食品中角鯊烯樣品前處理與檢測(cè)方法研究進(jìn)展

劉純友，靳國(guó)鋒，馬美湖*，耿 放，金永國(guó)，邱 寧

(1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北 武漢 430070；2.廣西科技大學(xué) 生物與化學(xué)工程學(xué)院，廣西 柳州 545006；3.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院，四川 成都 610106)

角鯊烯又名鯊烯，化學(xué)名為2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，是6個(gè)異戊二烯連接而成的開(kāi)環(huán)三萜類(lèi)化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示[1]。角鯊烯是存在于動(dòng)植物、微生物和海洋微藻等脂肪組織中的一種功能性活性脂質(zhì)，具有抗氧化[2]、調(diào)控膽固醇代謝[3-4]、防癌抗癌[3,5]、攜氧[5]、抗輻射[6]、解毒[7]、皮膚保濕和抑制微生物生長(zhǎng)[8]等多種生物活性功能，被廣泛應(yīng)用于功能食品、醫(yī)藥產(chǎn)品和化妝品的開(kāi)發(fā)。因此關(guān)于不同食品材料中角鯊烯含量的分析一直是國(guó)內(nèi)外相關(guān)學(xué)者研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。截止目前，國(guó)家衛(wèi)生部門(mén)尚未頒布食品中角鯊烯的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)外也未見(jiàn)關(guān)于不同食品中角鯊烯樣品前處理與檢測(cè)方法的綜述報(bào)道。

圖1 角鯊烯的化學(xué)結(jié)構(gòu)[1]Fig.1 Chemical structure of squalene[1]

食品中角鯊烯的分析方法主要包括樣品前處理方法與檢測(cè)方法。樣品前處理是分析的關(guān)鍵步驟之一，直接影響到測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和分析效率。根據(jù)樣品基質(zhì)的差異，樣品的前處理方法主要分為傳統(tǒng)提取方法和新型提取方法兩大類(lèi)。傳統(tǒng)提取方法包括有機(jī)溶劑提取法、皂化法和分步結(jié)晶法，新型提取方法有固相萃取法、固相微萃取法和超臨界CO2萃取法。關(guān)于角鯊烯的檢測(cè)技術(shù)最先是采用紅外光譜法(IR) 檢測(cè)深海鯊魚(yú)肝油中角鯊烯[9]，隨后有學(xué)者應(yīng)用氣相色譜法(GC)檢測(cè)橄欖油及其脫臭餾出物中角鯊烯含量[10]，以及采用高效液相色譜(HPLC)法和超高效液相色譜法(UPLC)檢測(cè)植物油、保健食品和有機(jī)特級(jí)粗榨橄欖油中角鯊烯含量[11-15]。最近，國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法測(cè)定植物油脫臭餾出物、南瓜籽油和茶籽油中角鯊烯的含量[16-19]。本文對(duì)食品中角鯊烯樣品前處理與檢測(cè)方法的研究概況和最新研究成果進(jìn)行系統(tǒng)梳理與歸納，并對(duì)今后食品中角鯊烯樣品前處理與檢測(cè)方法的發(fā)展方向進(jìn)行了展望，旨在為不同食品中角鯊烯的分析提供參考與借鑒。

1 食品中角鯊烯的樣品前處理方法

1.1 有機(jī)溶劑提取法

有機(jī)溶劑提取法是提取動(dòng)植物原料中角鯊烯的傳統(tǒng)方法之一。由于角鯊烯是一種親脂性的小分子物質(zhì)，一般采用乙醚、石油醚和正己烷等有機(jī)溶劑進(jìn)行提取[20]。李冬梅等[21]研究了不同提取溶劑對(duì)茶油中活性角鯊烯含量的影響，結(jié)果顯示正己烷作為溶劑提取得到的角鯊烯含量最高(7.62%)，而丙酮提取得到的角鯊烯含量較低(0.29%)。唐小紅等[22]研究了不同萃取溶劑對(duì)深海魚(yú)油中角鯊烯含量測(cè)定的影響，結(jié)果表明混合溶劑(正己烷∶氯仿=4∶1，體積比)萃取角鯊烯的效果最好(145.18 mg/g)，優(yōu)于正己烷、乙醚和石油醚的萃取效果。可見(jiàn)，不同有機(jī)溶劑對(duì)角鯊烯的提取有較大影響，這可能與樣品基質(zhì)特性復(fù)雜多樣關(guān)系密切。

1.2 皂化法

由于角鯊烯是一種不皂化物，皂化法是目前國(guó)內(nèi)外提取動(dòng)植物油脂中角鯊烯的主要前處理方法之一。試樣通常先用氯仿-甲醇法或索氏提取法提取油脂，再加入氫氧化鉀溶液對(duì)油脂進(jìn)行皂化反應(yīng)，去除甘油三酯和磷脂等可皂化物，再用正己烷或二氯甲烷提取不皂化物[23-24]。角鯊烯在提取過(guò)程中易發(fā)生乳化現(xiàn)象，降低回收率，加入氯化鈉溶液可以抑制樣品前處理過(guò)程中乳化現(xiàn)象的發(fā)生，提高角鯊烯的回收率。

1.3 分步結(jié)晶法

采用分步結(jié)晶法時(shí)，試樣先用甲醇-丙酮溶液溶解，然后冷凍保存，溶液過(guò)濾后減壓濃縮回收溶劑，殘留物再用丙酮溶解進(jìn)樣分析[25-26]。Nenadis等[27]采用分步結(jié)晶的方法，先用甲醇-丙酮溶液溶解橄欖油樣，然后置于(-22±1) ℃保存24 h以去除飽和甘油三酯，上層溶液過(guò)濾，經(jīng)減壓濃縮富集后進(jìn)樣分析。由于分步結(jié)晶法存在耗時(shí)長(zhǎng)、操作繁瑣等缺點(diǎn)，目前其作為角鯊烯的前處理方法應(yīng)用較少。

1.4 固相萃取法

固相萃取法(Solid phase extraction,SPE)采用選擇性吸附、選擇性脫附的方式對(duì)樣品中的角鯊烯進(jìn)行提取、分離、富集和凈化，是近年來(lái)植物油中角鯊烯含量測(cè)定的新興前處理方法。SPE法是目前國(guó)內(nèi)外提取橄欖油中角鯊烯的常用方法之一，通常先用正己烷或甲醇將固相萃取柱(Strata SI-1柱和Bond Elute LRC氨丙基柱)活化，將樣品溶液溶解后加入固相萃取柱，再用少量弱極性有機(jī)溶劑將角鯊烯洗脫下來(lái)，經(jīng)減壓濃縮后進(jìn)樣分析[28]。Sagratini等[29]先用正己烷對(duì)硅膠固相萃取柱進(jìn)行活化處理，上樣后用正己烷-乙酸乙酯(9∶1,體積比)洗脫，洗脫液經(jīng)氮?dú)飧患笥卯惐?四氫呋喃(7∶3，體積比)溶解，采用高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中角鯊烯、生育酚和β-胡蘿卜素的同時(shí)測(cè)定。與有機(jī)溶劑提取法、皂化法相比，SPE消耗有機(jī)溶劑量大大降低，樣品回收率高，克服了兩者干擾多、回收率低的缺點(diǎn)，但SPE需要專(zhuān)門(mén)的固相萃取柱和固相萃取裝置，分析成本較高。

1.5 固相微萃取法

固相微萃取法(Solid phase microextraction,SPME)是在固相萃取基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)樣品前處理新技術(shù)，主要基于石英纖維表面涂漬的不同極性固定相對(duì)樣品基質(zhì)中的目標(biāo)化合物進(jìn)行萃取和富集，再在色譜儀的進(jìn)樣口進(jìn)行解吸，大大縮短了樣品的前處理時(shí)間，提高了分析速度和方法靈敏度。趙明橋等[30]選取100 μm非極性固定相聚二甲基硅氧烷(Polydimethylsiloxane,PDMS)作為SPME萃取頭，研究了海水中角鯊烯的萃取時(shí)間、攪拌速度、介質(zhì)離子強(qiáng)度、解吸溫度和解吸時(shí)間對(duì)角鯊烯濃度測(cè)定的影響，通過(guò)監(jiān)測(cè)海水中角鯊烯濃度的變化來(lái)預(yù)報(bào)海洋赤潮的發(fā)生。SPME方法簡(jiǎn)單、萃取速度快、富集效率高，并可與GC-MS儀進(jìn)行聯(lián)機(jī)使用，可實(shí)現(xiàn)食品中角鯊烯的快速定性與定量分析。筆者采用SPME/GC-MS技術(shù)對(duì)凍干牦牛肉樣品中角鯊烯進(jìn)行快速測(cè)定，研究發(fā)現(xiàn)凍干牦牛肉中存在角鯊烯，其含量達(dá)315.43 μg/g[5]。

1.6 超臨界CO2萃取法

超臨界CO2萃取法是目前萃取植物源角鯊烯的天然綠色新方法之一。Kraujalis等[31]選擇超臨界CO2萃取壓力為55 MPa，添加5%的乙醇作為助溶劑對(duì)莧菜籽中角鯊烯和生育酚進(jìn)行萃取，不皂化物中角鯊烯和生育酚含量分別為0.289 g/100 g和317.3 mg/kg。Xu等[32]采用超臨界CO2對(duì)荷花花粉中荷花油、β-胡蘿卜素、甾醇和角鯊烯進(jìn)行萃取，并用兩因素中心旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)萃取條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，在萃取壓力38.2 MPa和溫度49.7 ℃條件下萃取2.5 h，荷花花粉的產(chǎn)油量、β-胡蘿卜素、甾醇和角鯊烯的產(chǎn)量分別為47.18 g/kg、377.86 mg/kg、84.94 mg/kg 和 490.90 mg/kg，且萃取壓力和溫度對(duì)β-胡蘿卜素、植物甾醇和角鯊烯的產(chǎn)量有顯著影響。與其他方法相比，超臨界CO2萃取法具有萃取條件溫和、選擇性好、提取效率高、無(wú)有毒有害溶劑殘留、能較好地保持角鯊烯生物活性的優(yōu)點(diǎn)，但也存在設(shè)備成本高，萃取釜不能連續(xù)萃取的缺點(diǎn)。通過(guò)對(duì)不同食品中角鯊烯樣品前處理方法進(jìn)行比較分析，其優(yōu)缺點(diǎn)歸納于表1。

表1 食品中角鯊烯樣品前處理方法比較分析Table 1 Comparative analysis of squalene samples pretreatment methods in food

(續(xù)表1)

2 角鯊烯檢測(cè)方法

目前，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的食品中角鯊烯含量的檢測(cè)方法主要包括氣相色譜法、液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，其中以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和液相色譜法應(yīng)用較多。

2.1 氣相色譜法

氣相色譜法是目前測(cè)定食品中角鯊烯含量的重要分析方法之一。采用GC測(cè)定食品中角鯊烯的含量，試樣通常需先進(jìn)行皂化或甲酯化前處理，提取樣品中不皂化物后進(jìn)樣分析[33]。GC檢測(cè)食品中角鯊烯時(shí)，毛細(xì)管柱類(lèi)型、柱溫優(yōu)化、載氣流速和檢測(cè)器均是主要影響因素。

2.1.1色譜柱的選擇色譜柱的選擇是影響分離樣品中角鯊烯的重要因素之一，包括色譜柱的固定相和規(guī)格(柱長(zhǎng)、內(nèi)徑和膜厚)的選擇。目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道分析角鯊烯的色譜柱主要有極性和非極性毛細(xì)管色譜柱，其中以非極性毛細(xì)管色譜柱為主，固定相主要有100%甲基聚硅氧烷和5%苯基-甲基聚硅氧烷等[34-36]。因角鯊烯是一種強(qiáng)非極性化合物，故選取非極性固定相較為合適；由于角鯊烯在正常大氣壓的沸點(diǎn)為285 ℃，為保證角鯊烯在汽化室中充分汽化，因此固定相需耐高溫且低流失。

2.1.2柱溫的選擇柱溫是影響角鯊烯分離效果的主要因素之一，主要有恒溫和程序升溫兩種方式。當(dāng)樣品基質(zhì)中組分較為簡(jiǎn)單時(shí)可采用恒溫方式。對(duì)于基質(zhì)較為復(fù)雜且沸點(diǎn)范圍較寬的樣品，可采用程序升溫方式，以實(shí)現(xiàn)角鯊烯與樣品中其他組分完全分離。柱溫的高低直接影響角鯊烯的分離效果和分離時(shí)間。降低柱溫在一定程度上可以改善樣品中角鯊烯與其他組分的分離度，但會(huì)增加分析時(shí)間。提高柱溫可以增加角鯊烯的傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，但柱溫不宜超過(guò)色譜柱的最高耐受溫度，否則固定液易發(fā)生降解和流失，導(dǎo)致分離效率大大降低。

2.1.3檢測(cè)器的選擇GC常用的檢測(cè)器有氫火焰離子化檢測(cè)器(Flame ionization detector,FID)、電子捕獲檢測(cè)器(Electron capture detector，ECD)、火焰光度檢測(cè)器(Flame photometric detector,FPD)和氮磷檢測(cè)器(Nitrogen phosphorus detector,NPD)。不同類(lèi)型檢測(cè)器對(duì)不同化合物的選擇性和靈敏度不同，且具有不同的適用范圍。ECD檢測(cè)器對(duì)含鹵素等電負(fù)性強(qiáng)的化合物有較高的靈敏度；FPD檢測(cè)器主要對(duì)含硫、磷的化合物有響應(yīng)信號(hào)；NPD檢測(cè)器對(duì)含氮、磷、硫和鹵素等元素的化合物較靈敏;FID檢測(cè)器對(duì)碳?xì)浠衔锏臋z測(cè)有較高靈敏度。由于角鯊烯是由碳和氫元素組成的碳?xì)浠衔?，故FID是目前文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定角鯊烯使用最為普遍的檢測(cè)器[24,36-41]。

2.1.4載氣及其流速的優(yōu)化載氣及其流速是影響角鯊烯分離的重要因素之一。載氣的選擇與檢測(cè)器對(duì)載氣的要求有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道GC檢測(cè)角鯊烯應(yīng)用較多的檢測(cè)器為FID。鄒海民等[36]研究了不同載氣流速1.0、1.5、2.0 mL/min對(duì)功能食品中角鯊烯分離的影響，結(jié)果顯示載氣流速為2.0 mL/min時(shí)，角鯊烯的峰形較好。合適的載氣流速可以改善角鯊烯的峰形，減少色譜峰拖尾，提高分析效率。關(guān)于食品中角鯊烯的氣相色譜檢測(cè)方法應(yīng)用如表2所示。

表2 食品中角鯊烯的氣相色譜檢測(cè)方法Table 2 Gas chromatography detection methods of squalene in food

(續(xù)表2)

2.2 液相色譜法

液相色譜法(LC)是國(guó)內(nèi)外分析食品中角鯊烯含量的主要檢測(cè)方法之一，包括高效液相色譜(HPLC)和超高效液相色譜(UPLC)。與HPLC相比,UPLC使用更小顆粒直徑填料(≤2.0 μm)、死體積和更高工作壓力(8 000～15 000 psi)及線性速度，較HPLC在靈敏度、分離度和分析速度方面分別提高了2倍、2倍和9倍[45]。由此可見(jiàn)，UPLC是未來(lái)檢測(cè)食品中角鯊烯的重要發(fā)展方向。分離模式選擇、流動(dòng)相體系選擇和檢測(cè)器選擇是影響LC檢測(cè)食品中角鯊烯的主要因素。

2.2.1分離模式的選擇分離模式是影響食品中角鯊烯分離效果的主要因素之一。基于固定相與流動(dòng)相之間的極性差異，LC檢測(cè)食品中角鯊烯的分離模式主要包括正相色譜與反相色譜兩種[29-31]，其中以反相分離模式應(yīng)用較多。反相分離模式使用的反相色譜柱主要包括C30[31]和C18[45-46]柱，其中以C18柱占絕大多數(shù)。反相C18柱的固定相是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合極性相對(duì)較弱的十八碳正構(gòu)烷烴。正相色譜柱的固定相以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合極性官能團(tuán)，如氨基(NH2)和氰基團(tuán)(CN)。正相色譜柱適合分離光學(xué)異構(gòu)體和反相色譜柱不能分離的極性較大的化合物。由于角鯊烯是弱極性化合物，故反相C18比較適合食品中角鯊烯的分析測(cè)定，而目前正相色譜柱使用則相對(duì)較少。

2.2.2流動(dòng)相體系的選擇流動(dòng)相體系直接影響到樣品中角鯊烯的分析效率。根據(jù)樣品中目標(biāo)化合物的極性差異，文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定食品中角鯊烯使用的流動(dòng)相體系主要有一元、二元和多元溶劑體系。當(dāng)分析的樣品組分較為簡(jiǎn)單時(shí)，采用一元溶劑體系較多，主要包括乙腈和甲醇等[11,46]，而樣品組分較為復(fù)雜時(shí)應(yīng)用二元或三元溶劑體系進(jìn)行梯度洗脫居多。二元溶劑體系主要有乙腈-水[14]、丙酮-乙腈[47]、正己烷-異丙醇[48]、甲醇-水[49]、乙腈-異丙醇[50]和甲醇-乙腈[51]。三元溶劑體系主要有乙腈-異丙醇-正己烷[12]、乙腈-甲醇-異丙醇[29]、乙腈-甲醇-二氯甲烷[31]和甲醇-異丙醇-醋酸[52]等。在洗脫模式方面，LC檢測(cè)食品中角鯊烯可分為等度洗脫和梯度洗脫兩種。當(dāng)樣品組分較為簡(jiǎn)單時(shí)，采用等度洗脫模式；若樣品組分較為復(fù)雜時(shí)，則采用梯度洗脫模式。

2.2.3檢測(cè)器的選擇目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道LC檢測(cè)角鯊烯的檢測(cè)器有紫外-可見(jiàn)(UV-Vis)檢測(cè)器、二極管陣列檢測(cè)器(PDA)和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)等，其中以UV-Vis和PDA檢測(cè)器占絕大多數(shù)，這可能與角鯊烯在紫外光區(qū)有較強(qiáng)的吸收峰有密切聯(lián)系。筆者采用PDA檢測(cè)器在190～400 nm波長(zhǎng)范圍對(duì)角鯊烯進(jìn)行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)角鯊烯在195 nm波長(zhǎng)處有最大紫外吸收峰，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Lu等[25]的報(bào)道相一致。關(guān)于食品中角鯊烯的液相色譜檢測(cè)方法應(yīng)用如表3所示。

表3 食品中角鯊烯的液相色譜檢測(cè)方法Table 3 Liquid chromatography detection methods of squalene in food

2.3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)是目前分析食品中角鯊烯的主流檢測(cè)技術(shù)之一，可對(duì)樣品中角鯊烯進(jìn)行準(zhǔn)確定性定量分析。與GC、HPLC相比，GC-MS具有較高的靈敏度和選擇性，可以滿(mǎn)足復(fù)雜樣品基質(zhì)中角鯊烯的痕量分析需要。GC-MS聯(lián)用法包括氣相色譜和質(zhì)譜兩部分，其中氣相色譜是角鯊烯的“分離器”，質(zhì)譜則是角鯊烯的“檢測(cè)器”。

2.3.1角鯊烯的離子化方式GC-MS分析中最常用的離子化方式有電子轟擊離子化(EI)和化學(xué)離子化(CI)兩種，其中EI是目前文獻(xiàn)報(bào)道GC-MS測(cè)定食品中角鯊烯最常用的離子化方式。筆者應(yīng)用GC-EI-MS聯(lián)用定性分析牦牛肉中角鯊烯時(shí)發(fā)現(xiàn)，角鯊烯的分子離子峰[M+]為m/z410，[M+]受到EI源中高能電子束的轟擊，進(jìn)一步碎裂產(chǎn)生m/z69、81、95、137、231等多個(gè)特征碎片離子，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與趙明橋等[30]的報(bào)道相一致。

2.3.2角鯊烯的掃描模式質(zhì)譜質(zhì)量分析器主要采用全掃描(Scan)和選擇離子掃描(SIM)兩種掃描模式。Scan掃描主要用于組分的定性分析，而SIM掃描常用于微量或痕量組分的定量分析。汪運(yùn)明等[18]采用GC-MS聯(lián)用法對(duì)茶油中角鯊烯進(jìn)行SIM掃描，以三十二烷為內(nèi)標(biāo)，檢測(cè)離子角鯊烯為m/z69、81、95，正三十二烷為m/z57、71、85，實(shí)現(xiàn)了對(duì)興寧和贛州茶油中角鯊烯的準(zhǔn)確定量分析，含量分別為12.43、97.05 μg/mL。毛多斌等[56]應(yīng)用GC-MS聯(lián)用法在質(zhì)荷比m/z35～500范圍內(nèi)對(duì)葵花籽油、南瓜籽油、山楂籽油和省沽油籽油進(jìn)行Scan掃描，實(shí)現(xiàn)了對(duì)4種功能性植物油中角鯊烯和維生素E的準(zhǔn)確定性。由于SIM掃描模式在設(shè)定時(shí)間對(duì)單個(gè)離子掃描的次數(shù)明顯高于Scan模式，因此SIM掃描模式測(cè)定的靈敏度高于Scan模式。

2.3.3角鯊烯的定性分析GC-MS可以通過(guò)質(zhì)譜譜庫(kù)檢索和解析對(duì)樣品中角鯊烯進(jìn)行定性，常用的質(zhì)譜譜庫(kù)有NIST庫(kù)和EPA/NIH/Wiley庫(kù)。相同試驗(yàn)條件下，樣品中是否含有角鯊烯的定性過(guò)程可從以下兩方面考慮：一是樣品中角鯊烯選定的特征碎片離子的保留時(shí)間與角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的特征碎片離子的保留時(shí)間相符合；二是樣品中角鯊烯選定的特征碎片離子的豐度比與角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的特征碎片離子的豐度比相符合。

2.3.4角鯊烯的定量分析目前文獻(xiàn)報(bào)道角鯊烯的定量方法主要有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法兩種。外標(biāo)法是使用較為廣泛的定量方法之一。當(dāng)選用外標(biāo)法定量時(shí)，樣品前處理過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件、人為操作因素以及儀器本身的工作穩(wěn)定性等易給檢測(cè)結(jié)果帶來(lái)較大的誤差；當(dāng)采用內(nèi)標(biāo)法定量，以角鯊烯與內(nèi)標(biāo)物的比值定量，樣品前處理過(guò)程中的角鯊烯和內(nèi)標(biāo)物影響相同，可以減少上述因素帶來(lái)的誤差，提高對(duì)角鯊烯檢測(cè)的準(zhǔn)確性。關(guān)于食品中角鯊烯的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法應(yīng)用歸納于表4。

表4 食品中角鯊烯的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法Table 4 Gas chromatography-mass spectrometry detection methods of squalene in food

(續(xù)表4)

3 結(jié)論與展望

除深海鯊魚(yú)肝臟外，角鯊烯在樣品中含量低，樣品基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)較多，且角鯊烯本身化學(xué)性質(zhì)較為活潑，在光照和高溫條件下容易發(fā)生氧化降解，增加了分析檢測(cè)的難度。因此，在實(shí)際檢測(cè)工作中需根據(jù)樣品的基質(zhì)特性，不同樣品前處理方法的應(yīng)用范圍及分析儀器的特點(diǎn)選擇合適的樣品前處理方法。鑒于角鯊烯是一種不皂化物，因此皂化法是國(guó)內(nèi)外萃取不同食品中角鯊烯的經(jīng)典前處理方法，但該法步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、消耗大量有機(jī)溶劑。超臨界CO2萃取法、固相萃取和固相微萃取不需或僅需少量有機(jī)溶劑，特別是超臨界CO2萃取法的萃取條件較為溫和，萃取效率高，特別適合熱敏性高、易發(fā)生氧化功能活性物質(zhì)的萃取，可能是今后萃取不同食品材料中角鯊烯的重要發(fā)展方向。不同食品中角鯊烯的檢測(cè)方法有氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜法，其中氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的高靈敏度、高選擇性以及可提供分子結(jié)構(gòu)信息等優(yōu)勢(shì)使其逐漸成為角鯊烯的主流檢測(cè)方法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜生物質(zhì)樣品中角鯊烯含量的快速準(zhǔn)確測(cè)定。因此，發(fā)展高效、高通量、高選擇性的樣品前處理與高靈敏度的檢測(cè)技術(shù)成為未來(lái)發(fā)展的重要方向，并將具有更為廣闊的應(yīng)用前景。

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