金桂花干花提取物的急性毒性及鎮(zhèn)痛、 抗炎作用的研究

龐元美 盧紅梅 王斌 覃培松 韋燕清 韋雪

（1.廣西警察學(xué)院，廣西 南寧 530028；2.廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)，廣西 南寧 530007）

金桂花（Osmanthus fragransvar. thunbergii Makino）屬木犀科木犀屬植物 ，廣泛栽種于南方地區(qū)，藥材資源非常豐富。為溫帶樹種，葉對(duì)生，葉面光滑，多呈橢圓或長(zhǎng)橢圓形，花簇生，金黃色，味香持久。藥食同源，可觀賞、食用和藥用；花常用于制作點(diǎn)心，釀酒，茶水及香料等；有藥用價(jià)值的部分主要為桂花的花、果實(shí)及種子等。［1］古有記載：“治筋骨疼 痛，氣痛，散郁”和 “貼牙痛，取桂樹根上皮用”等?，F(xiàn)代研究表明桂花有抗氧化、增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)血脂、抗菌、抗癌、抗氧化及護(hù)肺等功效。［2-8］民間在風(fēng) 火牙疼方面有用桂花根莖來(lái)治療。目前大多數(shù)的報(bào)道主要是對(duì)桂花的根莖葉進(jìn)行了研究，有關(guān)桂花干花進(jìn)行研究的報(bào)道極少。本研究采用最大耐受劑量、醋酸扭體法及耳廓腫脹法，探討金桂花干花提取物的急性毒性及鎮(zhèn)痛、抗炎作用，以期為金桂花的開發(fā)提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

昆明種小鼠，SPF級(jí)別，每只體重18~22 g，雌雄兼用，購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 試劑

二甲苯（批號(hào)：2020年3月5日，天津市富寧精細(xì)化工）；無(wú)水乙醇（批號(hào)：170505，西隴科學(xué)）；冰醋酸（批號(hào)：20170221，廣東光華科技）。

1.1.3 藥材

金桂花干花提取物采摘自廣西境內(nèi)；阿司匹林腸溶片（批號(hào)：191203，舒泰神生物制藥）；生理鹽水（四川科倫藥業(yè)）。

1.1.4 儀器

電子天平（FB203C，上海佑科儀器儀表）；電熱套（KDM型，山東鄄城華魯）；循環(huán)水式真空泵（SHZ-D（Ⅲ），上海驚精其儀）；Dura超純水儀（上海和泰儀器）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-2000B，上海亞榮）；打孔器（直徑0.6 cm）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 金桂花干花提取物的制備

稱取金桂花干花500 g，用4 L、60%乙醇浸泡48 h。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回流提取2 h，過(guò)濾除去藥渣，合并提取液。提取液在50℃減壓回收乙醇，濃縮得浸膏113.12 g，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 藥物給藥濃度的配制

金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組分別1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg，用生理鹽水配制成低、中及高三種不同的濃度，即分別為0.05 g/mL、 0.1 g/mL及0.2 g/mL。阿司匹林腸溶片去外層包衣后研成細(xì)粉，成年人用量0.75~1.5 g/次，體重 70 kg，再根據(jù)動(dòng)物劑量換算方法計(jì)算，小鼠給藥劑量范圍為0.132~0.264 g/kg/次，本次實(shí)驗(yàn)阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組設(shè)計(jì)為0.15 g/kg，用生理鹽水配置成7.5 mg/mL。［9］

1.2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)

預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示金桂花干花提取物毒性極低，故本實(shí)驗(yàn)采用最大耐受劑量進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)［10］，取20 只健康小鼠，雌雄各半，按性別和體重隨機(jī)分為兩組，金桂花干花提取物給藥組和生理鹽水組，給藥組劑量為5 g/kg，配成0.25 g/mL濃度，兩組小鼠按0.2 mL/10 g灌胃給藥，連續(xù)觀察14天，每天觀察和記錄小鼠的活動(dòng)、精神狀態(tài)、攝食量、體重變化、排泄物及死亡等方面情況。觀察期滿將存活的小鼠處死，解剖并用肉眼觀察各主要器官（心、肝、肺、腎及脾等）的情況。

1.2.4 醋酸扭體法實(shí)驗(yàn)［11］

小鼠60只，隨機(jī)分為5組，每組12只，即生理鹽水組、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組，三組金桂花干花提取物不同給藥組（即低劑量組、中劑量組及高劑量組）。每天稱重小鼠一次，每只小鼠按體重灌胃給藥，0.2 mL/10 g給予相應(yīng)的藥，生理鹽水組給予生理鹽水，連續(xù)7 d。末次給藥30 min后，用濃度為0.6%的新配制的醋酸溶液對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射，每只小鼠注射0.2 mL，記錄小鼠的扭體反應(yīng)數(shù)量，記錄15 min，并計(jì)算小鼠的扭體抑制率，即疼痛抑制率。

疼痛抑制率（%）=（生理鹽水組平均扭體次 數(shù)—給藥組平均扭體次數(shù)）/生理鹽水組平均扭體次數(shù)×100%。

1.2.5 耳廓腫脹法實(shí)驗(yàn)［12］

小鼠60只，隨機(jī)分為5組，每組12只，即生理鹽水組、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組，三組金桂花干花提取物不同給藥組（即低劑量組、中劑量組及高劑量組）。每天稱重一次，每只小鼠按體重灌胃給藥，0.2 mL/只給予相應(yīng)的藥，生理鹽水組給予生理鹽水，按連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，各組小鼠分別于左耳兩面均勻涂抹0.03 mL二甲苯，右耳不做處理，作為對(duì)照。1 h后頸椎脫臼處死小鼠，先用剪刀把左右耳剪下，用打孔器（直徑0.6 cm）在左右耳同一位置分別對(duì)各組小鼠打孔取耳片，每個(gè)耳片為圓形，稱量重量并記錄，計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度等于每只小鼠左耳片與右耳片重量 相減。

腫脹抑制率（%）=（生理鹽水組腫脹度平均 數(shù)—給藥組腫脹度平均數(shù)）/生理鹽水組腫脹度平均數(shù)×100%。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理

采用Excel統(tǒng)計(jì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以（±s） 表示，采用t檢驗(yàn)組間比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與生理鹽水組比較，在14 d內(nèi)觀察期間給藥組小鼠的活動(dòng)、攝食量、尿液及糞便無(wú)異常，體重的增長(zhǎng)正常，精神較好，無(wú)死亡現(xiàn)象。解剖結(jié)果顯示各主要器官均未發(fā)現(xiàn)有任何肉眼可見的異常。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 金桂花干花提取物對(duì)小鼠體重變化的影響（ ±s）

表1 金桂花干花提取物對(duì)小鼠體重變化的影響（ ±s）

組別 劑量（g/kg） 小鼠數(shù)（只）性別 藥前體重（g）7天后體重增加值（g）14天后體重增加值（g）-生理鹽水組5 ♂ 20.38±1.1 5.57±0.9 5.33±1.4-5 ♀ 20.41±1.0 6.01±1.1 5.92±1.5給藥組 5 5 ♂ 20.12±0.9 5.39±0.8 5.02±1.3 5 5 ♀ 20.07±1.2 5.74±1.3 5.17±1.0

2.2 金桂花干花提取物對(duì)醋酸誘導(dǎo)小鼠疼痛反應(yīng)的影響

與生理鹽水組比較，金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組均能減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，低劑量組和中劑量組有顯著性差異（P＜0.05），疼痛抑制率分別為31.10%和46.01%，高劑量組有非常顯著性差異（P＜0.01），疼痛抑制率較高，為50.35%，且隨著劑量的增大，疼痛抑制率逐漸增強(qiáng)。結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)醋酸誘導(dǎo)的小鼠疼痛反應(yīng)具有較強(qiáng)抑制作用，且與劑量呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用（ ±s）

表2 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用（ ±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 小鼠數(shù)（只） 扭體反應(yīng)數(shù)量（次） 鎮(zhèn)痛率（%）生理鹽水組 - 12 38.23±3.0 -阿司匹林組 0.15 12 20.12±2.6* 47.37低劑量組 1 12 26.34±2.7* 31.10中劑量組 2 12 20.64±3.2* 46.01高劑量組 4 12 18.98±1.8** 50.35

2.3 金桂花干花提取物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠炎癥反應(yīng)的影響

與空白對(duì)照組比較，金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組均能減輕小鼠腫脹度，低劑量組和中劑量組有顯著性差異（P＜0.05），腫脹抑制率分別為35.33%和41.48%，高劑量組有非常顯著性差異（P＜0.01），腫脹抑制率較高，為62.80%，且劑量越大，腫脹抑制率越強(qiáng)。提示實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠炎癥反應(yīng)具有較強(qiáng)抑制作用，且與劑量呈正相關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的抗炎作用（ ±s）

表3 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的抗炎作用（ ±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 小鼠數(shù)（只） 平均腫脹度（mg） 腫脹抑制率（%）生理鹽水組 - 12 11.21±1.7 -阿司匹林組 0.15 12 6.34±2.1** 43.44低劑量組 1 12 7.25±1.5* 35.33中劑量組 2 12 6.56±2.7* 41.48高劑量組 4 12 4.17±2.0** 62.80

3 討論

非甾體抗炎藥的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗風(fēng)濕等方面的療效確切，至今已有100多年應(yīng)用歷史，絕大多數(shù)藥物屬于非處方藥，在臨床治療中應(yīng)用非常廣泛，但也是一類不良反應(yīng)發(fā)生較多的藥物。［13］開發(fā)出效果好且不良反應(yīng)較少的新型非甾體抗炎藥是研究方向。

急性毒性試驗(yàn)中小鼠的活動(dòng)、攝食量、尿液及糞便無(wú)異常，體重的增長(zhǎng)正常，精神較好，無(wú)死亡現(xiàn)象，初步結(jié)果表明金桂花干花提取物未顯示出明顯急性毒性，基本無(wú)毒。醋酸扭體法和耳廓腫脹法實(shí)驗(yàn)表明，金桂花干花提取物在低劑量組、中劑量組及高劑量組（1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg）下均可較明顯減少醋酸誘導(dǎo)的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和減輕二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹度，提高疼痛抑制率和腫脹抑制率，提示其具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛及抗炎作用，且作用與劑量呈正相關(guān)系。金桂花干花提取物的鎮(zhèn)痛抗炎作用與阿司匹林相比，顯示出更好的鎮(zhèn)痛及抗炎藥效活性。對(duì)于金桂花干花提取物尚未確定和闡明的活性成分及作用機(jī)制，值得做進(jìn)一步研究及開發(fā)。