金線蘭生根培養(yǎng)正交試驗

黃勇 張鐵 陳秋宏

摘 要 用金線蘭試管苗作為試驗材料，以基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、活性炭4因素3水平進行正交試驗。結(jié)果表明，在“1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ AC 1.0 g·L-1”培養(yǎng)基中，生根率達90.87%，生根效果佳。

關(guān)鍵詞 金線蘭；生根；組織培養(yǎng)；正交試驗

中圖分類號：Q813.1 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.1.030

金線蘭（Anoectochilus roxburghii）別名花葉開唇蘭、金線蓮等，是蘭科開唇蘭屬一種多年生草本植物，因其葉脈呈金紅色而得名[1]。金線蘭是我國傳統(tǒng)的珍貴藥材，享有“金草”“神藥”“烏人參”“藥王”等美譽。其種子自然條件下極難萌發(fā)，由于長期采挖，野生種質(zhì)資源稀缺。通過組織培養(yǎng)技術(shù)可對其進行搶救性保護[2～16]。組培苗是否具有良好的根系是成敗的關(guān)鍵，但目前對金線蘭組培苗生根培養(yǎng)的研究較少，且大多都是基于單因素進行分析與描述，難以確定最佳分析條件的精度。本試驗在已有的研究基礎(chǔ)上，以金線蘭組培苗為外植體，著重研究基本培養(yǎng)基、生長素（IBA、NAA）、活性炭（AC）對生根的影響，應(yīng)用L9（34）設(shè)計正交試驗對金線蘭生根培養(yǎng)基進行優(yōu)化選擇，不僅可以精簡試驗次數(shù)、克服培養(yǎng)基配方設(shè)計的盲目性，還可以大大提高工作效率和試驗的可靠性，以期找出最佳生根配比方案，為改善金線蘭快速繁殖條件提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以文山學(xué)院組培實驗室培養(yǎng)的金線蘭組培苗為材料，挑選生長健壯、整齊一致的組培苗作為試驗材料。

1.2 研究方法

1.2.1 正交試驗設(shè)計

對基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、活性炭4個因素分別選取3水平進行正交設(shè)計L9（34），研究其對金線蘭組培苗生根的影響，試驗因素及水平列于表1。

運用正交設(shè)計共形成表2的9個處理。

每個處理添加蔗糖30 g·L-1、瓊脂7 g·L-1，pH值調(diào)至5.8。

1.2.2 接種與培養(yǎng)

將金線蘭組培苗切成帶有1個節(jié)、1.5～2.0 cm長的莖段，分別接種到上述9個處理的生根培養(yǎng)基中，每個處理接種13瓶，每瓶接種9個外植體，放置在培養(yǎng)溫度為25 ℃，光照強度為1 000 lx，光照時間為10 h·d-1條件下進行生根培養(yǎng)。每7 d觀察1次生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 生根情況

培養(yǎng)21 d左右，金線蘭莖段開始長根，隨后根的數(shù)量進一步增多，并逐漸伸長。56 d左右，植株長勢良好，苗粗壯，培養(yǎng)基底部可見大量根，平均根長1～2 cm，其表面被大量絨毛，較粗壯。在不同的生根培養(yǎng)基中，組培苗形成根的數(shù)量與根的長度不一。其中，最佳的生根培養(yǎng)基為處理A3B2C1D3（即1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+AC 1.0 g·L-1），根數(shù)最多，平均為2.8；根最長，平均達1.46 cm。

2.2 生根率極差分析

對不同處理的金線蘭組培苗生根率進行極差分析，如表3所示。

由極差R的大小可以看出，4因素對金線蘭組培苗生根率影響的大小順序為：A>B>D>C。

由K值大小可以看出，各因素3水平對生根率影響的主次順序分別為：A3>A2>A1， B3>B2>B1，C2>C3>C1，D3>D2>D1，即誘導(dǎo)金線蘭組培苗生根的最佳組合是A3B3C2D3，這與生根率最高（90.87%）的組合A3B2C1D3不一致，可能是2種生長素（IBA和NAA）相互作用所致，故需對IBA和NAA進行交互效應(yīng)檢驗。

2.3 IBA、NAA交互效應(yīng)檢驗

對IBA和NAA作交互效應(yīng)檢驗，如表4所示。

從表4可以看出，IBA*NAA的Sig<0.01，說明IBA和NAA之間對試管苗生根率存在極顯著的交互作用。

2.4 不同因素對金線蘭組培苗生根率方差分析

生根率在組培中是一個重要指標，且生根率和根數(shù)成正相關(guān)。為了更好地反應(yīng)各因子對金線蘭生根影響作用的差異，以便尋求最佳生根培養(yǎng)基組合，對試驗結(jié)果作方差分析，如表5所示。

由表5可以看出，基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、AC的Sig值均小于0.01，說明4個因素對組培苗生根率均具有極顯著的影響。

3 結(jié)論與討論

在已有研究基礎(chǔ)之上，對影響金線蘭生根培養(yǎng)的主要因素進行正交試驗。MS培養(yǎng)基被廣泛用于植物組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)植物生根的時候多降低其大量元素濃度，本試驗中大量元素減半最適合金線蘭組培苗生根。誘導(dǎo)植物生根常用IBA和NAA兩種生長素，一般說來，IBA可誘導(dǎo)出較多的根，而NAA可誘導(dǎo)出較粗的根。本試驗將合理濃度的IBA、NAA搭配使用，取得了較高生根率?；钚蕴靠纱龠M試管苗生根，本試驗亦如此。4因素對生根率影響的主次順序為：基本培養(yǎng)基>IBA>活性炭>NAA，均具有極顯著的作用，且IBA和NAA之間存在極顯著的相互影響。通過正交試驗，篩選出誘導(dǎo)金線蘭組培苗生根的最佳培養(yǎng)基為“1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ AC 1.0 g·L-1”，誘導(dǎo)率達90.87%，且根較粗壯。

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（責(zé)任編輯：丁志祥）