不同來源誘導(dǎo)劑建立的卵巢早衰動物模型的比較

周慧　包秀芳　宋偉奇

【摘要】目的 比較不同來源的誘導(dǎo)劑建立的卵巢早衰動物模型。方法 選取97只雌性SD大鼠分別給予120 mg/kg的環(huán)磷酰胺、白消安、35%半乳糖食物丸，制備卵巢早衰動物模型。通過觀察體重變化，激素血清濃度水平，卵巢病理切片等分析數(shù)據(jù)。結(jié)果 單次給藥環(huán)磷酰胺后，大鼠體重增加非常緩慢，卵巢受損；隨著血清LH濃度上升趨勢，血清E2濃度下降趨勢和受損的卵巢，35%半乳糖食物顆粒飼喂的大鼠體重增加緩慢，其中白蛋白和總蛋白以及受損的卵巢的血清濃度顯著升高（P<0.05）。結(jié)論 不同誘導(dǎo)物可產(chǎn)生不同特征POF模型，為進(jìn)一步研究提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】大鼠；卵巢早衰；動物模型

【中圖分類號】R33 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.07..01

卵巢早衰（POF）是指40歲以前卵巢早衰或卵巢功能衰退，主要發(fā)生在平均絕經(jīng)年齡前兩年的標(biāo)準(zhǔn)偏差人口，其原因可能與內(nèi)源性基因，異常自身免疫，感染，醫(yī)療療法等影響有關(guān)。POF具有明顯異質(zhì)性及顯著遺傳性。染色體異常被一直被認(rèn)為是POF的常見原因。基于POF基因組學(xué)致突變大鼠模型在探索，且不同模型之間存在較大差異，因此在探索POF治療方法時很難選擇合適的動物模型。本文通過比較不同方法致大鼠卵巢早衰動物模型之間的差異，為POF治療進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 一般材料

環(huán)磷酰胺由上海金穗生物有限公司提供。35%半乳糖食品顆粒由南通營養(yǎng)飼料有限公司提供。

1.2 研究方法

雌性大鼠在室溫（22±2）℃和相對濕度（50±10）%的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)12 h光暗周期，水和食物隨意提供。每只大鼠的平均食物消耗為28g。所有手術(shù)均在戊巴比妥鈉麻醉下進(jìn)行。將體重約為（180～200）g的56只SD大鼠分成A、B、C組，A組大鼠用120 mg/kg的溶于0.9%鹽水溶液中的單次腹膜內(nèi)注射環(huán)磷酰胺處理，B組大鼠用單一的用0.9%鹽水溶液以12 mg/kg的劑量自發(fā)注射白消安注射液，C組大鼠為對照組，用0.9%鹽水溶液腹膜內(nèi)處理。每周測量所有大鼠的體重。在環(huán)磷酰胺和白消安的治療后第30天，將所有大鼠稱重并處死以供進(jìn)一步研究。

41只體重180～200 g的SD大鼠分為兩組，一組小鼠飼喂35%半乳糖食物丸，另一組飼喂標(biāo)準(zhǔn)食物。每周稱量所有大鼠，并在35%半乳糖食物顆?；驑?biāo)準(zhǔn)食物施用后第70天處死。最后，通過腹膜內(nèi)注射5 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉動物后，通過眼眶后穿刺收獲1.0～1.2 ml全血樣品。然后將動物處死。將樣品在室溫下以5000 rpm/min離心5 min并收集上清液。采用ELISA試劑盒測定血清FSH，LH，E2濃度作為評估動物模型性激素水平的指標(biāo)。對于35%半乳糖食品實(shí)驗(yàn)，通過測定半乳糖，總蛋白和白蛋白的血清濃度水平作為評價POF發(fā)生的補(bǔ)充參數(shù)。

1.3 病理檢查

處死動物后收集卵巢并進(jìn)行卵巢組織學(xué)分析。收集的卵巢固定在10%甲醛中，制成5 mm厚石蠟切片并進(jìn)行HE染色，觀察切片中的卵泡數(shù)目變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析包括組平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算。行t檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 環(huán)磷酰胺和白消安誘導(dǎo)POF模型

用120 mg/kg單劑量環(huán)磷酰胺腹腔內(nèi)處理大鼠后，第一周SD大鼠的體重在較對照組非常緩慢地增加（P<0.05），第二周時增加緩慢（P<0.05），第3周迅速增加，第4周達(dá)到接近對照組的正常體重，表明環(huán)磷酰胺在初次給藥時對大鼠產(chǎn)生明顯毒性，且毒性作用隨時間推移而減少。白消安組與對照組體重?zé)o差異。FSH，LH和E2血清濃度水平在激素試驗(yàn)中無顯著差異，但對于環(huán)磷酰胺組，LH終濃度水平升高。環(huán)磷酰胺組中，卵泡中特別是卵泡中顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞中有輕度變性和壞死。卵母細(xì)胞對竇卵泡的損害導(dǎo)致沒有成熟

受精卵母細(xì)胞。白消安組和對照組卵巢無明顯病理改變。

2.2 35%半乳糖食物顆粒誘導(dǎo)POF模型

通過實(shí)驗(yàn)顯示，35%半乳糖組大鼠的生長速率明顯低于標(biāo)準(zhǔn)食物顆粒，隨時間推移兩組間的體重差異明顯擴(kuò)大，終止時體重存在顯著差異（P<0.05）。血液檢查顯示35%半乳糖組的半乳糖，白蛋白和總蛋白血清濃度水平顯著。給藥前，給藥14天后1周和2周，處理組與對照組之間的體重?zé)o明顯差異。另外，F(xiàn)SH和E2的血清濃度水平?jīng)]有差異，但LH的血清濃度水平較對照組顯著增加（P<0.05）。

3 討 論

近年來，POF模型研究越來越受到重視，盡管不同誘導(dǎo)劑引發(fā)POF的機(jī)制不盡相同，但最終都應(yīng)包括相關(guān)激素變化和卵巢損傷。目前常用的POF動物模型由環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)。此外35%半乳糖食物丸也可以產(chǎn)生大鼠明顯的POF。不同誘導(dǎo)物可產(chǎn)生不同特征的POF動物模型，可為POF進(jìn)一步研究提共客觀有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬麗靈，阮祥燕.100例卵巢早衰相關(guān)因素的調(diào)查分析[J].中國實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2009，（04）.

[2] 張茜蒻，秦瑩瑩.卵巢早衰遺傳學(xué)病因研究進(jìn)展[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志.2015，（08）.

本文編輯：吳宏艷