山東地區(qū)鴨源大腸桿菌耐藥性分析

郭 磊,李開鋒,王述柏,張啟迪

(1.青島農業(yè)大學動物醫(yī)學院,山東 青島 266109;2.威海出入境檢驗檢疫局,山東 威海 264200)

鴨大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的局部或全身性感染的細菌性疾病,其主要發(fā)病特征為心包炎、肝周炎和急性敗血癥等。由于大腸桿菌的血清型復雜,給免疫防治帶來一定的困難,因此,藥物防治是目前控制該病的主要手段,但在臨床治療和實際養(yǎng)殖過程中濫用抗生素,導致耐藥大腸桿菌的大量出現,不僅造成抗菌藥物在獸醫(yī)臨床上的治療失敗,而且其耐藥基因可通過食物鏈進入人體,使人體腸道菌產生相應的耐藥性,對人類的健康安全構成威脅。本試驗檢測了山東部分地區(qū)113株鴨源大腸桿菌對15種常用抗菌藥物的敏感性,并對其耐藥性及耐藥譜進行分析,為獸醫(yī)臨床正確選擇藥物治療鴨大腸桿菌病提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 113株大腸桿菌為2012年9月-2013年8月自青島、煙臺、濰坊、濟南等8個規(guī)?；B(yǎng)鴨場病鴨中分離。質控菌株為大腸桿菌ATCC25922標準株,購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2 藥品與試劑 藥敏紙片(頭孢噻吩、頭孢噻肟、頭孢噻呋、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、加替沙星、左旋氧氟沙星、氨芐西林、克林霉素、復方新諾明、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、亞胺培南),均購自杭州天和微生物試劑有限公司。細菌微量生化反應管,購自青島高科園海博生物技術有限公司。

1.3 培養(yǎng)基 麥康凱瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、MH培養(yǎng)基、LB肉湯培養(yǎng)基,均購自青島高科園海博生物技術有限公司。

1.4 大腸桿菌的分離鑒定 無菌采集病死鴨的心臟、肝臟等病料,接種于2 mL LB肉湯中,37℃恒溫培養(yǎng)24 h。將培養(yǎng)液接種于麥康凱瓊脂平板,37℃培養(yǎng)20 h,觀察菌落生長情況。挑取典型的菌落染色、鏡檢,純培養(yǎng)后進行生化鑒定,三糖鐵試驗、吲哚試驗、M.R.、V-P、麥芽糖、葡萄糖、乳糖等發(fā)酵試驗,確定為大腸桿菌者保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 藥敏試驗 將測試菌株接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板,于35℃恒溫培養(yǎng)16～24 h,挑取3～4個單菌落,用4 mL生理鹽水配成0.5 Mcfarland(麥氏標準)的菌懸液,用無菌棉簽接種至4個MH瓊脂平板上,每個平板放置3～4個藥敏紙片,37℃培養(yǎng)20 h,測量抑菌圈直徑,每次試驗時,保證質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內。

1.6 耐藥分析 試驗方法參考世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的Kirby-Bauer法,藥敏結果判定按照美國臨床檢驗標準委員會(NCCLS)的標準判斷敏感、中介或耐藥。

2 結果

2.1 大腸桿菌的分離鑒定從采集的150份病鴨心臟、肝臟病料中,分離鑒定出113株細菌,經生化試驗結果分析,均符合大腸桿菌的特征,證明此113株分離菌是大腸桿菌,其分離率為75.3%。

2.2 藥敏試驗結果

2.2.1 菌株對15種抗菌藥的耐藥情況 113株鴨源大腸桿菌對15種抗菌藥物的藥敏試驗結果見表1。復方新諾明、四環(huán)素、紅霉素、克林霉素、慶大霉素、氨芐西林、左旋氧氟沙星、阿米卡星、氯霉素、環(huán)丙沙星10種抗菌藥物的耐藥率高于50%,而復方新諾明的耐藥率達到了100%;耐藥率低于20%的抗菌藥物有亞胺培南、頭孢噻呋和加替沙星3種。113株鴨源大腸桿菌對15種抗菌藥物的敏感性也有所不同,其中亞胺培南、頭孢噻呋、加替沙星、頭孢噻肟4種的敏感率高于50%。

2.2.2 大腸桿菌的多重耐藥 113株鴨源大腸桿菌表現出不同程度的耐藥且至少對1種抗菌藥表現出耐藥,同時耐14種抗菌藥物的菌株已達2.67%。同時對3種或以上藥物表現出耐藥的菌株占92.92%,其中同時耐12種藥物的菌株所占比例最大,為16.81%,其次是耐7種藥物的菌株為12.39%。細菌多重耐藥情況詳見圖1。

2.2.3 大腸桿菌的耐藥譜 鴨源大腸桿菌對15種抗菌藥物的耐藥譜有56種,最普遍的耐藥譜型是復方新諾明-四環(huán)素-紅霉素-克林霉素-慶大霉素-氨芐西林-左旋氧氟沙星-阿米卡星-氯霉素-環(huán)丙沙星。

圖1 113株鴨源大腸桿菌多重耐藥性情況

表1 113株鴨源大腸桿菌對15種抗菌藥物的藥敏試驗結果

3 討論

3.1 鴨源大腸桿菌的耐藥情況 本試驗分析了從山東地區(qū)分離的113株鴨源大腸桿菌對15種抗菌藥物的敏感性,結果顯示,分離菌對四環(huán)素類和磺胺類藥物的耐藥率最高,其中對復方新諾明的耐藥率達到100%,對四環(huán)素的耐藥率達到93%。參考養(yǎng)殖場臨床用藥情況,這兩種藥物作為常用藥物使用,大腸桿菌在藥物長期選擇壓力作用下,產生了耐藥性,導致這兩種藥物已基本失去了臨床治療價值。

試驗顯示,亞胺培南是最敏感的藥物,但與2009年張珍珍[1]的報道相比,豬源大腸桿菌對亞胺培南的耐藥率高達55.65%,說明不同動物間的耐藥率存在很大差異。但亞胺培南不能作為獸藥使用,所以應該選擇頭孢噻呋作為有效的治療藥物。氯霉素因對骨髓造血機能有抑制作用,現已被禁用于食品動物,與劉吉山[2]報道的相比,分離株對氯霉素的敏感率由2005年報道的17%升到26%,提示在終止使用抗生素一定時間之后,細菌可能恢復其對藥物的敏感性。

氟喹諾酮類藥物作為一種廣譜抗菌藥物,其耐藥率也在逐年升高[3],第一代氟喹諾酮類藥物萘啶酸已基本失去臨床治療價值;第三代的氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率已經達到了50%以上,結果與劉建華[4]的研究相符;但與朱恒乾的研究有一定差距,說明不同地區(qū)的用藥也存在一定的差異,第四代加替沙星的耐藥率僅為 19.4%,敏感率高達 56.6%。

3.2 分離菌的多重耐藥 試驗結果顯示,所分離的113株鴨源大腸桿菌均有不同程度的耐藥,且多重耐藥現象嚴重。部分菌株對多達14種藥物耐藥,且菌株中以同時耐12種、7種、6種、9種和11種藥物的耐藥菌居多,同時耐3種或3種以上藥物的菌株占總分離株的92.92%,參考央珍[5]報道的重慶鴨源大腸桿菌耐3種或3種以上藥物的菌株達到100%、于學輝[6]報道的92.3%相一致,說明大腸桿菌多重耐藥問題在全國范圍內都很嚴重。

交叉耐藥性現象提示在獸醫(yī)臨床用藥時,應先進行細菌的藥物敏感性試驗,再進行選擇,以避免同一種或幾種藥物長期使用,影響臨床治療效果及產生細菌耐藥性[7]。需要引起重視的是,對氟喹諾酮類藥物耐藥的大腸桿菌,對復方新諾明、四環(huán)素和克林霉素等的耐藥率均在65%以上,說明鴨源大腸桿菌不僅對同類藥物存在交叉耐藥,而且對其他種類的抗菌藥物也有嚴重的多重耐藥現象,這對鴨源大腸桿菌病的藥物治療提出了新的挑戰(zhàn)。

據報道,大腸桿菌很多耐藥基因位于質粒上,而細菌的耐藥性可以通過質粒水平傳播到其他細菌,甚至可以通過食物鏈進入人體,將內源耐藥菌群的耐藥基因擴散到環(huán)境,對人體健康造成很大威脅[8]。雖然一般認為質粒介導的耐藥機制屬于低水平的,但有學者研究發(fā)現,這種低水平的耐藥性可使細菌數量達到出現突變所需的濃度,從而出現高度耐藥,會對畜禽養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的經濟損失,對人的健康會產生無可估量的影響[9]。因此加強對病原菌的耐藥性檢測刻不容緩。

本試驗監(jiān)測的鴨源大腸桿菌對常用抗菌藥物的耐藥水平普遍較高,總體耐藥情況不容樂觀,歸結原因主要是臨床用藥不規(guī)范引起的,其結果能夠反映山東部分地區(qū)臨床用藥情況?？咕幬锬退幮缘谋O(jiān)測為鴨場臨床用藥提供了依據,對指導臨床合理用藥,減緩細菌耐藥性的產生具有重要意義。為了延長抗菌藥物的使用周期,更好地控制疾病的發(fā)生,應合理的使用抗菌藥物,對癥下藥,定期進行細菌藥敏試驗,輪換使用抗菌藥物等。

參考文獻:

[1] 張珍珍,吳俊偉,唐建華,等.重慶市豬源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性監(jiān)測[J].中國獸醫(yī)雜志,2009,45(4):85-87.

[2] 劉吉山,沈志強,王燕,等.我國部分地區(qū)禽致病性大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗[J].中國家禽,2005,27(7):14-16.

[3] 杜向黨,張素梅,李新生,等.致病性大腸桿菌對頭孢噻呋和氟喹諾酮類藥物的敏感性[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(8):73.

[4] 劉建華,苑麗,李鳳娟,等.鴨致病性大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(7):161-163.

[5] 央珍,聶奎.重慶市部分地區(qū)鴨源大腸桿菌的O抗原血清型及耐藥性[J].西南大學學報(自然科學版),2011,33(8):53-56.

[6] 于學輝,張煥榮,湯承,等.我國西南地區(qū)鴨病原性大腸桿菌耐藥性檢測[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2008(4):5-8.

[7] 宋立,寧宜寶,沈建忠,等.中國不同年代食品動物大腸桿菌耐藥性調查研究[J].中國科學 C輯:生命科學,2009(7):692-698.

[8] 徐繼英,劉俊林,李先波,等.我國部分地區(qū)奶牛乳房炎源大腸桿菌生物學特性及耐藥性分析[J].農業(yè)生物技術學報,2012,20(9):1 035-1 041.

[9] 劉健華,陳杖榴.喹諾酮類抗菌藥耐藥新機制[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(1):54-57.