識別早期肺癌進(jìn)展的驅(qū)動基因

蘇曉玉

（山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 山東 濟(jì)南 250013）

肺癌的癌前病變非典型腺瘤樣增生（AAH）組織具有以下發(fā)展規(guī)律，由非侵潤性原位腺癌（AIS）到微浸潤性腺癌（MIA）進(jìn)而成為廣泛侵潤性癌。

Noguchi分型有A-F六種不同肺腺癌病理類型。其中A和B型均為細(xì)支氣管肺泡癌并包含AAH和AIS兩種非侵潤型組織，為早期肺癌組織。C型含活躍成纖維細(xì)胞增殖，包含AIS和MIA。而D-F型則為廣泛侵潤性肺腺癌組織[1]。由于C型中包含侵潤型和非侵潤型組織，因此本實(shí)驗(yàn)提出早期肺癌惡性轉(zhuǎn)變的驅(qū)動基因存在于C型。

1.材料與方法

1.1 病理組織切片收集

本實(shí)驗(yàn)從臨床中收集T1a期肺腺癌病理切片（未經(jīng)治療）共246例，以Noguchi分型為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行A-F分類。

1.2 Noguchi C型子分類

本實(shí)驗(yàn)對Noguchi C大量觀察與總結(jié)發(fā)現(xiàn)了其可能存在兩種不同病理細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)差異。如圖1，其棕紅色區(qū)域可看作侵潤型區(qū)域而粉色覆蓋區(qū)域可看作非侵潤型區(qū)域。C1分類（圖1左）為不對稱性侵潤型組織增生，無原位非侵潤型半影增生且侵潤型區(qū)域核級較大。C2分類（圖1右）則呈現(xiàn)勻稱性侵潤型組織增生并伴有原位非侵潤型組織半影增生且兩區(qū)域核級大小均一致。

圖1 Noguchi C子分類模擬圖

1.3 基因測序

在下一代基因測序中，每個樣品采用Ionampliseq Library 96LV Kit2.0和結(jié)腸癌和肺癌研究 panelv2V2建立各自信息庫。92條擴(kuò)增子覆蓋于此面板22個基因（表1）所含的504個突變熱點(diǎn)區(qū)域上。應(yīng)用Ion Sphere QC試劑盒及添加引物和聚合酶對其DNA模板進(jìn)行微乳液PCR擴(kuò)增，并加載到測試芯片上最終使用生命技術(shù)人類基因組設(shè)備對樣本進(jìn)行測序。

表1 測序基因

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Hg19人類參考基因組配比，應(yīng)用離子記錄軟件分析測序數(shù)據(jù)。應(yīng)用Excel軟件對整體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較并制作圖表。

表2 下一代測序結(jié)果

2.結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)中共有25個樣本參與下一代基因測序，其中有22例為Noguchi C型其包含17例C1型與5例C2型，但C1型中有一案例未發(fā)現(xiàn)任何共同突變基因。如表2所示，綠色區(qū)域顯示了原位癌與侵潤型腫瘤區(qū)域存在共同的基因突變而紅色區(qū)域則表明基因突變僅存在于侵潤型腫瘤區(qū)域（單獨(dú)突變）。

C1樣本中有12例樣本出現(xiàn)單獨(dú)基因突變其突變位點(diǎn)共有27個，其中SMAD4、ERBB2、AKT、DDR2、PTEN、FGFR1基因只存在單獨(dú)突變且SMAD4、ERBB2突變率最高，各占總體25.9%。其次為TP53及AKT1基因。見表3。

C1病變最常見的共同突變基因?yàn)镋GFR基因，它占總體突變頻次的36.3%。KRAS、TP53、BRAF基因也同樣顯示了較高的突變比率。通過對比C2下一代基因測序檢測結(jié)果，我們同樣也發(fā)現(xiàn)其KRAS及TP53基因突變頻率最高。從而通過整體分析我們可以推斷在整體C型病變中KRAS和TP53基因突變頻率最為顯著。見表4。

表3 C1樣本中僅在浸潤型腫瘤區(qū)域含有基因突變的頻次

表4 C1樣本中原位癌和侵潤性腫瘤區(qū)域共有突變基因的頻次

3.討論

通過實(shí)驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)C1型病變在早期肺腺癌侵潤型和非侵潤型病理組織區(qū)域存在基因突變的轉(zhuǎn)化而C2型病變則顯示出其基因突變的一致性，因此此結(jié)果印證了本實(shí)驗(yàn)中對Noguchi C型病理組織的C1和C2病變分類且同樣證實(shí)了C1型病變中應(yīng)該存在從肺原位腺癌到肺侵潤型腺癌轉(zhuǎn)變的驅(qū)動基因，其為ERBB2，SMAD4，AKT1和TP53基因。因此我們認(rèn)為在肺腺癌C1型病變中若可以針對其不同的驅(qū)動基因提前檢測并應(yīng)用靶向藥物或其他相應(yīng)的輔助方法進(jìn)行治療，從理論上可有效的緩解早期肺腺癌患者的肺腺癌病理組織惡性進(jìn)展從而提高此類患者的生存率與治愈率。

ERBB2基因即Her-2基因，對于判斷乳腺癌預(yù)后具有重要意義。針對此靶點(diǎn)的曲妥珠單抗類藥物現(xiàn)如今已在乳腺癌早期及晚期臨床治療中被廣泛應(yīng)用。隨著現(xiàn)今分子醫(yī)學(xué)學(xué)科的深入發(fā)展及應(yīng)用，有關(guān)抗Her-2類的藥物如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗和拉帕替尼目前也被允許用于治療其他癌癥。因此我們認(rèn)為若可以對早期肺腺癌患者在早期進(jìn)行Her-2基因突變與否進(jìn)行篩查，再針對此類患者及時應(yīng)用現(xiàn)今已研究比較成熟的抗Her-2類相關(guān)藥物，將有益于提高患者的無進(jìn)展生存率。

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