竹葉與松針黃酮提取液對(duì)橄欖果實(shí)的保鮮效果

葉清華 李澤坤 張舒婷 周相助 謝倩 陳清西

摘? 要? 提取箬竹和馬尾松葉片總黃酮作為天然保鮮劑用于橄欖浸泡處理，以研究竹葉和松針黃酮提取液對(duì)橄欖果實(shí)的保鮮效果。結(jié)果表明，不同濃度的竹葉和松針黃酮提取液均能對(duì)橄欖果實(shí)起到一定的保鮮作用，其中393 mg/L竹葉黃酮提取液、330 mg/L松針黃酮提取液處理的橄欖果實(shí)好果率均高于對(duì)照，貯藏第77天時(shí)，橄欖好果率分別為76.11%、78.89%。2種處理均可延緩果實(shí)可溶性總糖含量下降，促進(jìn)多酚含量下降，提高橄欖果實(shí)的糖酚比，能有效改善橄欖果實(shí)貯藏期內(nèi)的鮮食品質(zhì)。

關(guān)鍵詞? 橄欖;竹葉;松針;黃酮;提取液;貯藏保鮮中圖分類號(hào)? TS255.3;S667.5 ?????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A

DOI10.3969/j.issn.1000-2561.2018.12.022

橄欖[Canarium album（Lour.）Raeusch.]系橄欖科橄欖屬，是我國(guó)的亞熱帶特色水果，含有豐富的氨基酸、脂肪酸、糖類、維生素、礦物質(zhì)和膳食纖維等營(yíng)養(yǎng)成分^[1]。已鑒定了橄欖果實(shí)中含有多糖^[2-3]、多酚^[4-5]、類黃酮和萜類^[1]等多種抗氧化活性成分，可作為治療糖尿病^[6]、艾滋病^[7]的天然產(chǎn)物。作為福建省名特優(yōu)水果，橄欖已成為逢年過(guò)節(jié)的常備佳果，市場(chǎng)對(duì)鮮食橄欖的需求量也越來(lái)越大，其價(jià)格能達(dá)到采收期的2～5倍^[8]。橄欖鮮食品質(zhì)評(píng)價(jià)的主要內(nèi)容為外觀和口感。林玉芳^[9]對(duì)福建省20個(gè)橄欖品種（系）相關(guān)鮮食品質(zhì)因子進(jìn)行研究，提出多酚、總糖、含水率等是評(píng)價(jià)橄欖鮮食品質(zhì)的主要指標(biāo)，且糖酚比高，較適宜橄欖鮮食。而池毓斌^[10]提出鮮食橄欖綜合評(píng)價(jià)模型為Y=0.417×總酚+0.417×總糖+0.109×可滴定酸+0.056×總氨基酸，以總酚和總糖為重要評(píng)價(jià)指標(biāo)。但由于橄欖果皮薄，采后易失水皺縮，發(fā)生酶促褐變和細(xì)菌性腐爛^[11]，在貯運(yùn)過(guò)程中容易引發(fā)曲霉病、橄欖疫病等病害^[12]，導(dǎo)致橄欖質(zhì)量損失、貨架期變短，嚴(yán)重制約了橄欖市場(chǎng)的發(fā)展。因此，橄欖的貯藏保鮮顯得尤為重要。

橄欖貯藏保鮮多采用竹簍貯藏、缸藏、塑料薄膜袋貯藏等傳統(tǒng)的物理保鮮方法或涂用化學(xué)藥劑進(jìn)行保鮮，主要有防腐劑（如混合殺菌劑+20 ppm GA₃）、涂膜劑（如1.0%黃原膠+20 ppm GA₃）和保鮮劑（如25%抑霉唑乳油劑1 mL/L+增效劑20 mg/L）^[13-14]。橄欖的貯藏常采用低溫貯藏，如8 ℃冷庫(kù)貯藏^[15]或冷激處理[（1.5± 0.5） ℃]后貯藏于25 ℃環(huán)境中^[16]，這需要冷庫(kù)條件，且在實(shí)際貨架期間溫濕度變化不一。隨著人們對(duì)綠色食品的推崇，開(kāi)發(fā)天然、安全、經(jīng)濟(jì)的保鮮方法被日益重視，天然植物提取液也逐漸被用于果實(shí)保鮮，其所含有的抑菌有效成分，如黃酮類化合物^[17-18]，抑菌、抗病毒活性強(qiáng)，可有效地控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，調(diào)節(jié)整個(gè)植株和各個(gè)器官的發(fā)育^[19-20]。植物黃酮提取液在梨^[21]、李^[22]、番茄^[23]等均有應(yīng)用，小葉女貞黃酮提取液也用于橄欖保鮮^[24]。研究表明^[25-27]，竹葉中的黃酮類物質(zhì)較為豐富，主要為糖苷類黃酮化合物，在多種自由基的清除作用上具有明顯的效果^[28]。而松樹(shù)在我國(guó)南北地區(qū)分布廣泛，含有具抗氧化作用的松針黃酮^[29-30]，對(duì)腫瘤細(xì)胞有一定抑制作用^[31]，《本草綱目》也曾記載其藥用功效^[32]。但竹葉與松針作為林木樹(shù)種，葉片中的有效功能成分未得到充分利用。因此，本研究提取竹葉與松針的總黃酮，作為天然保鮮劑處理橄欖果實(shí)，模擬貨架期室溫貯藏，研究其對(duì)橄欖保鮮效果的影響，對(duì)于延長(zhǎng)橄欖貨架壽命、提高橄欖鮮食品質(zhì)具有重要意義。

1? 材料與方法

1.1? 材料

供試材料箬竹（Indocalamus tessellates（munro） Keng f.）、馬尾松（Pinus massonianaLamb.）采自福建農(nóng)林大學(xué)校園，選擇新鮮、無(wú)病蟲(chóng)害葉片，洗凈、烘干，粉碎至60目，置于–40 ℃冰箱中備用。保鮮采用成熟橄欖果實(shí)，采自福建省福州市閩侯縣城關(guān)農(nóng)場(chǎng)，品種為‘長(zhǎng)營(yíng)。挑取大小一致、無(wú)病蟲(chóng)害及機(jī)械損傷的鮮果，清洗、晾干備用。

試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、NaNO₂、Al（NO₃）₃、NaOH、蒽酮、沒(méi)食子酸均為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

儀器：KQ-600DE數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司;DK-S24型電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)Thermo公司;EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本東京理化;TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;PAL-3數(shù)顯手持式折光計(jì)，日本ATAGO公司;LGJ-25C型冷凍干燥機(jī)，北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司。

1.2? 方法

1.2.1? 竹葉與松針總黃酮粗提液制備 ?竹葉與松針總黃酮采用前期優(yōu)化工藝進(jìn)行提取。竹葉總黃酮采用超聲法^[33]提取：準(zhǔn)確稱取一定量的竹葉粉末，按液固比35∶1（mL/g）加入90%乙醇，360 W超聲提取75 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液，即得總黃酮提取液。松針總黃酮采用水浴法提取，準(zhǔn)確稱取一定量的松針?lè)勰?，按液固?0∶1（mL/g）加入50%乙醇、70 ℃水浴提取2.0 h，10 000 r/min離心5 min，取上清液，即得總黃酮粗提液。采用亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法^[34]測(cè)定各粗提液的總黃酮含量。

1.2.2? 橄欖保鮮處理? 提取大量竹葉與松針總黃酮提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，按提取方法中的液固比用雙蒸水溶解作為母液，測(cè)得的總黃酮濃度分別為786、2 640 mg/L，然后將母液稀釋成2、4、8倍的黃酮稀釋液，用于橄欖果實(shí)浸果保鮮，同時(shí)以雙蒸水處理為對(duì)照（表1）。隨機(jī)挑選橄欖果實(shí)分為2組：一組用于好果率觀測(cè)，另一組用于指標(biāo)測(cè)定。每組每處理60個(gè)果，3次重復(fù)，分別放入配制好的總黃酮稀釋液中浸泡10 min，取出后自然晾干，裝入正反兩面均用注射器均勻扎20個(gè)孔的PE保鮮袋，將橄欖果實(shí)模擬貨架期室溫貯藏。

1.2.3? 橄欖果實(shí)貯藏保鮮過(guò)程中品質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定? （1）好果率觀測(cè)。橄欖貯藏保鮮采后第一周容易發(fā)生各種變化^[8]。保鮮袋內(nèi)若出現(xiàn)“結(jié)露”現(xiàn)象，及時(shí)將袋內(nèi)水分擦干后再封好袋口。橄欖果實(shí)感官測(cè)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)如表2所示，根據(jù)林河通等^[13]的研究，以較好等級(jí)作為篩選好果標(biāo)準(zhǔn)，剔除變質(zhì)、腐爛果。計(jì)算好果率，好果率（%）=貯藏后好果數(shù)量/貯藏前果實(shí)數(shù)量×100。

（2）品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定。每處理隨機(jī)選取5顆橄欖果實(shí)，3次重復(fù)，切取果肉經(jīng)凍干、粉碎，過(guò)40目篩，進(jìn)行品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定。采用蒽酮比色法^[35]測(cè)定可溶性糖含量，紫外分光光度法^[36]測(cè)定橄欖多酚含量。計(jì)算糖酚比，糖酚比=可溶性總糖含量/多酚含量。

1.3? 數(shù)據(jù)處理

每處理均重復(fù)3 次，用Excel 2007處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 竹葉與松針黃酮提取液對(duì)橄欖好果率的影響

橄欖果實(shí)模擬貨架期貯藏的溫濕度變化如圖1所示。橄欖果實(shí)在貯藏過(guò)程中，色澤變化不大，光澤度和飽滿度略有降低，后期果實(shí)皮表略微皺縮（圖2）。如表3所示，竹葉總黃酮提取液中Z1、Z2處理橄欖的保鮮效果較好。貯藏69 d時(shí)，Z1、Z2處理好果率為81.11%，但與CK好果率78.33%差異不顯著;貯藏77 d時(shí)，Z1處理好果率為76.11%，比對(duì)照高6.67%。而松針總黃酮提取液中以S2、S3處理對(duì)橄欖的保鮮效果較好。貯藏69 d時(shí)，好果率分別為85.00%、84.44%，顯著高于CK（p<0.05）;貯藏77 d時(shí)，S3處理的好果率最高，為78.89%，比對(duì)照高9.45%，且差異顯著（p<0.05）。因此，Z1、S2、S3松針黃酮提取液均可在一定程度上保持橄欖好果率，有利于延長(zhǎng)

2.2? 竹葉與松針黃酮提取液對(duì)橄欖可溶性總糖影響

可溶性總糖與果實(shí)風(fēng)味密切相關(guān)。在貯藏期間，橄欖果實(shí)可溶性總糖變化趨勢(shì)基本一致，隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)。如圖3所示，在貯藏期內(nèi)，Z1～Z3可溶性總糖含量下降幅度小于CK，貯藏77 d時(shí)，Z1、Z2、Z3處理的橄欖果實(shí)可溶性總糖含量分別為7.46%、7.46%、7.92%，較CK高，但各處理差異不顯著。在貯藏前期（7 d），S3可溶性總糖含量的下降幅度大于CK，后期逐漸減緩且低于CK，貯藏77 d時(shí)，可溶性總糖含量最高為8.17%，顯著高于對(duì)照6.50%（p<0.05）。因此，Z1、Z2、Z3處理均能減緩橄欖果實(shí)在貯藏期間可溶性總糖含量的下降，S3處理在長(zhǎng)期貯藏中效果較好。

2.3? 竹葉與松針黃酮提取液對(duì)橄欖多酚含量影響

多酚含量與橄欖鮮食品質(zhì)密切相關(guān)，影響橄欖鮮食苦澀味。如圖4所示，各處理的橄欖果實(shí)多酚含量變化趨勢(shì)相似，貯藏前19 d，多酚含量均呈上升趨勢(shì)，而后迅速下降，在37 d后又呈現(xiàn)迅速上升趨勢(shì)，在第49天時(shí)達(dá)到峰值，而后緩慢下降，各處理差異不顯著。貯藏77 d時(shí)，除了Z3與S2，其他處理果實(shí)多酚含量均較CK多酚含量（7.02%）低，其中Z1處理橄欖多酚含量最低，僅為6.46%;S3處理為6.83%，亦能降低橄欖果實(shí)多酚含量，降低苦澀味。

2.4? 竹葉與松針黃酮提取液對(duì)橄欖果實(shí)糖酚比影響

如圖5所示，貯藏期間，橄欖糖酚比值均呈下降趨勢(shì)，相較于對(duì)照，不同提取液均可在一定程度上延緩橄欖果實(shí)糖酚比下降趨勢(shì)。貯藏77 d時(shí)，竹葉總黃酮提取液中以Z1效果最佳，糖酚比為1.16;松針總黃酮提取液以S3效果最佳，糖酚比為1.20，顯著高于對(duì)照的0.94（p<0.05），對(duì)改善橄欖果實(shí)鮮食品質(zhì)的效果較好。

3? 討論

隨著人們對(duì)食品安全性的日益重視，化學(xué)藥劑保鮮逐漸受到抵制，天然保鮮劑的開(kāi)發(fā)利用越來(lái)越受到重視，其克服了傳統(tǒng)保鮮方法成本高、難操作、危害大的缺點(diǎn)^[37]。例如，甘草和連翹的提取液對(duì)桃具有一定的保鮮作用^[38];銀杏葉黃酮能夠抑制微生物活性，減少褐變，有利于蘋果的保鮮^[39];小花鬼針草黃酮能減緩草莓腐壞速度、減慢維生素C和可溶性固形物的降解^[40];銀杏黃酮提取液結(jié)合D-VCNa能減緩鮮切碭山梨的呼吸強(qiáng)度、延遲POD活性高峰、抑制果實(shí)pH和相對(duì)電導(dǎo)率的上升^[21];橙皮黃酮提取物通過(guò)抑制呼吸高峰，延緩維生素C和可滴定酸下降，延長(zhǎng)了番茄的貨架壽命^[23]。而竹葉、松針亦含有豐富的黃酮類化合物^[41-42]，松針黃酮具有抑菌、抗氧化和降血脂等作用^[43-44]，竹葉黃酮清除羥自由基的效果與茶多酚相當(dāng)，具有很強(qiáng)的抗氧化能力^[28]。本研究采用安全無(wú)毒的竹葉、松針天然黃酮提取液處理橄欖果實(shí)，取得了良好的保鮮效果，好果率高，并且果實(shí)顏色鮮綠。提取液中的黃酮是一種多酚類物質(zhì)，能破壞微生物細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性，使微生物細(xì)胞釋放胞內(nèi)成分造成膜的電子傳遞、核苷酸合成等功能失調(diào)，從而起到抑菌作用^[23]。同時(shí)作為抗氧化劑，對(duì)ROS自由基具有較強(qiáng)的清除能力，對(duì)調(diào)節(jié)抗氧化酶在抗氧化防御系統(tǒng)中的作用具有重要意義，通過(guò)降低果實(shí)中酶的活力以達(dá)到減緩微生物活動(dòng)、降低果實(shí)的生理活性強(qiáng)度的效果，進(jìn)而起到保鮮作用^[45-46];延緩了橄欖果實(shí)可溶性總糖含量下降，促進(jìn)多酚含量下降，提高糖酚比，改善了橄欖果實(shí)的鮮食品質(zhì)。與傳統(tǒng)的藥劑洗果保鮮法相比，解決了好果率低、風(fēng)味欠佳、殘留藥劑的弊端，且操作更簡(jiǎn)單、成本低、綠色安全，實(shí)現(xiàn)了竹葉和松針的再利用，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

但本研究?jī)H為植物黃酮粗提液，含有多種成分，通過(guò)浸泡處理在橄欖表面形成保護(hù)膜，抑菌作用及保鮮效果與提取液的成分、純度、pH、貯藏溫度等因素相關(guān)，不同病菌的受抑制濃度也有所不同^{[43， 47]}。本研究中高濃度的松針提取液的保鮮效果不如低濃度提取液，與王曉君等^[23]研究類似，有可能是由于提取液中含有較多的多糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，在室溫條件下反而更易滋生病害，不利于橄欖保鮮。后續(xù)研究可圍繞竹葉、松針其他濃度的黃酮提取液或不同提取液按不同比例組合，或者對(duì)總黃酮中發(fā)揮保鮮作用的具體組分進(jìn)一步提取、純化、稀釋后的研究展開(kāi)，對(duì)抗氧化、抑菌等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行深入研究以確定其保鮮的作用機(jī)理。

4? 結(jié)論

竹葉和松針黃酮提取液作為天然的抑菌劑，對(duì)橄欖果實(shí)均有一定的保鮮效果。本研究表明，竹葉黃酮提取液以393 mg/L濃度保鮮效果最佳，松針黃酮提取液以330 mg/L濃度處理效果最佳，使橄欖果實(shí)貨架期貯藏至77 d時(shí)，仍能保持較高的好果率（分別為76.11%、78.89%），且能維持橄欖果實(shí)風(fēng)味品質(zhì)。

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