減肥保健品非法添加3種化學(xué)藥物的TLC—Micro FTIR檢測

馬姣　胡婭琳　趙益?zhèn)b　許鳳

摘要：利用薄層色譜（TLC）與顯微傅里葉變換紅外光譜（Micro FHR）聯(lián)用技術(shù)檢測減肥保健品中非法添加酚酞、西布曲明、芬氟拉明3種組分。供試品用甲醇超聲提取，以硅膠GFzu鋁合金薄層板為固定相，以氯仿一甲醇一氨水（11：1：0.12）為展開劑，在紫外燈254nm下檢視，薄層色譜法（TLC）快速初篩，顯微傅里葉變換紅外光譜（Micro FTIR）進行定性檢測。結(jié)果顯示在隨機抽取的9批供試品中，5批檢測到酚酞，7批含有西布曲明，2批含有芬氟拉明。所建立的方法專屬性強、靈敏度高，可以作為該類保健品非法添加酚酞、西布曲明、芬氟拉明的檢測方法。

關(guān)鍵詞：薄層色譜法；顯微傅里葉變換紅外光譜法；酚酞；西布曲明；芬氟拉明

文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1674-5124（2018）05-0053-05

0引言

減肥保健品是隨著審美觀念的變化衍生出來的一種瘦身產(chǎn)品，因其快速的減肥效果受到很多人尤其是女性的喜愛。但是有很多對人體有害的減肥產(chǎn)品充斥著市場，讓減肥保健品市場魚龍混雜。減肥產(chǎn)品非法添加物中酚酞、西布曲明、芬氟拉明（結(jié)構(gòu)如圖1所示）因其減肥效果好，是一些常見的添加物。酚酞屬刺激劑，用于慢性便秘，長期使用可損害腸神經(jīng)系統(tǒng)，且很可能是不可逆的；西布曲明為非苯丙胺類食欲抑制劑，通過抑制人的食欲，達(dá)到減肥的效果，但會增加嚴(yán)重的心腦血管不良事件；芬氟拉明為苯丙胺類食欲抑制藥，會導(dǎo)致心臟瓣膜病變等不良反應(yīng)。故減肥保健品非法添加化學(xué)藥物的行為不僅違反了食品衛(wèi)生法規(guī)，而且嚴(yán)重危害人體健康。

目前，減肥保健品中非法添加西藥的常用檢測方法有薄層色譜法（TLC）液相色譜法（HPLC）、液相色譜一質(zhì)譜法（HPLC-MS），表面增強拉曼光譜法（SERS）等。本實驗中，薄層色譜方法作為初篩手段，簡單快速，再聯(lián)用顯微傅里葉變換紅外光譜的高靈敏度、高專一性對非法添加藥物快速檢測。

1實驗部分

1.1儀器與試劑

顯微傅里葉變換紅外光譜儀NICOLET iN10（Thermo SCIENTIFIC）；硅膠GF₂₅₄鋁合金薄層板（德國默克公司）；超聲波清洗儀UIP50（南京壘君達(dá)超聲電子設(shè)備有限公司）：高速臺式離心機TGL-16（上海醫(yī)用分析儀器廠）。

酚酞對照品（A，批號：100102）、西布曲明對照品（B，批號：100624）、鹽酸芬氟拉明對照品（c，批號：0073-9501）：均購自中國藥品生物制品檢定所。實驗中所用的9批減肥保健品均購于市場：其他試劑均為分析純。

對照品溶液和混合對照品溶液的制備：分別精密稱定A、B、C 3種對照品適量，加入甲醇溶解、超聲5 min，制成濃度為1 mg/mL的A溶液、2mg/mL的B溶液和5 mg/mL的C溶液作為對照品溶液和同等濃度的混合對照品溶液。

供試品溶液的制備：取膠囊劑10?；虼莶?包，稱取內(nèi)容物約1/10置于10mL容量瓶中，加入5mL甲醇振搖、超聲10min后，離心5min（4000dmin），取上清液作為供試品溶液。

1.2實驗條件

以硅膠GF搿鋁合金薄層板為固定相，以氯仿一甲醇一氨水（11：1：0.12）為展開劑，點樣量為4μL，飽和5 min后，展開、取出晾干，在紫外燈254 nm下檢視定位。再將TLC板上對照品斑點刮下，放在2 mL的離心管中用0.5mL的甲醇溶解，超聲5min、高速離心3～5 min，取上清溶液放在離心管中室溫?fù)]干，然后放在金板上進行顯微紅外光譜檢測。采集模式：反射，檢測條件：液氮冷卻后檢測，采集時間：12 s，掃描：64次，光譜分辨率：8 cm^-1。數(shù)據(jù)處理軟件為OMNIC工作站和origin6.1。

2結(jié)果與分析

2.1對照品TLC及Micro FTIR測定

用微量進樣器在硅膠GF搿鋁合金薄層板上點對照品溶液及對照品混合溶液各4μL，按1.2節(jié)下實驗條件進行測定。再取極少量的酚酞、西布曲明、芬氟拉明對照品粉末放在金板上，進行顯微紅外光譜檢測。結(jié)果如圖2（a）～圖2（d）所示。

由圖2（a）可知，酚酞、西布曲明和芬氟拉明3種成分在本實驗色譜條件下分離較好。分析圖2（b）～圖2（d）可知，對照品粉末與刮板甲醇提取后的對照品紅外譜圖峰形、峰位基本一致。圖2（b）中3 289.50cm^-1處的吸收峰，說明分子中-OH的存在：1 718.24，1 216.52，1 123.64 cm^-1的吸收峰，說明分子中苯甲酸酯的存在；1 595.68，1 509.50，1 460.46，1 170.73，1 106.82 Cm^-1的吸收，說明分子中有與取代基共軛的苯環(huán)存在：圖2（c）中3 333.0 cm^-1吸收峰，說明分子中含有結(jié)晶水；2921.5 cm^-1吸收峰，說明環(huán)丁基的存在；1 566.0，1 414.5，1 078.9，1 017.6，793.3.0cm^-1吸收峰，說明氯苯基的存在；2 361.3，1 649.5，1 335.0cm^-1吸收峰，說明是叔胺鹽。圖2（d）中2951.5，2721.6，2479.4，2389.3，1452.8，1 334.5cm^-1吸收峰，說明分子為仲胺鹽；15879，、894.9，795.5cm^-1吸收峰，說明間位取代苯的存在；1 203.0，1118.4，1073.5cm^-1吸收峰，說明三氟代物的存在。

2.2 TLC及Micro FTIR最低檢測限考察

用微量進樣器在硅膠GF₂₅₄鋁合金薄層板上點1.1節(jié)下的對照品溶液，酚酞和西布曲明的點樣量分別為1，2，3，4μL，芬氟拉明的點樣量分別為0.5，1.0，1.5，2μL，按1.2節(jié)下的TLC條件檢測，結(jié)果酚酞在1μg時可以檢出，西布曲明在2μg時可以檢出，芬氟拉明在2.5μg時可以檢出。將TLC板上對照品斑點刮下，取甲醇提取揮干后的粉末放在金板上進行顯微紅外光譜檢測。結(jié)果酚酞和西布曲明在2μg時可以檢出，芬氟拉明在2.5μg時可以檢出。由此說明本實驗條件下，TLC法及Micro FTIR方法靈敏度均較高。

2.3真實樣品檢測

2.3.1TLC檢測

用微量進樣器取1.1節(jié)下的對照品混合溶液及1-9號供試品溶液各4μL點于硅膠GF₂₅₄鋁合金薄層板上，按1.2節(jié)下的檢測條件檢測，結(jié)果如圖3所示。

由圖可知，由比移值和斑點顏色初步判定供試品1，2，3，6，7，8批次含有酚酞、供試品1-9批次含有西布曲明、供試品2，3，5，8，9批次含有芬氟拉明。

2.3.2 Micro VrIR檢測

薄層色譜方法雖然簡單快速，但定性能力有限，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，因此只能作為初篩手段。與常規(guī)紅外光譜相比，顯微傅里葉變換紅外光譜靈敏度高，可以實現(xiàn)痕量樣品的分析：采用溴化鉀壓片法會出現(xiàn)水的吸收峰，還會使譜圖變形，而Micro FTIR技術(shù)分析時不需要添加任何稀釋劑，能反映樣品的本質(zhì)光譜。將圖3中對照品的斑點及相同比移值處供試品中疑似含有非法添加組分的斑點刮下，提取處理后取其少量粉末進行顯微紅外測定。結(jié)果如圖4～圖6所示。

由圖4分析6個批次供試品的顯微紅外譜圖，在供試品1，2，3，7，8的譜圖中，幾個特征峰包括（V_OH、V_C=O、Vc_C-O-C、V_C=C）的峰位、峰形基本上與酚酞刮板對照品的顯微紅外譜圖一致，而供試品6無酚酞特征峰，說明其不含酚酞組分。

由圖5分析9批供試品的顯微紅外譜圖，在供試品1，2，3，4，7，8，9顯微紅外譜圖中，特征峰及相關(guān)峰（V_CH3、V_C-N、V_C=C、β_=C-H、γ_=C-H）的峰位峰形基本上與西布曲明刮對照品的顯微紅外譜圖一致，而供試品5、6無西布曲明特征峰，說明其不含西布曲明組分。

由圖6分析2，3，5，8，9等5個批次供試品的顯微紅外譜圖，供試品5，9幾個特征峰（仲NH₂⁺伸縮、V_CH3、V_C=C、C_C-N）的峰位、峰形與芬氟拉明刮板對照品的顯微紅外圖譜基本一致，認(rèn)為在供試品5，9中非法添加芬氟拉明，2，3，8號供試品均無相關(guān)特征峰，說明不含鹽酸芬氟拉明。

3結(jié)束語

在進行顯微傅里葉變換紅外光譜檢測時，要保證前處理方法的一致性，即需要在相同的條件下將TLC薄層板上的對照品和樣品斑點刮下、提取和測定，否則無可比性。另外，掃描不同樣品區(qū)域時出現(xiàn)的吸收峰個別部位略有差別，需要多次測定取平均值。

本實驗采用薄層色譜一顯微傅里葉變換紅外光譜聯(lián)用技術(shù)對減肥保健品中非法添加的酚酞、西布曲明、芬氟拉明進行快速檢測，在被檢測的9批供試品中，5批供試品檢測出非法添加酚酞，7批供試品非法添加西布曲明，2批供試品非法添加芬氟拉明。此方法專屬性強、靈敏度高、準(zhǔn)確性好，適用于對該類化合物的快速檢測。

（編輯：徐柳）