養(yǎng)豬場5種常見疫苗不同組合的免疫效果研究

熊忠良 溫文生 史小娜 丁凡 程敏華 楊純杰 王肆玖 呂長軍

摘要?[目的]優(yōu)化免疫接種程序，減少疫苗接種次數(shù)以及減輕豬場疫苗接種工作量。[方法]對豬瘟、豬藍耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病以及豬喘氣病5種豬場常見豬病的疫苗按照不同組合采用混合注射、分點注射以及單苗注射等接種方式進行免疫試驗。[結(jié)果]通過田間16輪次的重復(fù)試驗和效果觀察發(fā)現(xiàn)，3種不同免疫方式對豬群不同時期的抗體水平、日增重以及育成率等沒有顯著差異。[結(jié)論]5種疫苗不同組合混合接種在臨床上具有可行性，為豬場因地制宜地制定免疫程序提供參考。

關(guān)鍵詞?疫苗;不同組合;免疫效果

中圖分類號?S858.28文獻標(biāo)識碼?A文章編號?0517-6611（2018）33-0061-04

豬瘟（CSF）、藍耳?。≒RRS）、豬偽狂犬（PR）、豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）以及豬支原體肺炎（MPS，又稱“喘氣病”）是我國豬場臨床最常見的5種傳染性疾病。為了預(yù)防以上疾病，豬場通常采用疫苗免疫接種，但由于豬場豬病復(fù)雜繁多，需要接種的疫苗也很多，往往在制訂免疫程序時發(fā)生時間上的沖突，另外在免疫接種時需要多次注射，這樣不但會造成豬群的多次應(yīng)激，不利于豬的生長，而且增加了防疫人員的工作量。為了減少免疫接種次數(shù)，又能達到同樣的免疫效果，筆者在一普通規(guī)?；B(yǎng)豬場的商品豬群中將豬瘟等五種豬病疫苗按照不同組合進行免疫接種試驗。

1?材料與方法

1.1?試驗地點

湖北漢川市某規(guī)?；i場，生產(chǎn)母豬800頭，自繁自養(yǎng)，封閉式管理，豬群總體健康狀況良好，為CSF陰性豬場。雖然該場是PRRSV陽性豬場，部分母豬也檢測到PRVgE-Ab陽性，但各項生產(chǎn)成績和技術(shù)指標(biāo)正常。供試豬為該場母豬所產(chǎn)的健康仔豬，每頭試驗仔豬打耳標(biāo)，做好標(biāo)記。

1.2?疫苗

豬圓環(huán)病毒2型桿狀病毒滅活疫苗（CP08株），簡稱亞單位圓苗，批號為20170606;豬瘟活疫苗（細胞源），簡稱豬瘟苗，批號為20170703;豬偽狂犬病耐熱保護劑活疫苗（C株），簡稱偽狂苗，批號為20170402;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），簡稱藍耳苗，批號為20170204，以上疫苗均由武漢中博生物股份有限公司生產(chǎn)。豬支原體肺炎復(fù)合佐劑滅活疫苗（P株），又稱喘泰克，雙針型（簡稱喘氣雙針），批號為MHB-17014，一針型（簡稱喘氣單針），批號為MHB-17017，由美國普泰克公司生產(chǎn)。

1.3?檢測試劑?CSFV-Ab檢測試劑盒、PRRSV-Ab檢測試劑盒、PRVgE-Ab檢測試劑盒均為韓國金諾（MEDIAN）診斷試劑盒;PRVgB-Ab檢測試劑盒為愛德士（IDEXX）診斷試劑盒;PCV2-Ab檢測試劑盒由武漢中博生物股份有限公司研制提供。操作方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)均按照各試劑盒說明書進行。

1.4?試驗分組

每輪次試驗使用仔豬90頭，分為3組，每組30頭。Ⅰ組為疫苗混合接種組，Ⅱ組為疫苗兩側(cè)接種組，對照組（CK）為單苗接種組，對照組除“圓+喘”2種滅活苗為混合接種外，藍耳苗、豬瘟苗及偽狂苗均按照不同時間先后單苗接種。試驗時間為2017年8月16日至2018年3月28日，共完成16輪次的重復(fù)接種試驗，共使用仔豬1 440頭。

1.5?接種方案

3組仔豬除1日齡使用偽狂苗1 mL滴鼻相同外，其余均不相同。另外，藍耳苗、豬瘟苗以及偽狂苗等活疫苗接種前均要進行稀釋，按照以下方案進行配苗。具體接種方案見表1。

1.6?采血及抗體檢測

每輪次每組30頭仔豬中各選擇10頭仔豬進行采血，分別在7、21、35、42、56、63、77、91日齡連續(xù)采血，分離血清后檢測CSFV-Ab、PRRSV-Ab、PRVgE-Ab、PRVgB-Ab以及PCV2-Ab等抗體水平，再從每組10份血樣中再隨機選擇具有完整檢測數(shù)據(jù)的5頭仔豬血樣進行跟蹤分析，統(tǒng)計16輪試驗中各組仔豬的80頭豬血樣分別在不同日齡各種抗體水平和陽性率。

1.7?日增重計算

分別在28和91日齡對每組30頭仔豬中未采血的20頭仔豬逐頭稱重，采用自由采食的飼喂方式，計算各組試驗仔豬在28～91日齡的平均日增重。

1.8?臨床觀察

1.8.1

免疫副反應(yīng)。副反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)如下：疫苗接種前后體溫變化1.0 ℃以上，接種20 min內(nèi)出現(xiàn)嘔吐、呼吸困難、臥地不起、尖叫、口吐白沫、四肢抽搐、全身皮膚紫癜以及休克死亡等癥狀，發(fā)生任何一種癥狀即判定為副反應(yīng)。

1.8.2?育成率計算與病原學(xué)檢測。觀察仔豬的生長發(fā)育情況，統(tǒng)計發(fā)病死亡情況，計算各組育成率，另外對部分病樣進行病原學(xué)檢測。

2?結(jié)果與分析

2.1?血清抗體檢測結(jié)果

2.1.1?豬瘟抗體檢測結(jié)果。

從圖1可以看出，Ⅰ、Ⅱ、CK組豬瘟抗體平均阻斷率分別為33.41%、45.83%和46.07%，對照組（CK）的平均阻斷率較高，這可能是因為對照組仔豬在28、63日齡分別用豬瘟單苗接種，而Ⅰ組和Ⅱ組則分別用幾種疫苗同時分點或混合注射，從而對抗體整齊度產(chǎn)生一定影響。

從圖2可以看出，7日齡Ⅰ、Ⅱ、CK組仔豬CSF抗體平均陽性率分別為66.3%、73.8%和68.8%，此后逐漸下降，28日齡豬瘟初免后Ⅰ組仍呈下降趨勢，56日齡降至17.5%，但在63日齡經(jīng)過“瘟+偽”混合接種加強后，豬瘟抗體陽性率明顯上升，91日齡Ⅰ組豬瘟抗體陽性率明顯高于Ⅱ組和對照組（CK）。

2.1.2?豬藍耳病抗體檢測結(jié)果。

在豬藍耳病疫苗的免疫豬群中，可以通過抗體水平的離散度，抗體值的高低等間接評價疫苗的免疫效果[1]。從圖3可以看出，Ⅰ、Ⅱ、CK組PRRSV抗體S/P值分別為1.14、1.52和1.55，雖然Ⅰ組S/P值相對較小，免疫效果不如Ⅱ組和對照組（CK）。

從圖4可以看出，7日齡后PRRS抗體陽性率先下降再逐漸上升，91日齡Ⅰ、Ⅱ、CK組PRRS抗體陽性率分別為94%、100%和98%，結(jié)合抗體S/P值、陽性率及臨床表現(xiàn)可知，試驗后期PRRSV陽性率高可能是疫苗和野毒感染共同作用的結(jié)果。

2.1.3?豬偽狂犬病抗體檢測結(jié)果。

從圖5、6可以看出，3組仔豬PRVgE-Ab S/N值絕大多數(shù)大于0.6，呈陰性，說明PRV野毒感染壓力小，7日齡PRVgE-Ab抗體平均陽性率分別為37%、21%和17%，應(yīng)屬于母源性抗體，隨著時間的推移，仔豬母源抗體逐步消失，91日齡絕大多數(shù)仔豬PRVgE-Ab為陰性，Ⅰ、Ⅱ、CK組PRVgE-Ab抗體平均陽性率分別為5%、11%、12%。

從圖7、8可以看出，3組PRVgB-Ab S/N值均逐步增加，抗體陽性率也逐步降低。結(jié)合抗體檢測、臨床表現(xiàn)以及病原學(xué)檢測可知，91日齡PRVgB-Ab抗體陽性率應(yīng)該主要是由疫苗接種產(chǎn)生的。

檢測結(jié)果表明，63日齡豬瘟和偽狂犬2種活疫苗同時分點和混合注射均不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，與單苗接種相比，3組間無明顯差異。

2.1.4?豬圓環(huán)病毒抗體檢測結(jié)果。

從圖9、10可以看出，對照組的PCV2-Ab抗體平均值相對較小，且PCV2-Ab抗體陽性率也相對較低，可能與Ⅰ組和Ⅱ組均接種圓環(huán)苗2次，而對照組只在14日齡接種1次有關(guān)。不管接種1次還是2次，91日齡各組PCV2-Ab抗體陽性率分別為75.8%、82.5%和71.3%，3組間沒有顯著差異（P>0.05）。

2.1.5?豬喘氣病觀察結(jié)果分析。

評價豬喘氣病疫苗的免疫效果主要從生長速度、日增重、飼料報酬、臨床病例、抗體水平及病理變化等方面著手，因條件有限未進行飼料報酬和抗體水平測定。Ⅰ組和Ⅱ組先后接種2次雙針型喘氣苗，對照組只接種單針型喘氣苗1次，經(jīng)觀察3組試驗仔豬喘氣病臨床病例均很少，剖檢也很少發(fā)現(xiàn)肺臟上有典型的肉樣病變，在生長發(fā)育、日增重及育成率等方面3組間也沒有明顯差異，說明單針型和雙針型均能有效預(yù)防喘氣病的發(fā)生。

2.2?仔豬日增重結(jié)果

統(tǒng)計16輪試驗中的每輪每組試驗仔豬28～91日齡的平均日增重。Ⅰ組仔豬的平均日增重為（467.5±51.1）g，Ⅱ組仔豬的平均日增重為（485.9±47.0）g，對照組仔豬的平均日增重為（461.4±39.8）g。28～91日齡Ⅱ組仔豬的平均日增重最高，高于Ⅰ組和對照組，但差異不顯著（P>0.05）。

2.3?免疫接種副反應(yīng)情況統(tǒng)計

根據(jù)副反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)，分別統(tǒng)計16輪試驗中幾種疫苗組合接種所導(dǎo)致的副反應(yīng)頭數(shù)。由表2可知，幾種疫苗組合接種后引起1.1%～1.7%的應(yīng)激反應(yīng)，均在正常范圍內(nèi)，其余幾種單苗（豬瘟苗外）或組合苗接種后幾乎沒有觀察到明顯的應(yīng)激反應(yīng)，尤其是豬瘟苗和偽狂犬苗2種活苗在63日齡不管是混合接種還是分開兩側(cè)接種均沒有發(fā)現(xiàn)仔豬出現(xiàn)副反應(yīng)，說明豬瘟苗和偽狂苗同時接種是安全的。

2.4?仔豬死亡情況與育成率

統(tǒng)計7～91日齡16輪試驗各組仔豬的死亡情況及總的育成率。由表3可知，16輪仔豬初試總頭數(shù)1 440頭，7～91日齡共死亡仔豬143頭，主要是由于腹瀉及呼吸道疾病造成的，其中Ⅰ組死亡47頭仔豬，Ⅱ組死亡51頭仔豬，對照組死亡45頭仔豬，Ⅰ、Ⅱ、CK組仔豬育成率分別為90.2%、89.4%和90.6%，經(jīng)t檢驗發(fā)現(xiàn)3組間沒有顯著差異（P>0.05）。

2.5?臨床發(fā)病死亡仔豬病原學(xué)檢測

由表4可知，CSFV和PRV病原學(xué)檢測均呈陰性，PCV2也只有1頭仔豬呈陽性，說明這3種疾病的壓力較小，但送檢病樣中PRRSV病原檢測陽性率均較高，另外該場保育豬中副豬嗜血桿菌病較為突出，結(jié)合臨床表現(xiàn)、病理剖檢等，認為試驗仔豬死亡可能與這2種疾病混合感染有關(guān)。

3?討論

為了優(yōu)化免疫接種程序，減少免疫接種次數(shù)，減輕基層獸醫(yī)的工作量，國內(nèi)許多專業(yè)人士對臨床常見的幾種豬苗進行各種聯(lián)合試驗，其中豬瘟、豬口蹄疫和高致病性藍耳病3種疫苗聯(lián)合使用試驗最多[2-9]，試驗結(jié)果對臨床應(yīng)用均具有一定的指導(dǎo)意義。朱子健等[10]將PCV2滅活疫苗和豬瘟活疫苗同時分點注射和混合注射，結(jié)果表明2種免疫方式均不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，但用2種滅活苗混合后稀釋活苗進行接種試驗國內(nèi)尚未見報道。

“喘泰克”是美國PORTATEK公司產(chǎn)品，為第4代支原體肺炎疫苗，有雙針型（P株抗原60 μg/mL）和單針型（P株抗原80 μg/mL）2種，該苗物理滅活，不含滅活劑。亞單位圓苗（CP08株）是國內(nèi)首個桿狀病毒表達的基因工程亞單位疫苗，該苗采用的β-丙內(nèi)脂（BPL）滅活劑能在疫苗液體中完全水解為無毒性的β-羥基丙酸，因此成品苗中無殘留有害成分，臨床上常與喘泰克混合使用。由于2種疫苗均為滅活苗，且均為復(fù)合水性佐劑和成苗中無殘留滅活劑等特點，為2種疫苗混合接種甚至稀釋活苗提供了臨床應(yīng)用的可能性。

該試驗是將“圓+喘”2種滅活苗混合后分別稀釋藍耳病活苗和豬瘟活苗以及將豬瘟活苗和偽狂犬活苗進行混合接種等，以期探索“死苗+活苗”和“活苗+活苗”混合使用的免疫效果，尤其是“圓+喘”2種滅活苗混合稀釋活苗的接種方式，雖然在一定時間段內(nèi)存在不同程度上影響活苗抗體水平的可能性，但是通過16輪次的重復(fù)田間試驗發(fā)現(xiàn)，混合接種、分點接種以及單苗接種對豬群日增重、生長狀況以及育成率等方面沒有顯著差異，為豬場因地制宜地制定免疫程序

提供一定的參考與借鑒。

關(guān)于疫苗混合接種的問題，尤其是多種疫苗或“死苗+活苗”混合接種的問題，有的學(xué)者持謹(jǐn)慎態(tài)度。該試驗通過16輪次田間的重復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)，某些特性疫苗按照一定的接種方式、免疫時間以及規(guī)范操作，進行混合或分點同時接種，其免疫效果與單苗接種無明顯差異，而某些指標(biāo)還優(yōu)于單苗接種組，同時該試驗是在江漢平原上的一個普通的大型豬場進行的，具有一定的代表性，不過由于該場是一個藍耳病陽性豬場，且豬場環(huán)境相對較差以及其他疾病的困擾等，對試驗產(chǎn)生一定的干擾和影響，其試驗結(jié)果可能具有一定的局限性，因此有必要與實驗室相關(guān)研究相結(jié)合，以便更好地在臨床上推廣應(yīng)用。

參考文獻

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