shí)進(jìn)行聽(tīng)力篩查。結(jié)果：5 547例受檢新生兒中耳聾基因異常者228例，其中GJB2基因雜合突變3.10%（172/5 547）；GJB3基因雜合突變0.13%（7/5 547）；SLC26A4基因雜合突變0.54%（30/5 547）；線粒體12SrRNA突變0.27%（15/5 547）；雙雜合突變0.05%（3/5 547），其中299 del AT和2168 A>G 1例，235 del C和538 C>T 2例；176 del 16純合突變0.02%（1/5 547）。聽(tīng)力篩查檢測(cè)通過(guò)的5 363例新生兒中，耳聾基因檢測(cè)異常0.88%（47/5 363）。結(jié)論：遺傳性耳聾基因篩查有利于遲發(fā)性耳聾的及早發(fā)現(xiàn)及干預(yù)，彌補(bǔ)了單獨(dú)進(jìn)行新生兒聽(tīng)力篩查所存在的不足，具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 新生兒； 聽(tīng)力篩查； 耳聾基因； 遺傳性耳聾

Analysis of the Preventive Effect of Genetic Deafness Gene Screening on Delayed Deafness/CHEN Wenqiang，XIONG Yi.//Medical Innovation of China，2018，15（03）：120-122

【Abstract】 Objective：To investigate the preventive effect of gene screening for genetic deafness in patients with delayed deafness.Method：A total of 5 547 newborns born in our hospital from January 2015 to March 2017 were selected，and their heel vein blood were collected，DNA was extracted，9 mutation sites of 4 deaf genes（GJB2，GJB3，SLC26A4 and 12SrRNA） were detected by deafness gene chip technology，and hearing screening was performed at the same time.Result：Of the 5 547 newborns，there were 228 cases of deafness gene abnormalities，the GJB2 gene heterozygous mutation was 3.10%（172/5 547）；GJB3 gene heterozygous mutation was 0.13%（7/5 547）；SLC26A4 gene heterozygous mutation was 0.54%（30/5 547）；mitochondrial 12SrRNA mutation was 0.27%（15/5 547）；double heterozygous mutation was 0.05%（3/5 547），included 1 case of 299 del AT and 2168 A>G，2 cases of 235 del C and 538 C>T；176 del 16 homozygous mutation was 0.02%（1/5 547）.Of the 5 363 newborns passing through the hearing screening test，the abnormal detection of deafness gene was 0.88%（47/5 363）.Conclusion：Genetic deafness gene screening is conducive to early detection and intervention of delayed deafness，which makes up for the shortcomings of neonatal hearing screening alone，and has good clinical application value.

【Key words】 Newborn； Hearing screening； Deafness gene； Genetic deafness

First-authors address：The Boai Hospital of Zhongshan City，Zhongshan 528400，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.03.033

我國(guó)幅員遼闊，是人口大國(guó)，出生人口相當(dāng)多。同時(shí)，我國(guó)先天性出生缺陷疾病發(fā)生率也相當(dāng)高，先天性耳聾已成為第二大致殘疾病，嚴(yán)重降低了我國(guó)出生人口素質(zhì)[1-2]。在目前的體力篩查模式中，無(wú)論瞬態(tài)聲耳聲發(fā)射檢查或耳聲發(fā)射檢查，僅僅反映了當(dāng)時(shí)的聽(tīng)覺(jué)功能狀態(tài)，無(wú)法發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性耳聾患兒，而遲發(fā)性耳聾患兒得不到有效的干預(yù)措施保護(hù)，有很大的可能造成永久性聽(tīng)力損失[3-4]。對(duì)于遲發(fā)性耳聾基因攜帶新生兒，正確分析病因，給予預(yù)防指導(dǎo)，是降低其耳聾發(fā)生的有效途徑[5-6]。為此，本院開(kāi)展遺傳性耳聾基因篩查對(duì)遲發(fā)性耳聾的預(yù)防作用分析研究，旨在為遲發(fā)性耳聾的防治提供理論依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月-2017年3月在本院出生的新生兒5 547例，其中男2 628例，女2 919例；日齡2～5 d，平均（3.68±0.34）d，在其監(jiān)護(hù)人知情同意的情況下，采集其足跟血2滴并密封保存，提取DNA，進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)。本研究已經(jīng)由院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 聽(tīng)力篩查 新生兒在出生48 h使用美國(guó)Bio-logic（伯勞克）耳聲發(fā)射儀進(jìn)行畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（DPOAE）檢查；DPOAE未通過(guò)者于42 d采用natus-alGo3i自動(dòng)聽(tīng)性腦干誘發(fā)電位儀進(jìn)行自動(dòng)聽(tīng)性腦干反應(yīng)（AABR）檢查；第一次AABR未通過(guò)者于2周后進(jìn)行復(fù)篩，復(fù)篩未通過(guò)者可判斷為聽(tīng)力檢查未通過(guò)。

1.3 耳聾基因芯片檢測(cè)方法 應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)GJB2（35 del G、176 del 16、235 del C、

299 del AT）、GJB3（538 C>T）、SLC26A4（IVS7-2A>G、2168 A>G）、12SrRNA（1555 A>G、1494 C>T）等4個(gè)耳聾基因，共9個(gè)突變位點(diǎn)。耳聾基因芯片檢測(cè)的技術(shù)路線，包括血片DNA的提取、PCR擴(kuò)增、芯片雜交、芯片洗滌、芯片掃描，詳細(xì)步驟參照Lux-ScanTM10K-B微陣列芯片掃描儀和基因芯片雜交盒（博奧生物有限公司提供）操作說(shuō)明書(shū)。測(cè)序結(jié)果使用Chromas軟件分析。

1.4 結(jié)果判讀 芯片掃描顯示同位點(diǎn)中探針W出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，M出現(xiàn)陰性信號(hào)，判讀為該位點(diǎn)野生型；W出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，M出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，判讀為該位點(diǎn)突變雜合型；W出現(xiàn)陰性信號(hào)，M出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，判讀為該位點(diǎn)突變純合型。

2 結(jié)果

2.1 5 547例受檢新生兒耳聾基因及聽(tīng)力篩查檢測(cè)結(jié)果 5 547例受檢新生兒中，有228例檢出4個(gè)耳聾基因的8種突變類(lèi)型，突變耳聾基因攜帶率為4.11%（228/5 547）。耳聾基因異常者228例中GJB2基因雜合突變172例，GJB3基因雜合突變7例，SLC26A4基因雜合突變30例，線粒體12SrRNA突變15例；雙雜合突變3例，其中299 del AT和2168 A>G 1例，235 del C和538 C>T 2例；176 del 16純合突變1例。見(jiàn)表1。

2.2 5 547例受檢新生兒聽(tīng)力篩查檢測(cè)結(jié)果 5 547例受檢新生兒中，DPOAE通過(guò)率為95.93%（5 321/

5 547）；DPOAE未通過(guò)226例進(jìn)行AABR，通過(guò)率為18.58%（42/226）；AABR未通過(guò)184例進(jìn)行AABR復(fù)篩，無(wú)一例通過(guò)。聽(tīng)力篩查檢測(cè)通過(guò)的5 363例新生兒中，耳聾基因檢測(cè)異常47例，占0.88%（47/5 363）。

3 討論

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，在先天性耳聾疾病中遺傳性耳聾約占60%，其中常染色體隱性遺傳約占80%，常染色體顯性遺傳約占10%，生育部分為X-連鎖隱性遺傳和線粒體遺傳[7-9]。耳聾的遺傳因素已得到臨床的確立。近年，隨著基因芯片技術(shù)的發(fā)展，新生兒遺傳性耳聾基因篩查有了技術(shù)上的保障[10]。流行病學(xué)研究指出，我國(guó)遺傳性耳聾者以GJB2、GJB3、SLC26A4基因雜合突變和線粒體12SrRNA突變?yōu)橹鱗11-13]。為此，本研究采用耳聾基因芯片技術(shù)對(duì)5 547例新生兒的4個(gè)耳聾基因的9個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)。

本研究結(jié)果顯示，5 547例新生兒基因類(lèi)型依高低順序排列分別為野生型、GJB2基因雜合突變、SLC26A4基因雜合突變、線粒體12SrRNA突變、GJB3基因雜合突變、雙雜合突變（299 del AT和2168 A>G，235 del C和538 C>T）、純合突變（176 del 16），與左路杰等[14]研究者的研究結(jié)果相一致。本研究結(jié)果顯示，聽(tīng)力篩查檢測(cè)通過(guò)的5 363例新生兒中，耳聾基因檢測(cè)異常47例，占0.88%，故該47例耳聾基因檢測(cè)異常新生兒具有較大的耳聾潛在風(fēng)險(xiǎn)。線粒體12SrRNA突變與SLC26A4基因突變均為遲發(fā)性耳聾，線粒體12SrRNA突變可認(rèn)為是藥物性耳聾突變，本研究228例耳聾基因檢測(cè)異常新生兒中，線粒體12SrRNA突變15例。既往遺傳學(xué)研究指出，1494 C>T、1555 A>G的線粒體12SrRNA突變者對(duì)接觸氨基糖甙類(lèi)藥物的敏感性增強(qiáng)，可造成永久性聽(tīng)力損失[15-17]。因此有必要對(duì)線粒體12SrRNA突變新生兒的監(jiān)護(hù)人進(jìn)行防聾知識(shí)的宣傳，告知其該患兒必須終生禁用氨基糖甙類(lèi)藥物。SLC26A4基因突變新生兒可變現(xiàn)為無(wú)聽(tīng)力損失，本研究228例耳聾基因檢測(cè)異常新生兒中，SLC26A4基因突變新生兒30例。既往遺傳學(xué)研究指出，SLC26A4基因突變與大前庭導(dǎo)水管綜合征密切相關(guān)，SLC26A4基因突變者在頭部震蕩外傷或感冒后可誘發(fā)聽(tīng)力損失，最終進(jìn)展成為后天中重度感音神經(jīng)性耳聾[18-20]。因此有必要對(duì)SLC26A4基因突變新生兒的監(jiān)護(hù)人進(jìn)行防聾知識(shí)的宣傳，進(jìn)行嚴(yán)密隨訪，避免或延緩患兒聽(tīng)力損失。

綜上所述，遺傳性耳聾基因篩查可明確新生兒耳聾基因的部分?jǐn)y帶情況，尚不能完全檢出目前已知的耳聾基因突變類(lèi)型，故存在漏診的可能性。即便如此，遺傳性耳聾基因篩查也可作為一種新生兒遲發(fā)性耳聾基因的篩查工具，對(duì)于攜帶遲發(fā)性耳聾基因的新生兒，分析病因，給予預(yù)防指導(dǎo)，避免聽(tīng)力損失，對(duì)降低遲發(fā)性耳聾發(fā)生提供有利的理論支持。此外，有必要對(duì)于攜帶耳聾基因的新生兒的父母進(jìn)行遺傳咨詢，依據(jù)遺傳模式進(jìn)行后代遺傳性耳聾的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及生育指導(dǎo)，以切實(shí)提高我國(guó)出生人口素質(zhì)。

參考文獻(xiàn)

[1]王旭東，洪擁軍，陳藝文，等.廈門(mén)地區(qū)遺傳性耳聾流行病學(xué)調(diào)查[J].中華耳科學(xué)雜志，2016，14（6）：753-758.

[2]韓東一.中國(guó)聾病防治現(xiàn)狀[J].中華耳科學(xué)雜志，2007，5（4）：345-349.

[3]張晚霞，孫慧紅，馬麗霞，等.30835例新生兒聽(tīng)力和基因聯(lián)合篩查實(shí)踐研究[J].中華耳科學(xué)雜志，2016，14（6）：769-773.

[4]潘蕾，劉宏彥，劉瑾，等.天津市81929例新生兒聽(tīng)力和聾病易感基因聯(lián)合篩查情況分析[J].中國(guó)婦幼保健，2016，31（4）：754-756.

[5] Kim B G，Shin J W，Park H J，et al.Limitations of hearing screening in newborns with PDS mutations[J].Int J Pediatr Otorhinolaryngol，2013，77（5）：833-837.

[6] Norris V W，Arnos K S，Hanks W D，et al.Does universal newborn hearing screening identify all children with GJB2（Connexin 26） deafness？ Penetrance of GJB2 deafness[J].Ear Hear，2006，27（6）：732-741.

[7]袁永一，黃德亮，戴樸，等.中國(guó)非綜合征遺傳性聾人群GJB6基因突變分析[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2007，21（1）：3-6.

[8]李慶忠，王秋菊，趙立東，等.國(guó)人非綜合征型遺傳性聾患者GJB3基因突變分析[J].聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志，2005，13（3）：145-148.

[9]牛志杰，馮永，梅凌云，等.非綜合征型X連鎖隱性遺傳耳聾家系臨床表型及遺傳學(xué)特征分析[J].中華耳科學(xué)雜志，2017，15（2）：195-200.

[10]張艷，卞穎華，許鵬飛，等.應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)非綜合征型耳聾基因突變[J].生物技術(shù)通訊，2010，21（1）：22-26.

[11]蘇寧，楊麗，劉娟，等.基因芯片技術(shù)的國(guó)內(nèi)應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通訊，2016，27（2）：289-292.

[12]戴樸，劉新，于飛，等.18個(gè)省市聾校學(xué)生非綜合征性聾病分子流行病學(xué)研究（Ⅰ）-GJB2 235delC和線粒體DNA 12SrRNA A1555G突變篩查報(bào)告[J].中華耳科學(xué)雜志，2006，4（1）：1-5.

[13]忻蓉，顧春健，婁志武，等.湖州地區(qū)1814例新生兒耳聾基因篩查及突變位點(diǎn)分析[J].浙江醫(yī)學(xué)，2015，37（20）：1661-1663.

[14]左路杰，張勛，袁永一，等.北京地區(qū)耳聾殘疾人群大前庭水管相關(guān)SLC26A4基因熱點(diǎn)突變分子流行病學(xué)調(diào)查[J].中華耳科學(xué)雜志，2012，10（2）：237-240.

[15]陳方方，郭紫芬，軒貴平.線粒體12SrRNA突變與耳聾相關(guān)性研究進(jìn)展[J].中國(guó)抗生素雜志，2015，40（3）：228-233.

[16]管敏鑫，趙立東.與氨基糖甙類(lèi)抗生素耳毒性相關(guān)的線粒體12S rRNA突變的流行病學(xué)特征[J].中華耳科學(xué)雜志，2006，4（2）：98-105.

[17] Skou A S，Tranebj?rg L，Jensen T，et al.Mitochondrial 12S ribosomal RNA A1555G mutation associated with cardiomyopathy and hearing loss following high-dose chemotherapy and repeated aminoglycoside exposure[J].J Pediatr，2014，164（2）：413-415.

[18]張笑千，王睿，劉暢，等.SLC26A4基因突變所致遺傳性耳聾患者突變類(lèi)型研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2016，19（8）：979-981.

[19] Hilgert N，Smith R J，Van C G.Forty-six genes causing nonsyndromic hearing impairment：which ones should be analyzed in DNA diagnostics？[J].Mutat Res，2009，681（2-3）：189-196.

[20]竇艷斌，趙艷萍.SLC26A4基因突變致聾患者的臨床表現(xiàn)與康復(fù)措施探討[J].雙足與保健，2017，26（8）：38-39.

（收稿日期：2017-12-18） （本文編輯：董悅）