4種商陸提取物對(duì)雞腎腫癥治療效果的試驗(yàn)

王文文,張炳亮,董發(fā)明,馬 霞,張國(guó)祖,黃一帆

(1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,河南 洛陽(yáng) 471023;2.河南省康星藥業(yè)股份有限公司,河南 鄭州 451464;3.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院,河南 鄭州 450011;4.福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350002)

雞腎腫癥是對(duì)雞的腎腫大、腎結(jié)石、腎炎、腎病、內(nèi)臟痛風(fēng)、尿酸鹽沉積、酸中毒等的統(tǒng)稱,也叫腎臟腫大綜合征,是現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)中雞死亡的主要疾病之一,不同日齡的雞群均可發(fā)生,死亡率10% ～30%[1],當(dāng)其他疾病伴隨著腎腫癥發(fā)生時(shí),其死亡率將會(huì)增加1倍以上[2],嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

商陸也叫當(dāng)陸、章柳、白昌、夜呼、馬尾,是商陸科植物商陸(Phytolacca acinosaRoxb.)或垂序商陸(Phytolacca americanaL.)的干燥根。味辛,性平,有毒,歸肺、脾、腎、大腸經(jīng),主治水腫、疝氣腫大、腹脹、疏通五臟,消除各種水腫,外用解毒散結(jié)[3-4]。中藥具有天然無(wú)公害、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)勢(shì)。本試驗(yàn)分別采用水煎法、水提醇沉法、減壓干燥法、滲漉法4種提取方法制備商陸提取物,旨在研究不同提取物對(duì)人工誘發(fā)的雞腎腫癥的治療效果,篩選治療效果最佳的商陸提取方法,為研制開發(fā)治療雞腎腫癥效果更好的藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 PF-300型全自動(dòng)生化分析儀,購(gòu)自深圳市普康電子有限公司;JY系列多功能電子天平,購(gòu)自上海衡平儀器儀表廠;酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,購(gòu)自賽默飛世爾(上海)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)藥物 商陸試驗(yàn)用藥由河南省康星藥業(yè)股份有限公司中獸藥新制劑實(shí)驗(yàn)室制備,通過水煎法、水提醇沉法(醇沉終濃度90%)、減壓干燥法、滲漉法(90%乙醇滲漉)4種提取方法制備得4種商陸提取物,濃度均為每1 mL相當(dāng)于原生藥1 g。高效液相色譜法測(cè)得商陸皂苷甲(Esculentoside A,EsA)的含量依次為 0.73 mg/mL、0.98 mg/mL、0.68 mg/mL、1.72 mg/mL;消腫解毒散,購(gòu)自河北征宇制藥有限公司;作為本試驗(yàn)的對(duì)照藥;磺胺甲基異惡唑(SMZ)原粉,購(gòu)自鄭州天順公司,作為本試驗(yàn)造模用藥。

1.3 檢測(cè)試劑 腎組織NO檢測(cè)試劑盒由R&D System Inc.,Minneapolis,USA.生產(chǎn),實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書,UA、Cr標(biāo)準(zhǔn)品由廣州科方生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。

1.4 動(dòng)物模型建立 1日齡AA肉雞正常飼喂到第10日齡,采用SMZ 0.8 g/kg體重拌料給藥,連續(xù)給SMZ 7 d,雞只出現(xiàn)精神沉郁、采食和飲水量明顯下降、糞便稀薄及個(gè)別雞只出現(xiàn)死亡時(shí)開始給各商陸提取物。

1.5 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 420只AA肉雞隨機(jī)分成7組,分別為商陸水煎組、商陸醇沉組、商陸減壓干燥組、商陸滲漉組、消腫解毒散組、陽(yáng)性對(duì)照組、空白對(duì)照組,每組60只,每組均分為3個(gè)重復(fù)。1～4組為造模用藥治療組,在飲水中按每千克體重分別添加0.5 mL水煎商陸提取物、醇沉商陸提取物、減壓干燥商陸提取物、滲漉商陸提取物,連續(xù)給藥5 d,第5組按照說(shuō)明書在飼料中添加消腫解毒散為用藥對(duì)照組,第6組造模不用藥為陽(yáng)性對(duì)照組,第7組不造模不用藥為空白對(duì)照組。具體分組與處理見表1。

表1 分組與處理

1.6 測(cè)定指標(biāo) 每日觀察并記錄各組采食、飲水、精神、糞便、死亡等情況。在給藥前及給藥結(jié)束、停藥第5天,對(duì)存活雞只分別稱重,統(tǒng)計(jì)增重情況。在給藥前、用藥結(jié)束及停藥5 d每組隨機(jī)抽取6只雞翅靜脈采血制備血清,生化分析儀測(cè)定血清UA和Cr的含量。在給藥前、用藥結(jié)束及停藥5 d每組隨機(jī)抽取6只雞翅靜脈采血制備血清,酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清中腎組織NO的含量。在給藥前、給藥結(jié)束后及停藥第5天每組隨機(jī)抽取6只雞剖檢,取腎臟去掉脂肪和系膜稱重測(cè)定腎指數(shù)變化,腎指數(shù)=腎重(g)/活體重(kg)。

1.7 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 痊愈:雞精神活潑,采食飲水完全正常。顯效:雞存活,但精神、飲水及采食等未完全恢復(fù)正常。無(wú)效:雞死亡,剖檢出現(xiàn)腎臟腫大、花斑腎及尿酸鹽沉積等癥狀。有效率=(痊愈數(shù)+顯效數(shù)/樣本數(shù))×100%。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行Duncan′s多重分析,比較各組差異的顯著性;試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組臨床癥狀 在造模后用藥前,各模型組雞精神沉郁、拉稀、飲水和采食量下降;各用藥組在用藥第2天,采食和精神明顯轉(zhuǎn)好,在用藥的第4天,各用藥組的雞采食量和精神狀況進(jìn)一步恢復(fù),拉稀癥狀也逐漸好轉(zhuǎn);用藥結(jié)束時(shí),各用藥組采食量和飲水基本正常,陽(yáng)性對(duì)照組的飲水采食量仍顯著低于各用藥組和空白對(duì)照組,各用藥組中商陸滲漉組雞只精神、采食狀況恢復(fù)最好。

2.2 各用藥組體重變化 在給藥前,各模型組間雞只體重差異不顯著,但顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05);在用藥結(jié)束后,商陸各用藥組和獸藥對(duì)照組體重均顯著低于空白對(duì)照組,但高于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05);停藥第5天,各用藥組的體重均高于陽(yáng)性對(duì)照組,商陸滲漉組體重高于其他各用藥組,但仍低于空白對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 用藥前后體重變化

2.3 各組總體療效 各商陸用藥組和獸藥對(duì)照組的死亡率均顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05);各商陸用藥組和獸藥對(duì)照組的治愈率和有效率均顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組,但低于空白對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 各組的總體療效

2.4 血清中UA的含量變化 在給藥前,各模型組血清中UA的含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05);在給藥結(jié)束后,各商陸用藥組和獸藥對(duì)照組血清中UA的含量高于空白對(duì)照組,但顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05);停藥5 d時(shí),各商陸用藥組和獸藥對(duì)照組血清中UA的含量顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05),商陸滲漉組血清中UA的含量高于空白對(duì)照組但差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果見表4。

表4 各組血清UA的含量 (μmol/L)

2.5 血清中Cr的含量變化 在給藥前,模型組血清中Cr的含量高于空白對(duì)照組(P<0.05);給藥結(jié)束后各用藥組的Cr含量低于陽(yáng)性對(duì)照組,但仍高于空白對(duì)照組(P<0.05);停藥第5天時(shí),商陸滲漉組Cr的含量顯著低于其他各用藥組和陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05),和空白對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。 結(jié)果見表 5。

表5 各組血清中Cr的含量 (μmol/L)

2.6 腎組織NO的含量變化 在給藥前,各模型組腎組織NO的含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05);給藥結(jié)束后,商陸各用藥組及獸藥對(duì)照組的腎組織NO含量仍高于空白對(duì)照組但顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05),停藥第5天,商陸滲漉組腎組織NO的含量高于空白對(duì)照組但差異不顯著(P>0.05)。 結(jié)果見表6。

表6 各組中腎組織NO的含量

2.7 各組腎臟指數(shù)變化 在給藥前,各模型組的腎臟指數(shù)均高于空白對(duì)照組(P<0.05);給藥結(jié)束后商陸各用藥組和獸藥對(duì)照組的腎臟指數(shù)均低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05);停藥第5天時(shí),商陸各用藥組和獸藥對(duì)照組與空白對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05),但均低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果見表7。

表7 各組腎臟指數(shù)變化

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果顯示,不同方法提取得到的商陸提取物均可改善腎腫、腎損傷模型雞的體重、精神、采食、拉稀等臨床癥狀,各用藥組的治愈率和有效率均高于陽(yáng)性對(duì)照組,說(shuō)明商陸提取物對(duì)該藥物性引起的雞腎腫癥具有較好的治療效果,其中商陸滲漉提取物的治愈率和有效率高于其他各用藥組,效果最佳。

UA和Cr是反映腎功能的重要指標(biāo)[5],UA是動(dòng)物體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物,當(dāng)體內(nèi)UA過高,易引起腎功能衰退,常見于急慢性腎炎、腎損傷、痛風(fēng)等,Cr是肌肉在體內(nèi)代謝的產(chǎn)物,Cr主要由腎小球?yàn)V過排除體外,血清Cr的濃度變化主要由腎小球?yàn)V過率來(lái)決定,Cr濃度升高則表明,腎小球?yàn)V過能力下降,Cr過高意味著腎臟受損。有學(xué)者研究表明,臟器指數(shù)的升高表明該臟器受損,可作為判定病變的指標(biāo)之一[6]。本研究結(jié)果顯示,商陸提取物能顯著降低血清中UA和Cr的含量及腎指數(shù),尤其是商陸滲漉提取物對(duì)UA、Cr和腎指數(shù)的下調(diào)水平高于其他各用藥組,表明商陸提取物可能通過下調(diào)血清中UA、Cr的濃度達(dá)到治療雞腎腫的療效。

NO對(duì)腎臟組織具有保護(hù)和損傷的雙重作用,NO低水平持續(xù)合成,可起到抗炎、抑制腎小球系膜細(xì)胞增生的作用,但大量合成NO則會(huì)導(dǎo)致組織急性損傷,引發(fā)炎癥。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組雞只腎組織NO的含量顯著升高,商陸能降低人工引起的腎損傷雞只腎組織NO的水平,其中商陸滲漉提取物能顯著降低腎組織NO含量,和空白對(duì)照組相比略高于空白對(duì)照組但差異不顯著(P>0.05)。龐軍[7-8]等研究發(fā)現(xiàn),商陸粗提物能降低阿霉素所致腎損傷大鼠的NO的濃度,起到保護(hù)腎臟的作用,和本研究結(jié)果一致。

文獻(xiàn)記載EsA是從中國(guó)商陸的塊根中提取的一種三萜皂苷類化合物,并有學(xué)者發(fā)現(xiàn)EsA對(duì)系膜增生性腎小球腎炎具有降低尿蛋白,改善腎小球血液循環(huán),保護(hù)腎臟的作用[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),滲漉法提取的EsA是4種提取方法中含量最高的(1.72 mg/mL),在治療中的效果也尤為突出,EsA可是商陸中能起到通腎利尿、抗炎作用的有效成分之一,其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

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