BIOSYSTEM BA400全自動(dòng)特定蛋白儀檢測(cè)尿微量白蛋白的性能測(cè)定

劉斌，王勇，張炳昌，欒芳

山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院 a.醫(yī)學(xué)工程部；b.臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部，山東 濟(jì)南 250021

引言

尿微量白蛋白是由肝臟產(chǎn)合成的帶負(fù)電荷的中分子蛋白質(zhì)，分子量約為69 kD，正常生理情況下僅有很少量白蛋白通過腎小球?yàn)V過屏障，其中95%會(huì)被近曲小管重吸收入血。健康人每升尿液中白蛋白含量不超過20 mg，24 h尿液中白蛋白含量不超過30 mg，因此得名“尿微量白蛋白”。任何能夠引起腎小球基膜通透性增高的疾病，均可導(dǎo)致白蛋白通過腎小球進(jìn)入尿液中，尿中出現(xiàn)微量白蛋白預(yù)示腎小球的早期病變[1]。因此，尿微量白蛋白是腎臟早期損害的標(biāo)志蛋白，是腎臟病早期篩查和診斷的重要指標(biāo)[2-3]。尿微量白蛋白病理性增高常見于糖尿病腎病、高血壓腎病、妊娠子癇前期等[4-6]；也可見于全身性或局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的腎功能異?；颊?，如尿路感染引起的腎臟早期病變、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的并發(fā)癥[3,7]，以及服用對(duì)腎功能有影響的藥物患者[8-10]。因此，尿微量白蛋白可用于（小兒）腎內(nèi)科、（小兒）內(nèi)分泌科、心內(nèi)科、產(chǎn)科等對(duì)早期腎臟疾病的篩查，篩查對(duì)象包括成人、兒童及孕婦。

分析尿液中的微量白蛋白在臨床已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。隨著全自動(dòng)特定蛋白儀的發(fā)展和應(yīng)用，尿微量白蛋白的快速定量檢測(cè)也進(jìn)入了一個(gè)新階段，能為臨床醫(yī)師輔助診斷提供快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。我院自2017年4月引入一臺(tái)BIOSYSTEM BA400全自動(dòng)特定蛋白儀（以下簡稱“BA400特定蛋白儀”），可定量檢測(cè)尿液中的微量白蛋白和其他生化指標(biāo)。本文對(duì)BA400特定蛋白儀檢測(cè)尿微量白蛋白的準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、可報(bào)告范圍、參考區(qū)間和攜帶污染率做了研究評(píng)價(jià)，取得了良好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

病人標(biāo)本來自本院2017年4月份腎內(nèi)科住院患者，20例健康人標(biāo)本來自本院2017年4月份在健康體檢中心體檢的健康人，排除高血壓、腎病、糖尿病等疾病。標(biāo)本均為清晨中段尿10 mL，離心后取上清于2 h內(nèi)在BA400特定蛋白儀上檢測(cè)。

1.2 儀器及試劑

BA400特定蛋白儀（Spain Biostec），重慶市博士泰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的尿微量白蛋白試劑盒及配套質(zhì)控品、校準(zhǔn)品，免疫比濁法檢測(cè)。

1.3 方法

1.3.1 準(zhǔn)確度驗(yàn)證

依據(jù)WS/T420-2013，檢測(cè)尿微量白蛋白試劑盒配套校準(zhǔn)品（校準(zhǔn)品可溯源至ERM-DA470K/IFCC）10次，計(jì)算10次連續(xù)測(cè)定結(jié)果的均值，與理論值的偏差應(yīng)小于實(shí)際說明書范圍10%。

1.3.2 精密度驗(yàn)證

（1）批內(nèi)精密度：依據(jù)WS/T420-2013和CLSI EP5-A2文件[11-12]，取尿微量白蛋白試劑盒配套高、低值質(zhì)控品各1份，連續(xù)檢測(cè)20次，計(jì)算均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）及變異系數(shù)（Coefficient of Variation，CV)。與說明書參考值≤7%作對(duì)照。

（2）批間精密度：依據(jù)WS/T 420-2013和CLSI EP5-A2文件[11-12]，取尿微量白蛋白試劑盒配套高、低值質(zhì)控品各1份，連續(xù)檢測(cè)20天，計(jì)算M±SD及CV。與說明書參考值≤10%作對(duì)照。

1.3.3 線性范圍驗(yàn)證

依據(jù)WS/T420-2013和CLSI EP6-A文件[11,13]，選取濃度為865.2 mg/L的高值標(biāo)本（H）、濃度為0 mg/L的低值標(biāo)本（L）各一份，按高低比例1:4、2:3、3:2、4:1混勻，測(cè)定每份標(biāo)本分析物濃度2次取平均值作為實(shí)測(cè)值，利用統(tǒng)計(jì)分析軟件以實(shí)測(cè)值為y、理論值為x擬合方程，評(píng)估尿微量白蛋白在5.0～800.0 mg/L范圍內(nèi)的檢測(cè)是否呈線性。結(jié)果判斷：曲線回歸系數(shù)R2＞0.995。

1.3.4 可報(bào)告范圍驗(yàn)證

選取濃度在接近線性的標(biāo)本按照1:5、1:10、1:15、1:20、1:25的比例稀釋，每個(gè)濃度檢測(cè)2次，統(tǒng)計(jì)均值與理論值比較，以80%≤R≤120%定位可接受范圍。

1.3.5 參考區(qū)間驗(yàn)證

從本院健康體檢中心收集健康人尿液標(biāo)本20例，其中男性11例，女性9例，年齡范圍18～57歲，平均年齡（36.55±11.20）歲。檢測(cè)結(jié)果需在廠家說明書規(guī)定的參考值范圍＜20 mg/L的符合率應(yīng)大于95%。

1.3.6 攜帶污染率

取高值標(biāo)本（H）和低值標(biāo)本（L），連續(xù)檢測(cè)3次高值H1、H2、H3，再連續(xù)檢測(cè)3次低值L1、L2、L3，計(jì)算攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Graphpad Prism 5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和作圖。均數(shù)采用M±SD表示，兩變量相關(guān)性作直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)確度

可溯源至ERM-DA470K/IFCC的校準(zhǔn)品連續(xù)測(cè)定10次，測(cè)試值分別為 14.3、13.6、12.3、13.4、11.7、12.0、12.2、13.0、11.2 、12.3 mg/L，計(jì)算均值為12.6 mg/L，理論值為12.0 mg/L，偏差＜10%，符合要求。

2.2 精密度

2.2.1 批內(nèi)精密度

試劑盒配套高、低值質(zhì)控品分別連續(xù)檢測(cè)20次，變異系數(shù)CV分別為4.0%和2.0%，均小于7%，符合要求，具體見圖1和表1。

圖1 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的批內(nèi)精密度結(jié)果展示

表1 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)分析

2.2.2 批間精密度

每日測(cè)試試劑盒配套高、低值質(zhì)控品，連續(xù)檢測(cè)20天，變異系數(shù)CV分別為4.8%和3.5%，均小于10%，符合要求，具體見圖2和表2。

2.3 線性范圍

以尿微量白蛋白理論值（不同稀釋度）為x軸，實(shí)測(cè)均值為y軸，得出回歸方程為y=1.007x+18.19（R2=0.9973），顯示線性良好，估算線性范圍在0～800.0 mg/L范圍內(nèi)，大于試劑盒說明書規(guī)定的5.0～800.0 mg/L，符合要求。線性檢測(cè)情況見圖3和表3。

圖2 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的批間精密度數(shù)據(jù)展示

表2 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的批間精密度結(jié)果分析

圖3 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的線性范圍驗(yàn)證

表3 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的線性范圍驗(yàn)證（mg/L）

2.4 可報(bào)告范圍

通過驗(yàn)證，1:25的比例稀釋標(biāo)本時(shí)超過可接受范圍80%≤R≤120%，故尿微量白蛋白的最大稀釋倍數(shù)為1:20。由于尿微量白蛋白的檢測(cè)線性范圍是5.0～800.0 mg/L，所以尿微量白蛋白的臨床可報(bào)告范圍為5.0～16000 mg/L（表4）。

2.5 參考區(qū)間

20例健康人尿微量白蛋白的檢測(cè)結(jié)果分別為： 5.0、9.1、2.1、2.0、1.0、2.8、10.2、4.0、11.8、1.1、1.0、9.3、12.9、2.1、9.6、1.9、2.7、13.6、5.0、6.8 mg/L，均 ＜20 mg/L，符合率100%。

2.6 攜帶污染

3次高值標(biāo)本連續(xù)檢測(cè)結(jié)果分別為944.8、930.0、951.4 mg/L，3次低值標(biāo)本連續(xù)檢測(cè)結(jié)果分別為1.0、2.0、2.1 mg/L。攜帶污染率為0.12%。

3 討論

傳統(tǒng)的尿微量白蛋白檢測(cè)采用試紙條定性檢測(cè)法，BIOSYSTEM BA400全自動(dòng)特定蛋白儀是西班牙BioSystem公司繼BA15、BA25推出的改良型全自動(dòng)特定蛋白儀，可以對(duì)尿微量白蛋白及尿液其他生化指標(biāo)進(jìn)行定量檢測(cè)。與同類蛋白分析儀比較，其檢測(cè)優(yōu)勢(shì)包括以下幾方面：第一，檢測(cè)速度可達(dá)400測(cè)試/小時(shí)，是目前國內(nèi)出現(xiàn)的檢測(cè)速度最快的特定蛋白分析儀；第二，采用專為免疫比濁檢測(cè)設(shè)計(jì)和改良的光學(xué)系統(tǒng)（專利號(hào)ZL201080017510.X），極大提升檢測(cè)靈敏度；第三，主、副光路同時(shí)檢測(cè)，提高了檢測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，使小分子、低濃度物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確；第四，對(duì)濃度過高和過低的樣本，可自定義濃縮和稀釋倍數(shù)進(jìn)行自動(dòng)稀釋。

本文研究顯示，BA400特定蛋白儀檢測(cè)尿微量白蛋白批內(nèi)、批間檢測(cè)精密度CV均在5%以內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果符合相關(guān)規(guī)定要求。線性范圍分析顯示，BA400特定蛋白儀尿微量白蛋白檢測(cè)線性范圍為0～800.0 mg/L，基本上能滿足日常檢測(cè)需要。經(jīng)驗(yàn)證尿微量白蛋白的最大稀釋倍數(shù)為1:20，臨床可報(bào)告范圍為5.0～16000 mg/L。對(duì)于內(nèi)分泌科等較高濃度尿液標(biāo)本，BA400特定蛋白儀會(huì)自動(dòng)稀釋20倍進(jìn)行檢測(cè)，滿足高濃度標(biāo)本檢測(cè)需要。健康人尿液標(biāo)本檢測(cè)尿微量白蛋白驗(yàn)證顯示均符合＜20 mg/L的正常值范圍。攜帶污染率檢測(cè)結(jié)果顯示，BA400特定蛋白儀完全能滿足臨床要求。

目前，很多醫(yī)院檢驗(yàn)科在生化分析儀上進(jìn)行特定蛋白項(xiàng)目檢測(cè)。由于特定蛋白項(xiàng)目常規(guī)檢測(cè)原理為抗原—抗體反應(yīng)的免疫比濁方法，極易產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)和交叉污染，所以生化儀檢測(cè)特定蛋白效果很不理想，而且其他生化項(xiàng)目的檢測(cè)也會(huì)受到干擾[14-17]；特定蛋白檢測(cè)試劑成分中的抗原、抗體極易附著于比色杯，很難徹底清洗，相比生化儀價(jià)格高昂的比色杯，BA400特定蛋白儀可以定期更換比色盤；此外，配套試劑為國內(nèi)生產(chǎn)。權(quán)衡檢測(cè)成本和準(zhǔn)確性，BA400特定蛋白儀對(duì)特定蛋白的檢測(cè)要優(yōu)于生化分析儀。

表4 BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白的可報(bào)告范圍驗(yàn)證

本研究結(jié)束后，我們后續(xù)將對(duì)反映腎小球病變的尿轉(zhuǎn)鐵蛋白和尿免疫球蛋白G、反映腎小管病變的尿視黃醇結(jié)合蛋白、尿β2微球蛋白、尿胱抑素等其他生化指標(biāo)在BIOSYSTEM BA400全自動(dòng)特定蛋白儀上進(jìn)行檢測(cè)性能評(píng)價(jià)，使其更好地滿足臨床檢測(cè)需求。

4 結(jié)論

BA400特定蛋白儀測(cè)定尿微量白蛋白，具有快速簡便、重復(fù)性好、攜帶污染率低等優(yōu)點(diǎn)，適合臨床大批量尿微量白蛋白標(biāo)本的檢測(cè)。適合（小兒）腎內(nèi)科、（小兒）內(nèi)分泌科、心內(nèi)科、產(chǎn)科等科室對(duì)成人、兒童及孕婦早期腎臟疾病的篩查。

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