MYD88基因多態(tài)性與缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證患者M(jìn)RI表現(xiàn)的相關(guān)性研究▲

韋寶平 古 聯(lián)

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧市 530000)

缺血性腦卒中(ischemic stroke，IS)，屬中醫(yī)“中風(fēng)”范疇，認(rèn)為其基本的病機(jī)為人體陰陽(yáng)失調(diào)，繼而氣血逆亂，上犯于腦，脈絡(luò)不通而發(fā)病，主要臨床表現(xiàn)為語(yǔ)言不利、口角渦斜、半身不遂，甚則卒然昏仆、不省人事的一種疾病[1-2]。研究表明[3-4]，在缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證中，MYD88 基因rs7744多態(tài)性與LDL水平顯著相關(guān)，LDL代謝水平影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，與人體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生相關(guān)。本研究選擇MYD88基因的一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)rs7744，探討MYD88基因遺傳多態(tài)性與缺血性腦卒中患者的頭顱MRI影像表現(xiàn)的關(guān)聯(lián)性。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年10月至2016年6月期間在廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腦病科住院的患者，均為經(jīng)臨床及影像學(xué)檢查確診為缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證，共納入631例，其中女266例，年齡38～100歲，平均69.5歲；男365例，年齡31～79歲，平均63.0歲。本研究方案經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象均在知情同意原則下，簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合腦血管病學(xué)第四屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議(1995年在王永炎院士指導(dǎo)下)訂正的《各類(lèi)腦血管病診斷要點(diǎn)》的西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②符合1996年全國(guó)腦病急癥科研協(xié)作組制訂的《中風(fēng)病診斷療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(試行)》中風(fēng)中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)以及相關(guān)證候的分型辨證標(biāo)準(zhǔn)；③研究對(duì)象在急性起病期行頭顱CT檢查排除出血性腦血管病，并于發(fā)病3 d內(nèi)做頭顱MRI檢查包括常規(guī)序列和彌散加權(quán)成像序列(DWI)，成像顯示有與神經(jīng)系統(tǒng)定位診斷相對(duì)應(yīng)的急性腦梗死病灶；④均有符合缺血性腦卒中臨床表現(xiàn)為：言語(yǔ)不利、肢體麻木、半身偏癱、口角歪斜等表現(xiàn)中的2個(gè)及2個(gè)以上；⑤均經(jīng)2名經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)合格的主治醫(yī)師職稱(chēng)或以上的中醫(yī)醫(yī)師(若2名中醫(yī)醫(yī)師對(duì)中醫(yī)辨證不一致，則交由3名副主任醫(yī)師及以上職稱(chēng)的專(zhuān)家小組討論)診斷為缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①由其他原因如腦外傷、腫瘤、感染、心源性栓塞、腦血管畸形等引起的缺血性腦中風(fēng)；②合并其他疾病如自身免疫性疾病或嚴(yán)重感染性疾病或存在嚴(yán)重心、肝、腎功能障礙者；③既往有過(guò)重大傳染病如梅毒、艾滋病等以及嚴(yán)重的精神性疾病者；④其他原因致MRI彌散加權(quán)成像序列等影像學(xué)資料不完整或不能完成既定血液樣本指標(biāo)檢測(cè)者；⑤研究期間不配合者。

1.4 影像學(xué)資料收集 主要采集病灶大小、病變部位、病灶數(shù)目及對(duì)周?chē)M織的影響。病變部位分為額葉、顳葉、頂葉、島葉、枕葉、放射冠區(qū)、胼胝體、基底節(jié)區(qū)、丘腦、腦干、小腦。病灶大?。簠⒄誂dams分型將病灶成像中的最大徑小于1.5 cm以下的定義為腔隙性梗死，病灶直徑在1.6～3.0 cm之間的為小梗死，病灶直徑在3.1～5.0 cm之間的為中梗死，病灶直徑大于5.0 cm的為大梗死。病灶數(shù)目分為單發(fā)以及多發(fā)(1個(gè)梗死灶以上)。病灶對(duì)周?chē)M織的影響主要依據(jù)病變是否出現(xiàn)中線移位和/或壓迫腦室。

1.5 DNA提取 所有研究對(duì)象均在上午空腹抽取外周靜脈血3 mL，抗凝并放置于-4℃恒溫環(huán)境保存，7 d內(nèi)檢測(cè)其基因組DNA。應(yīng)用北京天根科技有限公司生產(chǎn)的TIANamp Blood DNA Kit(離心柱形)血液基因組DNA 提取試劑提取血液基因組DNA，后分裝為3管，放置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 基因分型 采用基因組富集法從微列陣數(shù)據(jù)篩選出影響缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證的MYD88基因?yàn)楹蜻x基因，選取MYD88基因的1個(gè)位點(diǎn)rs7744的引物設(shè)計(jì)和合成以及基因型檢測(cè)工作交予北京博淼生物科技有限公司完成。SNPs基因分型應(yīng)用時(shí)間飛行質(zhì)譜技術(shù)(MassARRAY)(Sequenom公司，美國(guó))完成。引物應(yīng)用Sequenom Assay Designer 3.1軟件(美國(guó)Sequenom，San Diego，CA) 設(shè)計(jì)。

1.7 統(tǒng)計(jì)及分析 采用四種遺傳模型分析基因多態(tài)性位點(diǎn)的關(guān)聯(lián)性，其中，次要等位基因型(minor allele)較低頻率用A1來(lái)表示，主要等位基因型(major allele)較高頻率用A2來(lái)表示，見(jiàn)下表：

加性模型(Additivemodel)A1A1/A1A2/A2A2顯性模型(Dominantmodel)A1A1+A1A2/A2A2隱性模型(Recessivemodel)A1A1/A1A2+A2A2等位基因模型(Allelicmodel)A1/A2

應(yīng)用PLINK軟件對(duì)缺血性腦卒中患者的MRI(頭核磁共振)表現(xiàn)與基因型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析(http://pngu.mgh.harvard.edu/～purcell/plink/)。疾病與暴露的危險(xiǎn)度的相關(guān)性采用比值比(OR)以及其95%可信區(qū)間(95%CI)表示。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 rs7744與梗死部位的關(guān)聯(lián)分析 MYD88基因多態(tài)性位點(diǎn)rs7744與缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證梗死病灶發(fā)生在額葉、頂葉、顳葉、枕葉、島葉、放射冠區(qū)、丘腦、小腦不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián) (P均>0.05)；與梗死病灶發(fā)生在基底節(jié)區(qū)、腦干存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián) (P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 MYD88基因多態(tài)性位點(diǎn)rs7744與梗死部位的關(guān)聯(lián)分析

2.2 rs7744與梗死病灶大小的關(guān)聯(lián)分析 MYD88基因多態(tài)性位點(diǎn)rs7744與缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證大、小梗死及腔隙性梗死不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P均>0.05)；與中梗死存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(加性模型、顯性模型、等位模型P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 MYD88基因多態(tài)性位點(diǎn)rs7744與梗死病灶大小的關(guān)聯(lián)分析

2.3 rs7744與梗死病灶數(shù)目及病灶對(duì)周?chē)M織影響的關(guān)聯(lián)分析 MYD88基因多態(tài)性位點(diǎn)rs7744與缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證病灶數(shù)目以及病灶對(duì)周?chē)M織影響不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián) (P均>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 MYD88基因多態(tài)性位點(diǎn)rs7744與梗死病灶數(shù)目及病灶對(duì)周?chē)M織影響的關(guān)聯(lián)分析

3 討 論

越來(lái)越多的證據(jù)提示缺血性中風(fēng)是由環(huán)境與遺傳因素的相互影響而引發(fā)的。近年來(lái)，相當(dāng)多的研究關(guān)注遺傳風(fēng)險(xiǎn)變異對(duì)缺血性中風(fēng)的影響，且有研究[5]證實(shí)缺血性中風(fēng)與多基因遺傳相關(guān)。

髓樣分化因子88(MYD 88)是TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)接分子, 是負(fù)責(zé)向下游轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)的關(guān)鍵因子[6]。在TLR信號(hào)路徑被激活后，MYD88作為其中一種關(guān)鍵的接頭蛋白，首先被招募，然后介導(dǎo)下游的信號(hào)傳導(dǎo)，最終致先天性免疫反應(yīng)激活[7]。Wei等[8]發(fā)現(xiàn)在高脂飼養(yǎng)條件下的MYD88基因敲除小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化病變速度明顯減慢。劉洋等[9]通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)MYD88蛋白依賴(lài)性信號(hào)通路介導(dǎo)了腦缺血損傷后產(chǎn)生的下游炎性反應(yīng)。Vartanian等[10]研究發(fā)現(xiàn)缺血性中風(fēng)后，腦組織死亡會(huì)出現(xiàn)TLR4/MYD88信號(hào)通路表達(dá)異常，引發(fā)下游的瀑式連級(jí)反應(yīng)，可致腦組織損傷發(fā)生以及發(fā)展。綜合上述，MYD88基因影響動(dòng)脈粥樣硬化形成，可能對(duì)缺血性腦卒中的起病發(fā)生作用，通過(guò)將祖國(guó)醫(yī)學(xué)與基因遺傳關(guān)聯(lián)研究緊密接軌，可推動(dòng)個(gè)性化醫(yī)療向精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展。

缺血性腦卒中早期起病隱匿，如何實(shí)現(xiàn)對(duì)IS的早期診斷和救治一直是臨床醫(yī)師關(guān)注的重點(diǎn)。MRI彌散加權(quán)成像(DWI)可在起病數(shù)分鐘內(nèi)敏感地檢測(cè)體內(nèi)水分子的布朗運(yùn)動(dòng)狀況， DWI是發(fā)病早期精確地檢測(cè)病灶的部位以及范圍大小最為有效的方法[11]。另外，通過(guò)使用對(duì)比劑來(lái)成像的PWI (灌注加權(quán)成像) 也可以用來(lái)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)缺血組織當(dāng)下的灌注狀態(tài)。目前，在對(duì)缺血半暗帶的研究中，DWI/PWI不匹配可以用來(lái)判定缺血半暗帶，指導(dǎo)臨床進(jìn)行快速的溶栓治療[12-13]。

辨證論治是中醫(yī)在防治中風(fēng)中的特點(diǎn)和精髓。陳永芊[14]發(fā)現(xiàn)缺血性腦卒中經(jīng)絡(luò)患者的辨證分型與MRI影像成像表現(xiàn)具有一定的規(guī)律特點(diǎn)，在發(fā)病部位上風(fēng)痰阻絡(luò)證、氣虛血瘀證梗死的病灶部位分別多見(jiàn)于基底節(jié)區(qū)、放射冠區(qū)，痰熱腑實(shí)證常見(jiàn)大片狀梗死灶，缺血性中風(fēng)患者的梗死部位、面積、數(shù)量在的MRI 影像表現(xiàn)與中醫(yī)辨證分型的有一定的關(guān)聯(lián)性。李寶然[15]研究亦顯示腦 MRI-DWI(磁共振彌散加權(quán)成像)與缺血性腦卒中辨證分型存在相關(guān)性。以上研究提示，MRI可作為中醫(yī)望診的延伸，為中醫(yī)辨證的客觀化研究提供了更多的參考依據(jù)。杜亞強(qiáng)等[16]研究發(fā)現(xiàn)MTHFR基因多態(tài)性與腦缺血病變的影像表現(xiàn)呈明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)。還有研究[17]發(fā)現(xiàn)急性缺血性腦卒中患者在攜帶Apo E(攜帶載脂蛋白 E)基因ε4 等位基因時(shí)患者腦梗死灶體積比非攜帶者有明顯的增長(zhǎng)率，在同樣的缺血程度下，也更容易發(fā)生腦梗塞，并且在頸動(dòng)脈供血區(qū)發(fā)生梗死率更高。以上研究表明，基因多態(tài)性可能對(duì)急性缺血性中風(fēng)的影像學(xué)特點(diǎn)存在影響，并且對(duì)缺血性腦卒中的病情發(fā)展和臨床預(yù)后有影響。

綜上所述，目前尚未有關(guān)于MYD88基因遺傳多態(tài)性與缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證MRI表現(xiàn)的關(guān)聯(lián)研究。本研究顯示MYD88基因可能與缺血性中風(fēng)的發(fā)生相關(guān)，其位點(diǎn)rs7744多態(tài)性與缺血性中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻證患者在MRI成像顯示病灶發(fā)生在基底節(jié)區(qū)、腦干有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，與發(fā)生中梗死有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。

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