腫瘤轉移抑制基因TIP3在膀胱尿路上皮癌組織中的表達及臨床意義

應亞君 韓子華 柯 莽

1.浙江省臺州市腫瘤醫(yī)院病理科，浙江臨海 317500；2.浙江省臺州恩澤醫(yī)療中心（集團）恩澤醫(yī)院泌尿科，浙江臺州 318050

腫瘤的侵襲和轉移是衡量其惡性程度的主要因素，是引起患者死亡的主要原因之一，其受多基因與多因素的影響與調控，尤其與多種腫瘤抑制基因的表達失調密切相關[1,2]。TIP30是一種近年來新發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉移抑制基因，位于人類第11號染色體短臂端11P15.1上，其主要作用是抑制腫瘤的轉移和生長，在多種腫瘤細胞中表達降失或表達相對較弱，但國內有關TIP30在膀胱癌中的表達報道較少[3-7]。本文旨在探討腫瘤轉移抑制基因TIP3在膀胱尿路上皮癌組織中的表達及臨床意義，探討其在膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展中的作用。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2017年6月我院病理科存檔的膀胱尿路上皮癌蠟塊共50例。納入病例均有完整臨床資料，且經(jīng)術后病理證實。其中男38例，女12例；年齡 37～84 歲，平均（67.4±5.9）歲；浸潤性 16 例，非浸潤性34例；初發(fā)32例；復發(fā)18例。另選取膀胱尿路上皮癌的癌旁組織（距腫瘤緣3～5 cm）30例作為對照組，其中男23例，女7例；年齡38～80歲，平均（66.7±5.4）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 免疫組化檢測

采用En Vision二步法免疫組化檢測，將石蠟包埋的標本連續(xù)4 μm切片，5%羊血清37℃封閉2 h減少非特異性背景，采用檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓抗原修復，滴加TIP30單克隆一抗工作液4℃孵育過夜，PBS沖洗后加入二抗En Vision試劑室溫下孵育1 h，PBS沖洗，滴加新鮮配置DAB顯色，Mayer蘇木素復染細胞核襯染，水洗、烤干、中性樹封片和鏡檢。試劑公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。TIP30單克隆抗體、En Vision二步法免疫組化試劑盒（通用型）購買自北京中杉生物公司。

1.3 觀察指標

觀察膀胱尿路上皮癌與癌旁組織中TIP30表達的差異，并分析膀胱尿路上皮癌組織中TIP30表達與病理特征關系。

1.3.1 免疫組化結果判斷 以胞膜或胞質出現(xiàn)棕黃色顆粒為TIP30陽性細胞，陰性對照組除細胞核染成藍色外應無棕黃色反應物。按照高倍鏡視野下細胞染色強度與陽性細胞比例綜合評分，其中陽性細胞根據(jù)染色強度：無色、淺黃色、棕黃色和棕褐色分別為0、1、2和3分；顯色細胞比例：陰性、比例≤10%、比例11%～30%、比例31%～60%和比例≥61%分別為0、1、2和3分。上述兩項分值的乘積≥2分判定TIP30表達（+），否則 TIP30 表達（-）[8]。

1.3.2 TIP30表達與病理特征關系 包括性別、年齡、腫瘤是否復發(fā)、浸潤深度和病理分級等。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 17.0軟件包，計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30基因表達比較

50例膀胱尿路上皮癌中TIP30表達陽性17例（34.00%），大部分為淺黃色顆粒，少部分為棕黃色顆粒。30例癌旁組織TIP30表達陽性28例（93.33%），大部分為棕褐色和棕黃色顆粒，少部分為淺黃色顆粒。膀胱尿路上皮癌標本中TIP30的陽性率低于癌旁組織（χ2=26.82，P<0.01）。

2.2 膀胱尿路上皮癌中TIP30基因表達與病理特征關系

膀胱尿路上皮癌組織中TIP30基因表達與性別、年齡與腫瘤是否復發(fā)等病理特征無關（P>0.05），與浸潤深度和病理分級等密切相關（P<0.05）。見表1。

表1 膀胱尿路上皮癌組織中TIP30基因表達與病理特征關系

3 討論

TIP30基因是2007年由國外學者首先報道的一種與腫瘤轉移抑制相關的基因，其蛋白編碼產(chǎn)物是一種分子量為30 kDa的TIP30蛋白[8-10]。大量的報道顯示，TIP30基因主要通過促進細胞凋亡和抑制血管新生來抑制腫瘤細胞轉移，一方面，TIP30基因是一種轉錄輔助因子，具有絲/蘇氨酸激酶活性，可以和 RNA聚合酶Ⅱ最大亞基結合并磷酸化其C末端的七肽重復基序，在特定生理病理環(huán)境下調節(jié)細胞凋亡和血管生成相關基因的表達，從而促進細胞凋亡和抑制腫瘤轉移[11-14]；另一方面，TIP30基因能夠以 RanG TP非依賴形式直接與Import in β家族成員及核孔蛋白相結合，抑制核轉運蛋白的功能，通過抑制核物質輸入促進細胞凋亡來發(fā)揮抑癌作用[15-17]。TIP30基因在胃癌、腸癌、黑色素瘤、成神經(jīng)細胞瘤、惡性膠質細胞瘤、乳腺癌等癌中的表達較弱或無明顯表達，明顯低于正常的人體組織中的表達，提示TIP30基因參與了大多數(shù)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉移的過程[18]。

膀胱癌是我國尿路系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其中90%以上為膀胱尿路上皮癌，其發(fā)生、發(fā)展是一個多基因、多步驟的過程，近年來TIP30基因在膀胱癌中的表達及作用越來越受到臨床的重視。李文華等[19]研究發(fā)現(xiàn)膀胱移行細胞癌組織中TIP30基因表達明顯下降，且與發(fā)生、發(fā)展、轉移和浸潤等密切相關。陜光等[20]研究發(fā)現(xiàn)抑癌基因TIP30基因在膀胱尿路上皮癌中呈低表達，而在癌旁組織中呈高表達，與其腫瘤浸潤深度、分化程度和臨床分期密切相關。我們通過采用免疫組織化學的方法檢測了膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30表達的差異，研究發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌標本中TIP30的陽性率明顯低于癌旁組織。提示膀胱尿路上皮癌中TIP30基因表達存在明顯下調趨勢，其表達下調或失表達極有可能促進膀胱尿路上皮癌的發(fā)生和發(fā)展。同時研究發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌組織中TIP30基因表達與浸潤深度和病理分級等病理特征明顯相關。提示膀胱尿路上皮癌中TIP30基因的表達與其惡性程度與浸潤深度呈負相關，可能參與其病情的轉移和浸潤的過程。臨床上需進一步研究TIP30基因與膀胱尿路上皮癌其它生物學指標的關系及其相互作用機制，有助于了解膀胱尿路上皮癌發(fā)病的分子生物學機制，進而指導臨床治療，以期為膀胱癌的基因靶向治療提供理論依據(jù)[21]。

總之，膀胱尿路上皮癌中TIP30基因的表達存在明顯下調趨勢，其表達下調或失表達極有可能促進膀胱尿路上皮癌的發(fā)生和發(fā)展，并與其惡性程度與浸潤深度呈負相關，參與其病情的轉移和浸潤的過程，有望成為膀胱尿路上皮癌基因診斷及靶向治療的新靶點。但本研究的樣本量偏少，且未對TIP30基因的RNA進行檢測，實驗內容可能存在一定的偏差。

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