鍶元素對(duì)黑鯛幼魚(yú)耳石的標(biāo)記效果分析

張 翼，姜亞洲，徐開(kāi)達(dá)，蔣宏雷，焦海峰，張 輝，程家驊，李圣法

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090；

2.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部重點(diǎn)漁場(chǎng)漁業(yè)資源科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021；3.寧波市海洋與漁業(yè)研究院，浙江寧波 315012）

增殖放流苗種標(biāo)記作為開(kāi)展增殖放流功效評(píng)估的重要基礎(chǔ)，也是制約功效評(píng)估精度的關(guān)鍵因素［1］?，F(xiàn)階段，依據(jù)增殖放流物種的生物生態(tài)學(xué)特征，結(jié)合增殖放流功效評(píng)估的具體需求，研建生態(tài)高效的增殖放流苗種標(biāo)記方法已成為增殖放流基礎(chǔ)科研領(lǐng)域的重要內(nèi)容［2－3］。黑鯛（Sparus macrocephalus）是廣泛分布于我國(guó)沿海的島礁性近底層魚(yú)類，也是我國(guó)重要的增殖放流對(duì)象［4－7］。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)黑鯛增殖放流工作以規(guī)?；帕餍∫?guī)格人工繁育苗種形式為主，受苗種規(guī)格、標(biāo)志物經(jīng)濟(jì)成本和標(biāo)記過(guò)程時(shí)間成本等因素的限制，掛牌標(biāo)記、金屬線碼標(biāo)記和熒光色素可見(jiàn)式標(biāo)記等傳統(tǒng)物理標(biāo)記手段難以對(duì)其實(shí)施規(guī)?；瘶?biāo)記操作，研建適用于小規(guī)格黑鯛增殖放流苗種的規(guī)?；瘶?biāo)記方式已成為有效推進(jìn)黑鯛增殖放流功效評(píng)估工作的當(dāng)務(wù)之急。

耳石元素指紋分析技術(shù)的發(fā)展為上述標(biāo)記需求提供了一種解決思路。耳石是沉積在真骨魚(yú)類內(nèi)耳中的一種礦物結(jié)構(gòu)，主要由碳酸鈣、蛋白質(zhì)及一些微量元素組成。耳石中微量元素的含量與周圍水環(huán)境特征休戚相關(guān)，水環(huán)境中的相關(guān)元素經(jīng)過(guò)代謝可穩(wěn)定沉積在特定耳石區(qū)位，形成記錄魚(yú)體生活履歷的耳石元素指紋信息［8］。鍶（Sr）是魚(yú)類耳石元素指紋研究中的熱點(diǎn)元素，不僅被廣泛應(yīng)用于魚(yú)類群體識(shí)別、生活環(huán)境重建等研究領(lǐng)域［9－11］，也被用作開(kāi)展增殖放流魚(yú)苗耳石元素的指紋標(biāo)記。在增殖放流魚(yú)苗的人工培育階段，通過(guò)階段性提升增殖放流魚(yú)苗飼養(yǎng)水體中鍶元素濃度，使其在處理魚(yú)苗特定耳石區(qū)位富集，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)處理魚(yú)苗耳石的元素指紋標(biāo)記。因該標(biāo)記方法具備適用于小規(guī)格增殖放流魚(yú)苗的規(guī)?；瘶?biāo)記操作、標(biāo)記信息終生攜帶等技術(shù)特點(diǎn)，現(xiàn)已成為標(biāo)記放流領(lǐng)域的探索熱點(diǎn)［12－14］。

本研究以黑鯛增殖放流魚(yú)苗為標(biāo)記處理對(duì)象，通過(guò)開(kāi)展基于鍶元素的耳石元素指紋標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，探究不同濃度富鍶水體對(duì)黑鯛增殖放流魚(yú)苗耳石的元素指紋標(biāo)記效果，研究標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)黑鯛存活率和生長(zhǎng)狀況的影響，同時(shí)分析標(biāo)記結(jié)束后鍶元素在標(biāo)記魚(yú)苗肌體中的衰減規(guī)律，以期為利用該項(xiàng)技術(shù)開(kāi)展黑鯛增殖放流魚(yú)苗規(guī)模化標(biāo)記的可行性提供現(xiàn)實(shí)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

基于鍶元素的黑鯛耳石元素指紋標(biāo)記實(shí)驗(yàn)于寧波市海洋與漁業(yè)科技創(chuàng)新基地進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)對(duì)象為該基地人工繁殖培育、用以增殖放流的30日齡黑鯛魚(yú)苗，從中選擇體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊、體色正常的黑鯛作為實(shí)驗(yàn)用魚(yú)［平均體長(zhǎng)：（8.64±0.50）mm］。黑鯛魚(yú)苗養(yǎng)殖水體的鍶元素濃度為本標(biāo)記實(shí)驗(yàn)的處理因素，標(biāo)記實(shí)驗(yàn)共計(jì)設(shè)置4個(gè)標(biāo)記處理組和1個(gè)對(duì)照組，每個(gè)處理組和對(duì)照組均設(shè)有3個(gè)平行樣，每個(gè)平行樣選用200尾實(shí)驗(yàn)用黑鯛魚(yú)苗，分別置入容積為120 L的養(yǎng)殖容器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理。對(duì)照組所用養(yǎng)殖水體為正常養(yǎng)殖用海水，其鍶元素濃度為6.07 mg·L－1；4個(gè)標(biāo)記處理組所用富鍶養(yǎng)殖水體的鍶元素濃度分別為 18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1，分別通過(guò)向正常養(yǎng)殖用海水中人為添加SrCl2·6H2O加以配備完成。標(biāo)記處理前，實(shí)驗(yàn)魚(yú)苗在正常養(yǎng)殖水體進(jìn)行2 d適應(yīng)性暫養(yǎng)；隨后，按上述實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)控養(yǎng)殖水體鍶元素濃度，開(kāi)展標(biāo)記處理，標(biāo)記處理共計(jì)歷時(shí)7 d。標(biāo)記處理結(jié)束后，將各處理組養(yǎng)殖水體的鍶元素濃度恢復(fù)至正常養(yǎng)殖海水水平，繼續(xù)飼養(yǎng)17 d，隨即結(jié)束實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)期間，實(shí)驗(yàn)魚(yú)苗的餌料投喂和養(yǎng)殖設(shè)施管理均依實(shí)驗(yàn)基地黑鯛魚(yú)苗培育規(guī)范操作。

實(shí)驗(yàn)期間，在完成標(biāo)記處理和實(shí)驗(yàn)結(jié)束兩個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)分別統(tǒng)計(jì)各處理組和對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗的平均體長(zhǎng)和死亡率，用以分析標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)黑鯛魚(yú)苗生長(zhǎng)狀況和存活率的影響。另，于標(biāo)記處理結(jié)束、結(jié)束后3 d、10 d和17 d共計(jì)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別從各平行樣隨機(jī)選取5尾黑鯛魚(yú)苗，置入玻璃器皿冷凍保存，用以后續(xù)檢測(cè)分析。此外，在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的增殖目標(biāo)水域-象山港采集黑鯛當(dāng)齡野生幼體30尾，用以驗(yàn)證標(biāo)記處理個(gè)體與增殖水域野生黑鯛幼體是否存在耳石元素組成差異。

1.2 樣品處理

所取黑鯛樣本經(jīng)體長(zhǎng)和稱重測(cè)量后，取出矢耳石，用于耳石元素測(cè)定；黑鯛肌體經(jīng)微波消解儀消解后，利用Thermo X Series II ICP-MS進(jìn)行肌體鍶元素含量分析。

耳石樣本經(jīng)研磨、拋光處理，制成可觀測(cè)到耳石核心的厚度約為0.5 mm的耳石薄片，采用激光燒蝕聯(lián)動(dòng)的電感耦合等離子質(zhì)譜儀（LAICP-MS）對(duì)耳石樣本進(jìn)行元素分析。利用NewWave 213激光剝蝕系統(tǒng)沿長(zhǎng)軸半徑從耳石核心至邊緣進(jìn)行激光線掃描剝蝕后（圖1），通過(guò)Thermo X Series II ICP-MS進(jìn)行鍶、鈣測(cè)定。在無(wú)任何樣品條件下對(duì) Ar、He混合氣體進(jìn)行 LAICPMS測(cè)試，重復(fù)10次，3倍空白標(biāo)準(zhǔn)偏差所對(duì)應(yīng)的濃度即為各元素的檢出限，以確定 LAICPMS的元素檢測(cè)限水平。檢測(cè)標(biāo)樣為USGS MACS-3碳酸鹽標(biāo)樣。激光剝蝕的波長(zhǎng)為213 nm，剝蝕孔徑為32μm，剝蝕深度為20μm，激光移動(dòng)速度為20μm·s－1。

圖1 黑鯛耳石及元素檢測(cè)分析路徑Fig.1 Map showing the sagitta of juvenile Sparus macrocephalus and line transect for element analysis注：C為耳石核心；L為耳石長(zhǎng)軸；W為耳石短軸；R為半徑Note：C：sagitta core；L：long axis of sagitta；W：minor axis of sagitta；R：radius

1.3 數(shù)據(jù)分析

Sr／Ca摩爾比值是基于鍶元素耳石元素指紋分析的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。依據(jù)上述檢測(cè)分析結(jié)果，首先計(jì)算獲取各檢測(cè)樣本從耳石核心至耳石邊緣的Sr／Ca值；然后，通過(guò)對(duì)比分析各處理組和對(duì)照組魚(yú)苗在耳石標(biāo)記目標(biāo)區(qū)位的Sr／Ca值差異，闡釋標(biāo)記處理效果。耳石元素指紋標(biāo)記成功的判別標(biāo)準(zhǔn)參考同位素的判別方式，如下［15］：在耳石標(biāo)記目標(biāo)區(qū)，存在超過(guò)3倍激光剝蝕孔徑長(zhǎng)度的耳石區(qū)位，其任意點(diǎn)位Sr／Ca值均超過(guò)標(biāo)記檢測(cè)基線。標(biāo)記檢測(cè)基線設(shè)定為對(duì)照組個(gè)體在相應(yīng)耳石區(qū)位Sr／Ca值均值與其3.3倍標(biāo)準(zhǔn)差之和。

本研究利用t檢驗(yàn)和單因子方差分析（ANOVA）檢驗(yàn)標(biāo)記處理后各處理組和對(duì)照組魚(yú)苗存活率和肌體鍶元素含量差異，用以分析標(biāo)記過(guò)程對(duì)處理魚(yú)苗存活率和肌體鍶含量的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)記組和處理組個(gè)體的Sr／Ca值

對(duì)野生黑鯛幼體和標(biāo)記實(shí)驗(yàn)對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗耳石的Sr／Ca值檢測(cè)分析結(jié)果顯示：上述耳石樣本從耳石核心至邊緣（沿矢耳石長(zhǎng)軸半徑，下同）的Sr／Ca值均變異幅度較小，基本保持穩(wěn)定（圖2）。野生黑鯛幼體和標(biāo)記實(shí)驗(yàn)對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗耳石在檢測(cè)路徑上的Sr／Ca值分別為1.91±0.21和2.02±0.35，t檢驗(yàn)顯示：兩者不存在顯著性差異（P＞0.05）。

對(duì)標(biāo)記處理結(jié)束后17 d所取的處理組黑鯛魚(yú)苗進(jìn)行耳石元素檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，各處理組樣本在距耳石核心約330μm處，Sr／Ca值開(kāi)始明顯升高，并在距耳石核心約400～480μm處形成一個(gè)相對(duì)平穩(wěn)的峰，隨后Sr／Ca比值開(kāi)始下降，并逐漸恢復(fù)至對(duì)照組水平，該Sr／Ca值增高區(qū)段即為富鍶水體標(biāo)記處理所形成的耳石元素指紋標(biāo)記區(qū)段。18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛魚(yú)苗在標(biāo)記區(qū)段峰值區(qū)的Sr／Ca均值分別為：（5.57±0.22）mmol·mol－1、（7.21±0.19）mmol·mol－1、（10.40±0.39）mmol·mol－1和（10.59±0.37）mmol·mol－1，其均值分別為標(biāo)記實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的2.76倍、3.57倍、5.15倍和5.24倍。

本研究以Warren-Myers等設(shè)定的耳石元素指紋成功標(biāo)記判別標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各處理組的標(biāo)記成功率進(jìn)行檢測(cè)。依實(shí)驗(yàn)對(duì)照組耳石樣本的Sr／Ca均值及其標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)求得鍶元素指紋成功標(biāo)記檢測(cè)基線值為 3.235 mmol·mol－1；依耳石元素檢測(cè)分析時(shí)激光剝蝕孔徑求得有效標(biāo)記寬度下限為96μm。對(duì)不同標(biāo)記處理組各15尾黑鯛樣本檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，各檢測(cè)樣本的有效標(biāo)記寬度均大于96μm，其均值分別為（180.5±13.3）μm（18 mg·L－1標(biāo)記處理組）、（199.7±28.9）μm（24 mg·L－1標(biāo)記處理組）、（191.7±16）μm（30 mg·L－1標(biāo)記處理組）和（256±62.2）μm（36 mg·L－1標(biāo)記處理組）。基于上述，各標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)黑鯛魚(yú)苗耳石元素指紋的標(biāo)記成功率均為100%。

圖2 標(biāo)記組、對(duì)照組和野生黑鯛幼魚(yú)耳石的Sr／Ca值Fig.2 Typical changes in otolith Sr／Ca ratio along line transects from the core to the edge in the wild，control and marked juvenile Sparus macroce phalus otoliths

2.2 標(biāo)記組和處理組個(gè)體死亡率和生長(zhǎng)狀況

經(jīng)7 d標(biāo)記處理，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛魚(yú)苗的平均死亡率分別為21.9%、23.9%、23.3%、22.3%和 26.5%（表 1）。單因子方差分析（ANOVA）結(jié)果顯示，各處理組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗的死亡率無(wú)顯著性差異（F＝0.745，P＝0.582）；標(biāo)記結(jié)束 17 d后，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛魚(yú)苗的平均死亡率分別為34.5%、30.3%、28.6%、34.8%和35.4%。單因子方差分析結(jié)果顯示，此時(shí)段各處理組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗的死亡率依然無(wú)顯著性差異（F＝1.345，P＝0.320）。上述結(jié)果表明：標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)黑鯛苗種存活率無(wú)顯著負(fù)影響。

標(biāo)記處理后，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛魚(yú)苗的平均體長(zhǎng)分別為16.3 mm、17.1 mm、18.2 mm、16.5 mm和17.9 mm。單因子方差分析結(jié)果顯示，各處理組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗的平均體長(zhǎng)無(wú)顯著性差異（F ＝2.080，P＝0.090）；標(biāo)記結(jié)束17 d后，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛魚(yú)苗的平均體長(zhǎng)分別為28.0 mm、26.7 mm、25.7 mm、27.3 mm和26.3 mm，單因子方差分析結(jié)果顯示，此時(shí)段各處理組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗的平均體長(zhǎng)依然無(wú)顯著性差異（F＝1.698，P＝0.155）。上述結(jié)果表明：標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)黑鯛魚(yú)苗生長(zhǎng)狀況不產(chǎn)生顯著負(fù)影響。

表1 標(biāo)記處理后對(duì)照組與處理組黑鯛的死亡率和體長(zhǎng)均值及標(biāo)準(zhǔn)差Tab.1 Mean value and standard deviation of mortality rate and body length of control and marked juvenile Sparus macrocephalus after marking treatment

2.3 標(biāo)記組和處理組個(gè)體肌體內(nèi)的鍶元素含量

標(biāo)記處理結(jié)束當(dāng)天，對(duì)照組、18mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛肌體內(nèi)的鍶濃度均值分別為52 mg·kg－1、138 mg·kg－1、264 mg·kg－1、277 mg·kg－1和346 mg·kg－1（表 2），t檢驗(yàn)顯示：各標(biāo)記處理組黑鯛肌體內(nèi)鍶濃度均與對(duì)照組存在顯著性差異（P值均小于0.05）；表明標(biāo)記處理過(guò)程可使標(biāo)記處理個(gè)體肌體內(nèi)鍶濃度顯著提升。

隨時(shí)間推移，各標(biāo)記處理組黑鯛肌體內(nèi)鍶濃度逐漸下降。至標(biāo)記處理結(jié)束17 d，18 mg·L－1、24 mg·L－1、30 mg·L－1和 36 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛肌體內(nèi)的鍶濃度均值分別降至45.5 mg·kg－1、76 mg·kg－1、91.6 mg·kg－1和106 mg·kg－1（表 2）。t檢驗(yàn)顯示：該時(shí)段 18 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛肌體內(nèi)鍶濃度已與對(duì)照組個(gè)體不存顯著性差異（P＞0.05）；表明該處理組黑鯛肌體內(nèi)鍶濃度已恢復(fù)至正常水準(zhǔn)。

表2 標(biāo)記處理后不同時(shí)段黑鯛肌體中的鍶濃度均值和標(biāo)準(zhǔn)差Tab.2 Mean value and standard deviation of strontium concentrations of body tissues for the control and marked juvenile Sparus macrocephalus

3 討論

小規(guī)格增殖放流魚(yú)苗的規(guī)模化標(biāo)記問(wèn)題長(zhǎng)期是水生生物增殖放流關(guān)鍵技術(shù)研究領(lǐng)域的一大難點(diǎn)。針對(duì)此類增殖放流魚(yú)苗，理想化的標(biāo)記技術(shù)應(yīng)具備苗種規(guī)格限制小、便于規(guī)?；僮?、較少的標(biāo)記操作損傷和較長(zhǎng)的標(biāo)記攜帶周期等技術(shù)特點(diǎn)［16－17］。目前，基于鍶元素的耳石元素指紋標(biāo)記是研建此類標(biāo)記技術(shù)的重要探索方向，該標(biāo)記技術(shù)所采用的“浸泡”式標(biāo)記方式以及標(biāo)記元素在耳石中的代謝惰性使其本身具備有標(biāo)記苗種規(guī)格限制小、便于規(guī)?；僮骱蜆?biāo)記信息攜帶長(zhǎng)久等技術(shù)優(yōu)勢(shì)［18］。本研究通過(guò)開(kāi)展基于鍶元素的黑鯛耳石元素指紋標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步實(shí)證了不同濃度富鍶水體對(duì)黑鯛增殖放流魚(yú)苗耳石的元素指紋標(biāo)記效果，明確了標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)受試魚(yú)苗死亡率和生長(zhǎng)狀況的影響方式，驗(yàn)證了利用該項(xiàng)技術(shù)開(kāi)展小規(guī)格黑鯛增殖放流魚(yú)苗規(guī)模化標(biāo)記的可行性。

3.1 富鍶水體對(duì)黑鯛幼魚(yú)耳石的標(biāo)記效果

本研究利用富鍶水體對(duì)黑鯛增殖放流魚(yú)苗進(jìn)行耳石元素指標(biāo)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，預(yù)期標(biāo)記效果為在受試黑鯛魚(yú)苗相應(yīng)耳石區(qū)位形成易被鑒別的Sr／Ca值標(biāo)記。以前期同類研究為參考［15］，本文將受試魚(yú)苗成功標(biāo)記的判別標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定為存在超過(guò)3倍激光剝蝕孔徑長(zhǎng)度的耳石區(qū)位，其任意點(diǎn)位Sr／Ca值均超過(guò)標(biāo)記檢測(cè)基線（即對(duì)照組個(gè)體在相應(yīng)耳石區(qū)位Sr／Ca值均值與其3.3倍標(biāo)準(zhǔn)差之和）。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)7 d的標(biāo)記處理，各處理組黑鯛魚(yú)苗耳石均能形成了與對(duì)照組或野生個(gè)體的Sr／Ca值差異；依上述成功標(biāo)記判別標(biāo)準(zhǔn)，本研究所用的標(biāo)記處理方式對(duì)黑鯛魚(yú)苗耳石的標(biāo)記成功率均為100%。

從本研究所采用的標(biāo)記處理過(guò)程看，標(biāo)記水體鍶元素濃度和標(biāo)記處理時(shí)間是影響受試魚(yú)苗耳石標(biāo)記效果的核心要素。理論上講，標(biāo)記水體鍶濃度越高，所形成的標(biāo)記強(qiáng)度（標(biāo)記區(qū)段處理組個(gè)體與對(duì)照組個(gè)體的Sr／Ca值差異大小）越大；標(biāo)記處理時(shí)間越長(zhǎng)，所能標(biāo)記的耳石范圍越廣［18］。本研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論從標(biāo)記強(qiáng)度還是標(biāo)記范圍上看，各處理組均明顯高于成功標(biāo)記所需標(biāo)記強(qiáng)度和標(biāo)記范圍的最低閾值。從降低標(biāo)記處理的經(jīng)濟(jì)、時(shí)間成本的角度考量，標(biāo)記水體的鍶元素濃度和標(biāo)記處理時(shí)間均有進(jìn)一步壓縮的空間；至于具體壓縮的程度，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。

3.2 標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)受試黑鯛死亡率和生長(zhǎng)狀況的影響

標(biāo)記操作對(duì)魚(yú)體的損傷大小是選擇適宜標(biāo)記方法的重要考量因素。掛牌標(biāo)志、金屬線碼標(biāo)記等傳統(tǒng)物理標(biāo)記方法因會(huì)給標(biāo)記對(duì)象帶來(lái)個(gè)體創(chuàng)傷和額外的代謝負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重制約了其適用范圍［19－20］。本研究結(jié)果顯示，各標(biāo)記處理組與對(duì)照組黑鯛魚(yú)苗的死亡率和生長(zhǎng)狀況均無(wú)顯著性差異，這表明利用鍶濃度在18～36 mg·L－1范圍內(nèi)的富鍶水體對(duì)黑鯛魚(yú)苗進(jìn)行標(biāo)記處理不會(huì)對(duì)受試魚(yú)苗的存活和生長(zhǎng)產(chǎn)生顯著負(fù)面影響，標(biāo)記過(guò)程不會(huì)產(chǎn)生操作損傷。

鍶元素廣泛存在于自然界中，鍶離子與鈣離子在魚(yú)體內(nèi)具有相同的運(yùn)輸離子通道、相似的化學(xué)性能，但其在水生生物內(nèi)的生理作用至今尚未明確［21］。文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，不同水生生物物種、不同個(gè)體發(fā)育階段對(duì)富鍶水體的響應(yīng)方式各異。PILLARD等［22］研究發(fā)現(xiàn)：伴隨飼養(yǎng)水體中鍶濃度提升，巴西擬糠蝦（Mysidopsis bahia）和雜色鳉（Cyprinodon variegatus）的存活率并未出現(xiàn)異常，但美洲原銀漢魚(yú)（Menidia beryllina）的死亡率卻大幅提升。PYLE等［23］研究發(fā)現(xiàn)水體中的鍶元素濃度與黑頭呆魚(yú)（Pimephales promelas）魚(yú)類孵化率具有顯著相關(guān)性，但與其幼苗生長(zhǎng)和存活率關(guān)系不緊密。宋洪建等［21］研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼養(yǎng)水體中鍶濃度提升至30～40 mg·L－1時(shí)，大馬哈魚(yú)（Oncorhynchus keta）稚魚(yú)肌肉中Ca2＋－ATP酶和Na＋／K＋－ATP酶的活性受到抑制，生長(zhǎng)和死亡率受到影響?；谏鲜觯ㄗh在尚未系統(tǒng)掌握鍶元素的生理作用及生態(tài)毒理效應(yīng)之前，利用富鍶水體開(kāi)展增殖魚(yú)苗耳石元素指紋標(biāo)記時(shí)應(yīng)盡量控制鍶元素濃度的提升幅度。

3.3 標(biāo)記處理過(guò)程對(duì)受試黑鯛肌體中鍶含量的影響

黑鯛標(biāo)記放流魚(yú)苗進(jìn)入增殖水域后有部分個(gè)體會(huì)被人類回捕用以食用消費(fèi)。鑒于此，不產(chǎn)生額外的食品安全問(wèn)題應(yīng)作為選擇黑鯛增殖放流苗種標(biāo)記方法的一項(xiàng)基本準(zhǔn)則?，F(xiàn)階段，鍶元素對(duì)人體的影響方式仍不甚明確［24－25］，尚無(wú)相關(guān)食品安全標(biāo)準(zhǔn)對(duì)水產(chǎn)品鍶元素含量攜帶閾值進(jìn)行界定，為避免產(chǎn)生因標(biāo)記行為帶來(lái)相關(guān)食品安全問(wèn)題，標(biāo)記放流個(gè)體的鍶含量應(yīng)與對(duì)照個(gè)體盡量保持一致。

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)7 d的富鍶水體處理，受試黑鯛肌體內(nèi)的鍶含量顯著提升，且提升幅度與標(biāo)記水體中的鍶濃度顯著相關(guān)，標(biāo)記水體中鍶濃度越高，受試黑鯛肌體對(duì)鍶元素的富集程度越大。但與此同時(shí)，值得關(guān)注的是，與耳石中鍶元素一旦富集難以被異化吸收的情景不同，伴隨標(biāo)記處理結(jié)束，各標(biāo)記處理組黑鯛肌體中的鍶含量均呈現(xiàn)不斷衰減的趨勢(shì)。至標(biāo)記結(jié)束17 d，18 mg·L－1標(biāo)記處理組黑鯛肌體中的鍶元素已降至實(shí)驗(yàn)對(duì)照組水平；其它處理組黑鯛肌體中的鍶元素亦較標(biāo)記處理結(jié)束時(shí)大幅降低，受實(shí)驗(yàn)周期限制，24～36 mg·L－1處理組恢復(fù)至正常水平的具體時(shí)間無(wú)法通過(guò)本研究獲取，需經(jīng)后續(xù)研究進(jìn)一步驗(yàn)證。鑒于上述，在利用富鍶水體進(jìn)行黑鯛增殖放流魚(yú)苗耳石元素指紋標(biāo)記操作后，建議進(jìn)行一定時(shí)期內(nèi)的暫養(yǎng)，待其肌體中的鍶元素含量恢復(fù)至正常水準(zhǔn)后再進(jìn)行放流，以確保消除標(biāo)記過(guò)程可能產(chǎn)生的食品安全隱患。

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