柴胡皂苷A對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)子癇前期大鼠模型的影響

楊永康，張淼芳，楊 靜，張 婷

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000)

子癇前期是一種妊娠期特發(fā)疾病，雖然發(fā)病率不高，卻嚴(yán)重影響孕婦及胎兒的健康。母體、胎盤(pán)及胎兒等諸多因素都有可能參與子癇前期的發(fā)生，而氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)作為子癇前期發(fā)病的重要潛在因素近年來(lái)受到學(xué)者的廣泛關(guān)注，如何通過(guò)抑制氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)減少子癇前期的發(fā)生是目前研究的熱點(diǎn)[1-3]。柴胡皂苷A(SSA)是中藥柴胡的主要提取物，其能夠抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制內(nèi)毒素(LPS)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，降低LPS的動(dòng)物毒性作用[4-6]；能夠調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，而對(duì)免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)是其潛在的機(jī)制[7-8]。本研究觀察了SSA對(duì)LPS誘導(dǎo)子癇前期大鼠模型的影響，旨在為子癇前期的預(yù)防治療提供更多依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 40只10周齡雌性SD大鼠，購(gòu)買并飼養(yǎng)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK2007-001。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 試驗(yàn)方案通過(guò)陜西中醫(yī)藥大學(xué)及西安交通大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。待雌性大鼠處于發(fā)情期時(shí)，與同處發(fā)情期健壯雄性SD大鼠1∶1配對(duì)過(guò)夜。次日檢測(cè)雌鼠陰道精子作為受孕成功的標(biāo)志，記錄為受孕第1天。40只雌性大鼠中共計(jì)受孕33只，將33只受孕大鼠按完全隨機(jī)法分成空白組、LPS組和LPS+SSA組，每組11只。受孕第5天，測(cè)每只受孕鼠體質(zhì)量與血壓。自受孕第5天始，空白組尾靜脈注射2 mL生理鹽水，LPS組尾靜脈注射0.5 mg/kg LPS(購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)溶液2 mL，LPS+SSA組尾靜脈注射0.5 mg/kg LPS和20 mg/kg SSA(購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)混合溶液2 mL，均1次/d，至受孕第18天。

1.3檢測(cè)指標(biāo) ①注射結(jié)束后，使用尾套法測(cè)量各組孕鼠8:00—10:00收縮壓和舒張壓，測(cè)血壓前先將孕鼠置于38 ℃環(huán)境中，待大鼠適應(yīng)環(huán)境后每只孕鼠連續(xù)監(jiān)測(cè)血壓15次，連續(xù)3次血壓值差異在6 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)內(nèi)記錄為有效血壓。②收集干預(yù)最后一天20:00—10:00每只孕鼠的總尿液，收集前將孕鼠置于獨(dú)立的代謝籠中，期間禁食。③測(cè)量每只孕鼠體質(zhì)量，之后腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg麻醉孕鼠，手術(shù)分離子鼠并測(cè)量每只子鼠體質(zhì)量。孕鼠體質(zhì)量變化計(jì)算公式：體質(zhì)量變化=受孕第18天體質(zhì)量-子鼠體質(zhì)量-受孕第5天體質(zhì)量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Photoshop 5.0作圖，采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件、以單因素方差法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組孕鼠血壓比較 LPS組收縮壓和舒張壓均明顯高于空白組(P均<0.05)，提示子癇前期模型建立成功；LPS+SSA組收縮壓和舒張壓均明顯低于LPS組(P均<0.05)，與空白組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)圖1及圖2。

圖1 各組孕鼠收縮壓比較

2.2各組孕鼠尿蛋白量比較 LPS組尿蛋白量明顯高于空白組(P<0.05)，而LPS+SSA組尿蛋白量明顯低于LPS組(P<0.05)，與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖3。

圖2 各組孕鼠舒張壓比較

圖3 各組孕鼠尿蛋白量比較

2.3各組孕鼠及子鼠體質(zhì)量比較 3組間孕鼠體質(zhì)量變化比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，見(jiàn)圖4；LPS組子鼠體質(zhì)量明顯低于空白組(P<0.05)，LPS+SSA組子鼠體質(zhì)量明顯高于LPS組(P<0.05)，與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖5。

圖4 各組孕鼠體質(zhì)量變化比較

圖5 各組子鼠體質(zhì)量比較

3 討 論

LPS誘導(dǎo)的子癇前期大鼠模型因?yàn)椴僮骱?jiǎn)便，造模成功率高而廣泛用于子癇前期的研究。雖然炎癥并不是子癇前期發(fā)生的唯一原因，而且LPS誘導(dǎo)的子癇前期模型僅能夠表現(xiàn)出部分子癇前期表型，但此模型對(duì)于研究子癇前期中異常炎癥反應(yīng)與炎癥信號(hào)的傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)化機(jī)制具有重要意義[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)LPS誘導(dǎo)后孕鼠收縮壓、舒張壓、尿蛋白量均明顯升高，子鼠體質(zhì)量明顯降低，提示子癇前期模型建立成功。

中藥柴胡具有抗炎、止痛及清熱的藥效，廣泛用于臨床。SSA作為柴胡的主要提取物，其能夠通過(guò)抑制ERK/NF-κB信號(hào)通路，顯著下調(diào)IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性因子的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)[11-13]；其還能夠調(diào)節(jié)煙酸、煙酰胺以及花生四烯酸代謝，具有明確的抑制炎癥的潛在分子基礎(chǔ)[14]。但SSA是否能夠通過(guò)抑制炎癥抑制子癇前期的發(fā)生目前并不清楚。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPS+SSA組孕鼠血壓及尿蛋白量均明顯低于LPS組，而子鼠體質(zhì)量明顯高于LPS組，且均與空白組相近； 3組間孕鼠體質(zhì)量變化比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示LPS造模對(duì)母體無(wú)明顯影響，但顯著影響胎鼠的生長(zhǎng)與發(fā)育，而SSA能夠抑制LPS誘導(dǎo)的血壓及尿蛋白升高，抑制子癇前期的發(fā)生，為將來(lái)SSA應(yīng)用于臨床預(yù)防或治療子癇前期提供了理論基礎(chǔ)。但SSA是如何抑制LPS所誘導(dǎo)的子癇前期的發(fā)生尚不清楚，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

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