• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    干旱脅迫下煙草脯氨酸雜種優(yōu)勢及相關(guān)基因差異表達分析

    2018-05-14 09:36:56孟軍吳迪夏志林喻奇?zhèn)?/span>王軍劉雙陳倩田茂竹李顯航汪志威劉仁祥
    中國煙草科學(xué) 2018年2期
    關(guān)鍵詞:干旱脅迫雜種優(yōu)勢脯氨酸

    孟軍 吳迪 夏志林 喻奇?zhèn)? 王軍 劉雙 陳倩 田茂竹 李顯航 汪志威 劉仁祥

    摘 要:為探討干旱脅迫下煙草脯氨酸雜種優(yōu)勢的分子遺傳基礎(chǔ),以抗旱性差異較大的7個煙草品種及其組配的10個雜交組合為材料,采用盆栽試驗設(shè)置干旱脅迫處理,進行了煙草脯氨酸雜種優(yōu)勢及其相關(guān)基因差異表達分析。結(jié)果表明,干旱脅迫下煙草脯氨酸含量在脅迫早期持續(xù)增加,第14天后開始下降;雜交組合間脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢差異明顯,中親優(yōu)勢最高40.35、最低?51.66;強優(yōu)勢組合中脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因P5CS和δ-OAT相對表達量明顯高于弱優(yōu)勢組合,分別是弱優(yōu)勢組合的2.10倍、1.87倍;脯氨酸雜種優(yōu)勢與P5CS基因相對表達量在旺長期持續(xù)干旱7 d時存在顯著正相關(guān)關(guān)系,與δ-OAT基因相對表達量在伸根期持續(xù)干旱14 d、旺長期持續(xù)干旱7 d和14 d呈顯著或極顯著的相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)分別為0.93、0.98和?0.96。結(jié)果顯示,脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因δ-OAT和P5CS的時序性上調(diào)或下調(diào)表達是相應(yīng)時期煙草脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢形成的分子基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞:煙草;干旱脅迫;脯氨酸;雜種優(yōu)勢;基因差異表達

    中圖分類號:S572.03 文章編號:1007-5119(2018)02-0001-07 DOI:10.13496/j.issn.1007-5119.2018.02.001

    Analysis of Proline Heterosis and Differential Expression of Relate Genes in Tobacco under Drought Stress

    MENG Jun1, WU Di1, XIA Zhilin2, YU Qiwei3, WANG Jun2, LIU Shuang1, CHEN Qian1,

    TIAN Maozhu1, LI Xianhang1, WANG Zhiwei1, LIU Renxiang1*

    (1. Guizhou Key Laboratory for Tobacco Quality Research, Guiyang 550025, China; 2. Zunyi Tobacco Company, Zunyi, Guizhou 564000, China; 3. Bijie Tobacco Company, Bijie, Guizhou 551700, China)

    Abstract: In order to explore the molecular genetic basis of proline heterosis in tobacco under drought stress, 7 tobacco varieties with different drought resistance and 10 hybrid combinations were used as materials, and drought stress treatments were set up to analyze proline heterosis and differential expression of related genes in tobacco by pot experiments. The results showed that the content of tobacco proline under drought stress increased continuously at the early stage and decreased after the 14th day. The heterosis of proline content in hybrid combinations was significantly different, and the proline content had the mid-parent heterosis with the highest value of 40.35 and the lowest of -51.66. The relative expression levels of the proline synthesis key enzyme genes P5CS and δ-OAT were significantly higher in the strong-dominant combinations, being 2.10 times and 1.87 times of those of the weak-dominant combinations, respectively. There was a significant positive correlation between the proline heterosis and P5CS gene relative expression after persistent drought for 7d at the vigorous growth stage. The correlations between the proline heterosis and δ-OAT gene relative expression were significant or extremely significant after persistent drought for 14d at the root extension stage and persistent drought for 7d and 14d at the vigorous growth, with correlation coefficients of 0.93, 0.98 and -0.96, respectively. Therefore, the up-regulation or down-regulation of δ-OAT and P5CS was the molecular basis for the formation of heterosis of tobacco proline content during the corresponding growth periods.

    Keywords: Nicotiana tabacum; drought stress; proline; heterosis; gene differential expression

    基金項目:貴州省科技廳人才團隊建設(shè)項目“貴州省煙草品質(zhì)遺傳改良與生物轉(zhuǎn)化科技創(chuàng)新人才團隊”{黔科合人才團隊[2015]4011號},貴州省高

    層次創(chuàng)新型人才培養(yǎng)計劃——百層次人才{黔科合平臺人才[2016]5663號};貴州省煙草公司重大專項“優(yōu)質(zhì)烤煙品種選育關(guān)鍵技術(shù)研究

    與品種選育”(黔煙科201602);貴州省煙草公司遵義市公司項目“遵義煙區(qū)烤煙品種篩選布局與后備品種選育研究”{遵煙計[2016]07號}

    作者簡介:孟 軍(1993-),男,在讀碩士研究生,研究方向:作物遺傳育種。E-mail:1012506570@qq.com。*通信作者,E-mail:rxliu@gzu.edu.cn

    收稿日期:2017-10-07 修回日期:2018-01-31

    干旱脅迫是制約植物生長發(fā)育、影響作物產(chǎn)量和質(zhì)量的主要逆境因素之一[1]。煙草對水分有較高的要求,其生長季節(jié)田間持水量低于50%,產(chǎn)量和品質(zhì)會受到影響[2]。西南地區(qū)是我國煙葉的主產(chǎn)區(qū),因其獨特的生態(tài)環(huán)境,旱災(zāi)頻發(fā),且缺乏必要的灌溉條件,因此,降低煙草自身對水分缺乏的敏感性,選育利用抗旱品種已成為抵御干旱逆境的重要研究方向和有效途徑。干旱脅迫條件下,植物會迅速合成和積累大量的脯氨酸、甜菜堿等一系列的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),以游離狀態(tài)存在于植物細胞中,以抵御干旱逆境;前人對抗旱性的研究主要集中在脯氨酸含量與抗旱性的關(guān)系、脯氨酸合成酶相關(guān)基因的鑒定克隆和轉(zhuǎn)化方面[3-5],從大豆[6]、豌豆[7]、菜豆[8]、甘蔗[9-10]、擬南芥[11]、羅布麻[12]等植物中克隆出二氫吡咯-5-羧酸合成酶(P5CS)、Δ1-二氫吡咯羧酸還原酶(P5CR)和鳥氨酸-δ-氨基轉(zhuǎn)移酶(δ-OAT)等多個與脯氨酸合成酶相關(guān)的基因;P5CS基因轉(zhuǎn)化煙草[13]、冰草[14]、擬南芥[15],轉(zhuǎn)基因植株中脯氨酸含量比野生型對照高幾倍,對干旱逆境脅迫的抗逆性及耐受性顯著增強;ROOSENS等[16]在煙草中超量表達δ-OAT基因,轉(zhuǎn)δ-OAT煙草在非脅迫條件下合成脯氨酸能力是對照的4倍,對干旱等水分脅迫的耐受性顯著提高。而有關(guān)煙草脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢的分子遺傳基礎(chǔ)研究未見報道,本研究以耐旱品種K326、南江三號、韭菜坪2號及干旱敏感品種畢納一號、紅花大金元、NC82、TN90及其組配的雜交組合為材料[17],采用盆栽試驗,于煙草生長對水分敏感的伸根期和旺長期進行干旱脅迫處理,通過研究干旱脅迫條件下煙草脯氨酸含量累積的動態(tài)變化、脯氨酸性狀的雜種優(yōu)勢表現(xiàn)、脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因的表達及其與雜種優(yōu)勢的關(guān)系,旨在闡明脯氨酸性狀雜種優(yōu)勢形成的分子遺傳基礎(chǔ),為抗旱性煙草雜交種的選育提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    本研究選用耐旱品種K326、南江三號、韭菜坪2號及干旱敏感品種畢納一號、紅花大金元、NC82、TN90為親本,同時以NC82、K326為母本,TN90、韭菜坪2號、畢納一號、南江三號和紅花大金元等5個品種為父本,組配了10個組合,共17個試驗材料。

    1.2 試驗方法與設(shè)計

    本試驗在貴州大學(xué)煙草科研基地塑料大棚里進行,采用盆栽試驗。試驗用盆高45 cm、底徑25 cm、口徑35 cm。供試土壤為0~20 cm的煙田表層土(黃壤),土壤pH 5.53,有機質(zhì)25.36 g/kg,全氮1.52 g/kg,有效磷17.35 mg/kg,速效鉀190.26 mg/kg;經(jīng)自然風(fēng)干后過0.5 cm篩后裝盆,每盆裝土15 kg。每盆施煙草專用復(fù)合肥[m(N)∶m(P2O5)∶m(K2O)=10∶11∶25] 60 g,于2015年4月7日統(tǒng)一移栽,待生長到適宜處理時期進行干旱脅迫處理。干旱處理采用稱重法控制土壤相對含水量,伸根期干旱處理的土壤相對含水量為田間最大持水量的30%~35%,連續(xù)干旱21 d;旺長期干旱處理的土壤相對含水量為田間最大持水量的35%~40%,連續(xù)干旱21 d。3次重復(fù),每重復(fù)255盆。

    1.3 測定項目及方法

    1.3.1 取樣方法 于持續(xù)干旱處理第7天、第14天和第21天上午7:00—8:00取中部葉片,每個重復(fù)隨機取3株混合,保存于超低溫冰箱中用于脯氨酸測定和提取RNA。

    1.3.2 脯氨酸測定方法 參照蘇州科銘生物技術(shù)有限公司脯氨酸(proline,pro)試劑盒說明書測定煙草植株中Pro活性。

    1.3.3 樣品總RNA提取與cDNA合成 參照OMIGA E.Z.N.A.TM Plant RNA Protocol II(for difficult samples)提取總RNA,cDNA合成的20 ?L反應(yīng)體系按(High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit,ABI)試劑盒說明書進行。

    1.3.4 Real-time PCR 根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中報道的煙草脯氨酸相關(guān)基因P5CS、δ-OAT的基因序列,利用primer 5軟件設(shè)計各基因表達引物,P5CS上游引物:5'- TGGGCATCAACTGGAGAGATAGG -3'、5'-CCTGAAGCCGCCTGGAACAT-3'; δ-OAT上游引

    物:5'- ACAGCTCTTAAGCTGGCAAGGA -3'、下游引物:5'-ACAACTCATGGAGATTGCAGCCA-3'。以煙草Actin基因(上游引物:5'-GGTAGCTC CACCTGAGAGGAAGT-3'、下游引物:5'-GCCTTT GCAATCCACATCTGT-3')為內(nèi)參基因。

    實時定量PCR操作根據(jù)ABI Power SYBR?Green PCR Master Mix使用操作說明進行。Real-time PCR的反應(yīng)體系為:Power SYBR Green PCR Master Mix(2×)10 ?L,引物1 1.0 ?L,引物2 1.0 ?L,cDNA 4.0 ?L,ddH2O 4.0 ?L。擴增條件為:95 ℃ 10 min;95 ℃ 15 s;60 ℃ 1 min,40個循環(huán)。每個樣品取樣3次,每次設(shè)置3個重復(fù)。根據(jù)Actin基因的表達量,以2-ΔΔCt法計算各基因相對表達量。

    1.3.5 統(tǒng)計分析方法 本研究采用比較閾值法(2-ΔΔCt)對強弱優(yōu)勢組合中P5CS、δ-OAT基因的Real-time PCR測定結(jié)果進行相對定量分析,2-ΔΔCt=2-(雜交組合ΔCt-雙親平均ΔCt),其中:ΔCt=目的基因Ct-內(nèi)參ActinCt,雙親平均ΔCt=(父本ΔCt-母本ΔCt)/2。采用SPSS 20.0、Excel 2013和DPS 14.10統(tǒng)計軟件對脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢、脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因的表達量及其與脯氨酸含量和雜種優(yōu)勢的相關(guān)性進行統(tǒng)計分析。其中雜種優(yōu)勢計算公式為:

    超親優(yōu)勢=(F1-HP)/HP×100

    中親優(yōu)勢=(F1-MP)/MP×100

    式中,MP為雙親平均值;HP為高親值;F1為雜種一代性狀平均值。

    2 結(jié) 果

    2.1 干旱脅迫下不同材料脯氨酸含量差異分析

    由不同親本間脯氨酸含量測定結(jié)果(表1)看出,親本間煙葉脯氨酸含量差異極顯著,且在兩個處理時期的表現(xiàn)趨勢基本一致;K326和南江三號品種的脯氨酸含量最高,且差異不顯著,但極顯著高于其他5個親本。結(jié)果說明改良煙草脯氨酸含量的現(xiàn)有品種資源較為豐富。

    由不同組合間脯氨酸含量測定結(jié)果(表1)看出,組合間煙葉脯氨酸含量差異極顯著,在兩個處理時期的表現(xiàn)趨勢不完全一致;K326×南江三號、NC82×南江三號組合在兩個處理時期的脯氨酸含量均較高。結(jié)果說明,采用優(yōu)勢育種可以選育出脯氨酸含量高的雜交種。

    表1 7個親本和10個雜交組合脯氨酸含量

    Table 1 Proline content of 7 parents and 10 cross combinations μg/g

    親本

    Parent 伸根期

    Root extension stage 旺長期

    Vigorous growth stage

    南江三號Nanjiang No.3 812.40aA 924.53aA

    K326 752.65aA 867.87aA

    畢納一號Bina No.1 489.66bB 544.98bB

    韭菜坪2號Jiucaiping No.2 477.71bcB 542.24bB

    紅花大金元

    Honghuadajinyuan 389.66bcB 451.14bB

    TN90 365.14cB 498.02bB

    NC82 364.24cB 424.66bB

    K326×TN90 523.33aA 499.38eC

    NC82×畢納一號

    NC82×Bina No.1 521.21aA 533.40deC

    K326×韭菜坪2號

    K326×Jiucaiping No.2 507.56aA 565.09cdeC

    K326×南江三號

    K326×Nanjiang No.3 505.16aA 871.93aA

    NC82×TN90 505.16aA 647.47bcBC

    NC82×紅花大金元

    NC82×Honghuadajinyuan 496.92aA 544.88cdeC

    NC82×南江三號

    NC82×Nanjiang No.3 492.68aA 721.62bB

    NC82×韭菜坪2號

    NC82×Jiucaiping No.2 447.16aA 539.22deC

    K326×畢納一號

    K326×Bina No.1 454.51aA 640.02bcdBC

    K326×紅花大金元

    K326×Honghuadajinyuan 276.08bB 546.33cdeC

    注:表中數(shù)值為干旱脅迫第7天、第14天、第21天的平均值,分別對親本和組合進行差異分析,小寫和大寫字母不同分別表示在5%和1%水平差異顯著性。

    Note: The values in the table are the mean values of the 7th, 14th, and 21st days of drought stress. The differences between the parent and the combination are respectively analyzed. The difference between Lowercase and uppercase letters indicates that the difference is significant at the level of 5 % and 1 %, respectively.

    2.2 干旱脅迫條件下脯氨酸含量的動態(tài)變化

    由不同時期干旱脅迫處理參試材料不同天數(shù)的脯氨酸含量測定結(jié)果(圖1)看出,所有參試材料的煙葉脯氨酸含量動態(tài)變化基本一致,在干旱脅迫處理初期隨著干旱的持續(xù)而增加,除韭菜坪2號、NC82×南江三號等材料外,其余14個參試材料在干旱脅迫持續(xù)14 d后開始下降。結(jié)果說明14 d是

    圖1 干旱脅迫條件下脯氨酸含量的動態(tài)變化

    Fig. 1 Dynamic changes of proline content under drought stress conditions

    煙株對干旱反應(yīng)的轉(zhuǎn)折點,干旱脅迫初期,煙株通過增加脯氨酸含量來增加細胞的持水力,維持細胞正常代謝;干旱持續(xù)14 d后,煙株生理機能受到嚴重傷害導(dǎo)致脯氨酸的合成能力下降;抗旱性強的材料抵御生理傷害持續(xù)的時間長,脯氨酸含量下降的時間延后。

    2.3 干旱脅迫條件下煙葉脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢表現(xiàn)

    由雜交組合脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢計算結(jié)果(表2)看出,各雜交組合間脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢差異較大,NC82×紅花大金元、NC82×TN90組合脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢較高,K326×TN90、K326×紅花大金元組合脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢較低,可作為強、弱優(yōu)勢代表組合用于脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢的基因差異表達分析。

    2.4 干旱脅迫條件下脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因表達分析

    由干旱脅迫下脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因相對表達量測定結(jié)果(圖2)看出,脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因在不同優(yōu)勢組合間的相對表達量有明顯差異,P5CS和δ-OAT基因在強優(yōu)勢組合中的相對表達量明顯高于弱優(yōu)勢組合,分別是弱優(yōu)勢組合的2.10倍、1.87倍。不同脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因在不同組合內(nèi)的相對表達量和表達時序有差異,NC82×紅花大金元組合中P5CS和δ-OAT基因的相對表達量均是伸根期持續(xù)干旱14 d達到最高,分別是親本平均表達量的6.46倍、5.37倍,且66.7%的時序點超過雙親平均表達量;NC82×TN90組合中P5CS基因的相對表達量在旺長期干旱14 d時最高,為親本平均表達量的13.9倍,而δ-OAT基因的相對表達量在不同時期的變化較小,且83.3%的時序點超過雙親平均表達量;在K326×紅大和K326×TN90弱優(yōu)勢組合中,

    表2 各雜交組合脯氨酸含量性狀的雜種優(yōu)勢

    Table 2 Heterosis of proline content in different hybrid combinations

    雜交組合 Hybrid combination 中親優(yōu)勢Mid-parent heterosis 超親優(yōu)勢Over-parent heterosis

    伸根期干旱處理

    Drought treatment

    at root extension stage 旺長期干旱處理

    Drought treatment

    at vigorous growth stage 伸根期干旱處理

    Drought treatment

    at root extension stage 旺長期干旱處理

    Drought treatment

    at vigorous growth stage

    NC82×TN90 38.52 40.35 38.35 30.01

    K326×TN90 ?6.36 ?26.88 ?30.47 ?42.46

    NC82×韭菜坪2號 NC82×Jiucaiping No.2 6.22 11.54 ?6.40 ?0.56

    NC82×畢納一號 NC82×Bina No.1 22.08 10.02 6.44 ?2.13

    NC82×南江三號 NC82×Nanjiang No.3 ?16.26 6.97 ?39.35 ?21.95

    NC82×紅花大金元 NC82×Honghuadajinyuan 31.83 24.43 27.53 20.78

    K326×畢納一號 K326×Bina No.1 ?26.83 ?9.40 ?39.61 ?26.25

    K326×韭菜坪2號 K326×Jiucaiping No.2 ?17.49 ?19.85 ?32.56 ?34.89

    K326×紅花大金元 K326×Honghuadajinyuan ?51.66 ?17.16 ?63.32 ?37.05

    K326×南江三號 K326×Nanjiang No.3 ?35.44 ?2.71 ?37.82 ?5.69

    圖2 干旱脅迫下脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因相對表達量

    Fig. 2 Relative expression of pronline synthase genes under drought stress

    P5CS、δ-OAT的表達量均在旺長期持續(xù)干旱14 d時達到最高,分別是親本平均表達量的5.57倍、6.48倍,但僅有41.7%和33.3%的時序點超過雙親平均表達量。結(jié)果說明脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因P5CS、δ-OAT的相對表達量高低和持續(xù)表達時間影響了脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢的形成。

    2.5 脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因表達與脯氨酸雜種優(yōu)勢的相關(guān)分析

    由脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因相對表達量與脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢的相關(guān)性分析結(jié)果(表3)看出,脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢與P5CS基因相對表達量在旺長期持續(xù)干旱7 d呈顯著的正相關(guān)關(guān)系;脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢與δ-OAT基因相對表達量在伸根期持續(xù)干旱14 d、旺長期持續(xù)干旱7 d呈顯著或極顯著的正相關(guān)關(guān)系,與δ-OAT基因相對表達量在旺長期持續(xù)干旱14 d呈極顯著的負相關(guān)關(guān)系,與δ-OAT基因相對表達量的相關(guān)系數(shù)大于與P5CS基因相對表達量的相關(guān)系數(shù);同時,δ-OAT基因相對表達量與P5CS基因相對表達量在伸根期整個處理時間和旺長期持續(xù)干旱7 d呈顯著或極顯著的正相關(guān)關(guān)系。結(jié)果說明煙草脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢主要是由于脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因δ-OAT和P5CS的高效表達引起的,δ-OAT基因的作用強于P5CS基因,且兩個基因間存在顯著的互作,因此,在煙草抗旱性優(yōu)勢育種中,應(yīng)首先選擇δ-OAT基因高效表達類型材料,同時要兼顧P5CS基因高效表達類型材料的選擇。

    3 討 論

    植物細胞在遭受干旱脅迫時都會主動積累大量脯氨酸,降低植物體內(nèi)的水勢來維持體內(nèi)的水分平衡,起著保護植物免受干旱脅迫的傷害。植物體內(nèi)脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗旱性強弱,抗旱性強的品種往往積累較多的脯氨酸。本研究對7個親本及其組配的10個雜交組合材料進行干旱脅迫處理,結(jié)果表明不同親本間和雜交組合間的脯氨酸含量存在明顯差異,材料間脯氨酸含量的不同體現(xiàn)了各自抗旱性強弱差異,現(xiàn)有可用于抗旱性育種的品種資源較為豐富,采用優(yōu)勢育種方法有可能選育出脯氨酸含量高的雜交種。

    前人關(guān)于脯氨酸與抗旱性方面的研究注重短時期干旱的脯氨酸含量變化,沒有持續(xù)觀察脯氨酸含量的動態(tài)變化趨勢[18-20],本文采取持續(xù)干旱處理7、14和21 d研究干旱脅迫下煙草脯氨酸含量動態(tài)變化,結(jié)果表明脯氨酸含量在伸根期至旺長期有明顯的上升趨勢,同一生育時期隨干旱脅迫的持續(xù)而增加,第14天后開始下降。崔保偉等[21]研究發(fā)現(xiàn),不同生育時期水分脅迫處理的烤煙葉片中游離脯

    表3 干旱脅迫下脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因表達與脯氨酸雜種優(yōu)勢的相關(guān)分析

    Table 3 Correlation analysis of gene expression of proline synthesis key enzymes and heterosis of

    auxiliary ammonia under drought stress

    相關(guān)系數(shù)

    Correlation

    coefficient 伸根期干旱處理

    Drought treatment at root extension stage 旺長期干旱處理

    Drought treatment at vigorous growth stage

    δ-OAT 雜種優(yōu)勢Heterosis δ-OAT 雜種優(yōu)勢Heterosis

    7d 14d 21d 7d 14d 21d 7d 14d 21d 7d 14d 21d

    P5CS 0.89* 0.97** 0.98** 0.67 0.81 0.64 0.88* -0.10 0.30 0.92* 0.30 0.23

    δ-OAT — — — 0.42 0.93* 0.75 — — — 0.98** -0.96** 0.83

    注:*和**分別表示在5%和1%水平上顯著相關(guān)。

    Note: * and * * respectively indicate a significant correlation at 5% and 1% levels.

    氨酸的含量均以中度干旱(50%處理)最高,就整個生育期來看,游離脯氨酸含量從團棵期到旺長期有明顯的上升趨勢,以旺長期上升幅度最大,說明水分脅迫對脯氨酸的含量變化的影響比較明顯,脯氨酸含量的高低隨干旱程度的不同而有所變化,這與本試驗結(jié)果相吻合。因此脯氨酸含量可作為煙草抗旱能力的一個指標(biāo),為脯氨酸與煙草抗旱性關(guān)系研究提供依據(jù)。

    雜交種基因全部來自于雙親,并沒有新的基因出現(xiàn),但基因差異表達研究表明,雜交種相對于親本而言,基因表達不僅存在質(zhì)的差異,還存在量的差異,導(dǎo)致了表型的變化[22-23]?;虮磉_量的差異與雜種優(yōu)勢形成的關(guān)系密切[24-25],TSAFTARIS等[26]通過比較雜種與親本間若干基因的表達量發(fā)現(xiàn),有優(yōu)勢雜種的平均表達量高于無優(yōu)勢的雜種。植物體內(nèi)脯氨酸的合成有兩條途徑,分別為谷氨酸(Glu)途徑和鳥氨酸(Orn)途徑,前人研究認為,干旱脅迫條件下植物體內(nèi)脯氨酸積累主要依靠Glu途徑,Δ1-吡咯啉-5-羥酸合成酶(P5CS)是脯氨酸合成途徑的關(guān)鍵酶[27]。本研究篩選強、弱優(yōu)勢組合,在伸根期和旺長期干旱脅迫下研究了P5CS、δ-OAT基因的相對表達量與雜種優(yōu)勢大小的關(guān)系,結(jié)果顯示煙草脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢主要是由于脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因δ-OAT和P5CS的高效表達引起的,δ-OAT基因的作用強于P5CS基因,說明脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢與煙草脯氨酸積累的主要調(diào)控基因有差異,脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢的關(guān)鍵 調(diào)控基因是δ-OAT。

    4 結(jié) 論

    雜種優(yōu)勢的形成是一個動態(tài)的、復(fù)雜的過程,煙草在不同時期不同強度的干旱脅迫下脯氨酸合成關(guān)鍵酶基因的表達具有特異性和時序性。伸根期持續(xù)干旱14 d時δ-OAT上調(diào)表達、旺長期持續(xù)干旱7 d時δ-OAT和P5CS基因上調(diào)表達以及旺長期持續(xù)干旱14 d時δ-OAT基因下調(diào)表達是相應(yīng)時期煙草脯氨酸含量性狀雜種優(yōu)勢形成的分子基礎(chǔ)。

    參考文獻

    [1]段淑輝,楊億軍,劉建利,等. 煙草需水規(guī)律研究進展[J]. 中國煙草科學(xué),2012,33(4):99-105.

    DUAN S H, YANG Y J, LIU J L, et al. Advance in water requirement of tobacco[J]. Chinese Tobacco Science, 2012, 33(4): 99-105.

    [2]龔婷,劉善麗,尹國矚,等. 煙草生長、光合特性及品質(zhì)對水分脅迫的響應(yīng)研究[J]. 西南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)2017,42(8):64-69.

    GONG T, LIU S L, YIN G Z, et al. Effects of water stress on growth, photosynthetic characteristics and quality of tobacco[J]. Journal of Southwest China Normal University(Natural Science Edition), 2017, 42(8): 64-69.

    [3]黃強,王津津,侯學(xué)文. 煙草抗非生物逆境分子育種研究進展[J]. 生物技術(shù)通報,2010(5):34-37.

    HUANG Q, WANG J J, HOU X W. The advancements of tobacco molecular breeding of anti-abiotic stresses[J]. Biotechnology Bulletin, 2010(5): 34-37.

    [4]焦蓉. 普通煙草脯氨酸合成酶基因NtP5CS和Ntδ-OAT的克隆與表達分析[D]. 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2011.

    JIAO R. Cloning and expression analysis of proline synthetase gene NtP5CS and Ntδ-OAT in Nicotiana tabacum[D]. Beijing: Chinese Academy of Agriculture Sciences, 2011.

    [5]全先慶,張渝潔,單雷,等. 高等植物脯氨酸代謝研究進展[J]. 生物技術(shù)通報,2007(1):14-18.

    QUAN X Q, ZHANG Y J, SHAN L, et al. Advances in proline metabolism researches of higher plants[J]. Biotechnology Bulletin, 2007(1): 14-18.

    [6]張春寶,趙洪錕,李啟云,等. 野生大豆Δ′-吡咯琳-5-羧酸合成酶(P5CS)基因的克隆與序列分析[J]. 大豆科學(xué),2008,27(6):915-920.

    ZHANG C B, ZHAO H K, LI Q Y, et al. Molecular Cloning and Sequence Analysis of Δ′-pyrroline-5- Carboxylate Synthetase[J]. Soybean Science, 2008, 27(6): 915-920.

    [7]STR?NSK? J, TYLICHOV? M, KOPECN? D, et al. Biochemical characterization of pea ornithine-δ- aminotransferase: Substratespecifity and inhibition by di-and polyamines[J]. Biochimie, 2010(3): 1-9.

    [8]陳吉寶. 普通菜豆P5CS基因的克隆、功能驗證及單核苷酸多態(tài)性[D]. 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2008.

    CHEN J B. Cloning, function analysis and single nucleotide polymorphism of common bean (Phaseoleae vnlgaris L.) P5CS gene[D]. Beijing: Chinese Academy of Agriculture Sciences, 2008.

    [9]譚秦亮,潘成列,周全光,等. 甘蔗基因克隆的研究進展[J]. 農(nóng)業(yè)研究與應(yīng)用,2016(6):46-52.

    TAN Q L, PAN C L, ZHOU Q G, et al. Research advances in gene cloning of sugarcane[J]. Agricultural

    Research and Application, 2016(6): 46-52.

    [10]黃誠梅. 甘蔗脯氨酸積累與Δ′-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因克隆及轉(zhuǎn)化研究[D]. 廣西:廣西大學(xué),2007.

    HUANG C M. Proline Accumulation, Cloning and Transformation of Δ′-pyrroline-5-Carboxy late SynthetaseGene in Sugarcane (Saccharum officionaruml)[D]. Guangxi: Guangxi University, 2007.

    [11]李大紅,劉宏偉,秦蘭娟,等. 擬南芥P5CS1基因轉(zhuǎn)化羽衣甘藍增強耐鹽性分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報,2017,48(5):768-773.

    LI D H, LIU H W, QIN L J, et al. Salt tolerance strengthening of Brassica oleracea var. acephala f. tricolor genetically modified by P5CS1 gene from Arabidopsis thaliana[J]. Journal of Southern Agriculture, 2017, 48(5): 768-773.

    [12]郭旭. 羅布麻、胡楊P5CS基因的克隆及其功能初步分析[D]. 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2007.

    GUO X. Cloning and functional analysis of P5CS from apocynum venetum L and populus euphratica oliv[D]. Beijing: Chinese Academy of Agriculture Sciences, 2007.

    [13]支立峰,余濤,朱英國,等. 過量表達脯氨酸的轉(zhuǎn)基因煙草細胞對毒性重金屬的抗性增強[J]. 湖北師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2006(2):14-19.

    ZHI L F, YU T, ZHU Y G, et al. Overexpression of Δ′-pyrroline-5-carboxylate synthetase enhanced tolerance to toxic heavy metals in transgenic tobacco cells[J]. Journal of Hubei Normal University (Natural Science), 2006(2): 14-19.

    [14]王桂花,米福貴,劉娟,等. P5CS基因在蒙農(nóng)雜種冰草植株中的表達及耐鹽性研究[J]. 華北農(nóng)學(xué)報,2007(4):33-36.

    WANG G H, MI F G, LIU J, et al. Studies on the expression of exogenous P5CS gene in transgenic wheatgrasses (agropyron cristatum×A. desertorumcv.

    ′Hycrest-Mengnong′) and Drought Resistance[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2007(4): 33-36.

    [15]王翠平,華學(xué)軍. 擬南芥脯氨酸合成關(guān)鍵酶P5CS1的功能鑒定及原核表達[J]. 揚州大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2017,38(3):90-95.

    WANG C P, HUA X J. Characterization of P5CS1 gene involving in proline biosynthesis in Arabidopsis and its prokaryotic expression[J]. Journal of Yangzhou University (Agricultural and Life Science Edition), 2017, 38(3): 90-95.

    [16]ROOSENS N H, BITAR F A, LOENDERS K, et al. Overexpression of ornithine-δ-aminotransferase increases proline biosynthesis and confersosmotolerance in transgenic plants[J]. MolecBreedi, 2002, 9: 73-80.

    [17]汪志威. 煙草抗旱性狀配合力研究及抗性材料的篩選[D]. 貴陽:貴州大學(xué),2016.

    WANG Z W. Study on combining ability of drought resistant characters of tobacco and screening of resistant materials[D]. Guiyang: Guizhou University, 2016.

    [18]李曉青,荊月婷,馮全福,等. PEG模擬干旱脅迫對不同烤煙品種生理特性的影響[J]. 中國煙草科學(xué),2016,37(3):15-21.

    LI X Q, JING Y T, FENG Q F, et al. Effects of drought stress simulated by PEG on physiological characteristics in different flue-cured tobacco cultivars[J]. Chinese Tobacco Science, 2016, 37(3): 15-21.

    [19]袁有波,李繼新,丁福章,等. 不同干旱脅迫對煙草葉片保護酶活性的影響[J]. 中國煙草科學(xué),2009,30(5):10-13.

    YUAN Y B, LI J X, DING F Z, et al. Effects of drought stress on activity of cell defense enzymes in flue-cured tobacco leaves[J]. Chinese Tobacco Science, 2009, 30(5): 10-13.

    [20]周炎,丁松爽,趙莉,等. 烤煙品系LY1306在PEG干旱脅迫下的生理響應(yīng)及轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析[J]. 中國煙草學(xué)報,2017,23(6):36-44.

    ZHOU Y, DING S S, ZHAO L, et al. Physiological responses and transcriptome analysis of flue-cured tobacco line LY1306 under drought stress of PEG[J]. Acta Tabacaria Sinica, 2017, 23(6): 36-44.

    [21]崔保偉,陸引罡,張振中,等. 不同生育期水分脅迫對烤煙生理特性及化學(xué)品質(zhì)的影響[J]. 中國煙草科學(xué),2009,30(3):19-23.

    CUI B W, LU Y G, ZHANG Z Z, et al. Effect of water stress on physiological characteristic and chemical quality during different growth stage of flue-cured tobacco[J]. Chinese Tobacco Science, 2009, 30(3): 19-23.

    [22]王國琴. 煙草煙堿雜種優(yōu)勢表現(xiàn)及其基因差異表達分析[D]. 貴陽:貴州大學(xué),2015.

    WANG G Q. Studies on tobacco nicotine trait of heterosis and related gene differential expression analysis[D]. Guiyang: Guizhou University, 2015.

    [23]許晨璐,孫曉梅,張守攻. 基因差異表達與雜種優(yōu)勢形成機制探討[J]. 遺傳,2013,35(6):714-726.

    XU C L, SUN X M, ZHANG S G. Mechanism on differential gene expression and heterosis formation[J]. Hereditas (Beijing), 2013, 35(6): 714-726.

    [24]YAO Y Y, NI Z F, ZHANG Y H, et al. Identification of differentially expressed genes in leaf and root between wheat hybrid and its parental inbreds using PCR-based cDNA subtraction[J]. Plant Molecular Biology, 2005, 58(3): 367-384.

    [25]STUPAR R M, SPRINGER N M. Cistranscriptional variation in maize inbred lines B73 and Mo17 leads to additive expression patterns in the F1 hybrid[J]. Genetics, 2006, 173(4): 2199-2210.

    [26]TSAFTARIS S A, KAFKA M. Mechanisms of heterosis in crop plants[J]. J Crop Prod, 1998, 1(1): 95-111.

    [27]焦蓉,劉好寶,劉貫山,等. 論脯氨酸累積與植物抗?jié)B透脅迫[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報,2011,27(7):216-221.

    JIAO R, LIU H B, LIU G S, et al. Discussion of accumulation of proline and its relationship with osmotic stress tolerance of plants[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2011, 27(7): 216-221.

    猜你喜歡
    干旱脅迫雜種優(yōu)勢脯氨酸
    國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)脯氨酸恒格列凈片上市
    中老年保健(2022年3期)2022-11-21 09:40:36
    中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院系統(tǒng)總結(jié)蔬菜雜種優(yōu)勢的分子基礎(chǔ)及育種策略
    蔬菜(2021年7期)2021-11-27 03:45:25
    植物體內(nèi)脯氨酸的代謝與調(diào)控
    反式-4-羥基-L-脯氨酸的研究進展
    一氧化氮參與水楊酸對玉米幼苗根系抗旱性的調(diào)控
    干旱脅迫對馬尾松苗木脯氨酸及游離氨基酸含量的影響
    干旱脅迫對扁豆生長與生理特性的影響
    不同水分條件下硫肥對玉米幼苗葉片光合特性的影響
    干旱脅迫對金花茶幼苗光合生理特性的影響
    觀賞植物雜種優(yōu)勢利用研究與應(yīng)用
    亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 最近手机中文字幕大全| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 少妇的丰满在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产黄色免费在线视频| 1024视频免费在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美+日韩+精品| 人妻一区二区av| 亚洲男人天堂网一区| 国产毛片在线视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲人成网站在线观看播放| 成年动漫av网址| 国产精品不卡视频一区二区| 午夜福利,免费看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 考比视频在线观看| 欧美97在线视频| av视频免费观看在线观看| 少妇的逼水好多| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久精品免费免费高清| av视频免费观看在线观看| 国产毛片在线视频| 久久鲁丝午夜福利片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 老汉色av国产亚洲站长工具| 在线精品无人区一区二区三| 看免费成人av毛片| 波野结衣二区三区在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久人妻熟女aⅴ| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 视频在线观看一区二区三区| 中文欧美无线码| 亚洲天堂av无毛| 视频区图区小说| 精品久久蜜臀av无| 男女国产视频网站| 9色porny在线观看| 91精品国产国语对白视频| 免费观看性生交大片5| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 综合色丁香网| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久午夜福利片| 久久99热这里只频精品6学生| 一区二区三区四区激情视频| 午夜福利视频精品| 人妻人人澡人人爽人人| 老司机亚洲免费影院| 麻豆乱淫一区二区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成年av动漫网址| 一级爰片在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产精品 国内视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 边亲边吃奶的免费视频| 丰满少妇做爰视频| 美女福利国产在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 午夜老司机福利剧场| 国产精品嫩草影院av在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 18禁动态无遮挡网站| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产色婷婷99| 久久久精品94久久精品| 两个人看的免费小视频| 亚洲情色 制服丝袜| 一二三四中文在线观看免费高清| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 丝袜脚勾引网站| 一区二区三区激情视频| 久热久热在线精品观看| 老女人水多毛片| 午夜免费观看性视频| a级片在线免费高清观看视频| 五月开心婷婷网| 成人亚洲欧美一区二区av| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久久久久久久久久大奶| 国产黄频视频在线观看| 国产成人91sexporn| 国产亚洲欧美精品永久| www.熟女人妻精品国产| 我的亚洲天堂| 多毛熟女@视频| 久久久国产一区二区| √禁漫天堂资源中文www| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日日摸夜夜添夜夜爱| 婷婷色综合www| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲三区欧美一区| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精品一区蜜桃| 一区二区日韩欧美中文字幕| 18禁国产床啪视频网站| 女性生殖器流出的白浆| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产成人精品无人区| 亚洲美女黄色视频免费看| 美女主播在线视频| 亚洲av福利一区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 一级毛片我不卡| 欧美精品亚洲一区二区| 婷婷成人精品国产| 久久久a久久爽久久v久久| 国产精品不卡视频一区二区| 国产高清不卡午夜福利| 精品人妻偷拍中文字幕| 日本午夜av视频| 中文字幕色久视频| 我的亚洲天堂| 中文字幕精品免费在线观看视频| 一区二区三区激情视频| 国产精品久久久av美女十八| 18禁国产床啪视频网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲美女视频黄频| 国产精品 欧美亚洲| 精品国产国语对白av| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美成人午夜免费资源| 国产成人精品一,二区| 欧美日本中文国产一区发布| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲美女视频黄频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产在视频线精品| 久热久热在线精品观看| 日韩电影二区| 黄色配什么色好看| 日韩一本色道免费dvd| 精品国产一区二区久久| 久久久精品94久久精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 男人添女人高潮全过程视频| 国产成人精品福利久久| 精品福利永久在线观看| 少妇人妻 视频| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品久久久av美女十八| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲成人av在线免费| 只有这里有精品99| www.精华液| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 三级国产精品片| 国产又爽黄色视频| 90打野战视频偷拍视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 精品午夜福利在线看| 国产成人免费无遮挡视频| 97精品久久久久久久久久精品| 十八禁高潮呻吟视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 十分钟在线观看高清视频www| 日日爽夜夜爽网站| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩视频在线欧美| videosex国产| 国产精品偷伦视频观看了| 一边亲一边摸免费视频| 一级毛片我不卡| 国产爽快片一区二区三区| 尾随美女入室| 一级片免费观看大全| 少妇人妻久久综合中文| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av线在线观看网站| 欧美+日韩+精品| 日韩一本色道免费dvd| 精品久久蜜臀av无| 久久韩国三级中文字幕| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美xxⅹ黑人| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人aa在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 国产一区二区三区综合在线观看| 视频在线观看一区二区三区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 两性夫妻黄色片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久国产亚洲av麻豆专区| 在线免费观看不下载黄p国产| av在线老鸭窝| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品福利永久在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品午夜福利在线看| 亚洲四区av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 中文字幕人妻熟女乱码| 最近中文字幕高清免费大全6| 在线观看www视频免费| 久久久欧美国产精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| www.精华液| 亚洲精品日本国产第一区| 极品少妇高潮喷水抽搐| videosex国产| 免费观看a级毛片全部| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产成人精品福利久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久午夜福利片| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲美女黄色视频免费看| 热99国产精品久久久久久7| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲综合色网址| 欧美日韩亚洲高清精品| 91国产中文字幕| av不卡在线播放| 九草在线视频观看| 黑人猛操日本美女一级片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜福利影视在线免费观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 天美传媒精品一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品午夜福利在线看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 午夜日本视频在线| 美女国产高潮福利片在线看| 日本免费在线观看一区| 9191精品国产免费久久| 18禁国产床啪视频网站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 精品亚洲成国产av| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 少妇人妻精品综合一区二区| 人成视频在线观看免费观看| 日韩免费高清中文字幕av| 91精品三级在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩中字成人| 国产精品国产三级国产专区5o| 免费观看av网站的网址| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美激情极品国产一区二区三区| 观看美女的网站| 国产淫语在线视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 9191精品国产免费久久| 精品酒店卫生间| 国产人伦9x9x在线观看 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜福利一区二区在线看| 中国三级夫妇交换| av在线app专区| 欧美日韩一级在线毛片| 蜜桃国产av成人99| 亚洲av国产av综合av卡| 97人妻天天添夜夜摸| 人体艺术视频欧美日本| 好男人视频免费观看在线| 午夜福利,免费看| 有码 亚洲区| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲av男天堂| av在线app专区| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲av综合色区一区| 久久久亚洲精品成人影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲精品美女久久av网站| 七月丁香在线播放| 伊人久久国产一区二区| 亚洲欧洲国产日韩| 18禁观看日本| 国产国语露脸激情在线看| 免费看av在线观看网站| 国产精品偷伦视频观看了| 97人妻天天添夜夜摸| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 精品酒店卫生间| 人人澡人人妻人| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美少妇被猛烈插入视频| 午夜影院在线不卡| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 国产日韩欧美在线精品| 成年女人毛片免费观看观看9 | 久久国内精品自在自线图片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久人妻熟女aⅴ| 日日爽夜夜爽网站| 国产色婷婷99| h视频一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 麻豆av在线久日| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲av综合色区一区| 久久精品国产亚洲av涩爱| av网站在线播放免费| 性色av一级| videosex国产| 亚洲av男天堂| 亚洲欧美一区二区三区国产| 十八禁网站网址无遮挡| 天天操日日干夜夜撸| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲国产成人一精品久久久| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 另类精品久久| 久久久久久久久久久免费av| 在线观看三级黄色| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲内射少妇av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精品国产乱码久久久久久男人| 97在线视频观看| 午夜精品国产一区二区电影| 中文字幕人妻丝袜制服| 91久久精品国产一区二区三区| 中文字幕亚洲精品专区| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 高清在线视频一区二区三区| 久久99精品国语久久久| av电影中文网址| 国产欧美亚洲国产| 免费观看无遮挡的男女| 久久精品人人爽人人爽视色| 咕卡用的链子| 免费观看在线日韩| av女优亚洲男人天堂| 欧美精品一区二区大全| 免费黄色在线免费观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 秋霞在线观看毛片| 日本av免费视频播放| 免费看av在线观看网站| 日韩伦理黄色片| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 91在线精品国自产拍蜜月| 一级爰片在线观看| 69精品国产乱码久久久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 香蕉丝袜av| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲第一av免费看| 91aial.com中文字幕在线观看| 婷婷色综合www| 亚洲第一青青草原| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 在线观看免费高清a一片| 亚洲三级黄色毛片| 26uuu在线亚洲综合色| a 毛片基地| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 777米奇影视久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 在线 av 中文字幕| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 久热这里只有精品99| 亚洲综合色惰| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 午夜福利影视在线免费观看| 免费在线观看完整版高清| 少妇人妻久久综合中文| 韩国高清视频一区二区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久久久久精品精品| 国产色婷婷99| 视频区图区小说| 日韩中文字幕欧美一区二区 | www.自偷自拍.com| av在线观看视频网站免费| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 成人亚洲欧美一区二区av| 9色porny在线观看| 日韩电影二区| 美女国产视频在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 人成视频在线观看免费观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 性色av一级| 天天操日日干夜夜撸| 久久午夜福利片| 捣出白浆h1v1| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老熟女久久久| 国产一区二区三区av在线| 欧美日韩av久久| 丝袜美腿诱惑在线| av国产精品久久久久影院| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品一二三区在线看| 寂寞人妻少妇视频99o| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲精品一二三| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲经典国产精华液单| 99久久精品国产国产毛片| 男的添女的下面高潮视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 成年动漫av网址| 久久热在线av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 我要看黄色一级片免费的| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产乱人偷精品视频| 日韩中字成人| tube8黄色片| 国产精品 欧美亚洲| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 久久婷婷青草| 综合色丁香网| 熟女电影av网| 亚洲欧美一区二区三区国产| 观看av在线不卡| 日日啪夜夜爽| 国产精品欧美亚洲77777| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲国产最新在线播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲av男天堂| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲av日韩在线播放| 久久人人爽人人片av| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产精品人妻久久久影院| 热99久久久久精品小说推荐| 黄色毛片三级朝国网站| 在线看a的网站| 天堂俺去俺来也www色官网| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产免费又黄又爽又色| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 成人亚洲精品一区在线观看| a级毛片黄视频| av在线观看视频网站免费| 亚洲美女搞黄在线观看| av网站在线播放免费| 亚洲男人天堂网一区| 9191精品国产免费久久| 男女边摸边吃奶| 久热久热在线精品观看| 少妇的丰满在线观看| 1024香蕉在线观看| 美女福利国产在线| 母亲3免费完整高清在线观看 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美成人午夜免费资源| 男女边吃奶边做爰视频| 美女高潮到喷水免费观看| 老司机亚洲免费影院| 欧美精品一区二区免费开放| 日本91视频免费播放| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产成人精品福利久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 美女主播在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 观看美女的网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲av成人精品一二三区| 日韩电影二区| 日日爽夜夜爽网站| 天天操日日干夜夜撸| 欧美成人精品欧美一级黄| 大码成人一级视频| 在线精品无人区一区二区三| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美国产精品一级二级三级| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品99久久99久久久不卡 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲精品aⅴ在线观看| 午夜老司机福利剧场| 最新的欧美精品一区二区| www.自偷自拍.com| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产男女超爽视频在线观看| 99热全是精品| 十分钟在线观看高清视频www| 1024香蕉在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲国产精品一区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 热re99久久精品国产66热6| 成人国语在线视频| 亚洲,欧美,日韩| 春色校园在线视频观看| 国产精品一国产av| 一级爰片在线观看| av在线播放精品| 天天操日日干夜夜撸| 999久久久国产精品视频| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品一区二区在线观看99| 免费黄色在线免费观看| 桃花免费在线播放| 欧美+日韩+精品| 在现免费观看毛片| 精品国产乱码久久久久久小说| 午夜免费观看性视频| 99久久综合免费| 最新的欧美精品一区二区| 国产野战对白在线观看| 国产一区二区 视频在线| 免费观看av网站的网址| 少妇熟女欧美另类| 中国三级夫妇交换| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久久久网色| 日韩伦理黄色片| 国产av一区二区精品久久| 热re99久久国产66热| 18在线观看网站| 在线观看人妻少妇| 久久99热这里只频精品6学生| 天天操日日干夜夜撸| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品一区二区在线不卡| 免费观看av网站的网址| 中文字幕制服av| www.精华液| 欧美最新免费一区二区三区| 韩国高清视频一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 久久久国产精品麻豆| 国产日韩欧美视频二区| 国产精品人妻久久久影院| 岛国毛片在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 中国三级夫妇交换| 久久久久国产网址| 在线免费观看不下载黄p国产| 中国三级夫妇交换| 国产欧美亚洲国产| 亚洲五月色婷婷综合| 桃花免费在线播放| 捣出白浆h1v1| 国产精品免费视频内射| 最近最新中文字幕免费大全7| 99国产精品免费福利视频| a级毛片黄视频| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产有黄有色有爽视频| 欧美 日韩 精品 国产| 精品一区在线观看国产| 黄频高清免费视频| 男人舔女人的私密视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 精品第一国产精品| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲少妇的诱惑av| 看免费av毛片| 午夜日本视频在线| 国产日韩欧美在线精品| 99久久综合免费| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲综合精品二区| 最新中文字幕久久久久| 人妻一区二区av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 成人国产av品久久久|