血清miR-145、血尿酸水平對狼瘡性腎炎疾病活動度及其腎損害的作用

梁敬德 陳俏儀 范雪蓮 歐財文

1.廣州市海珠區(qū)婦幼保健院檢驗科，廣東廣州 510240；2.廣東省中醫(yī)院檢驗科，廣東廣州 510120

狼瘡性腎炎（LN）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）最常見的并發(fā)癥，發(fā)生率約60% ～ 80%，可導致不同程度腎損害，嚴重時可導致死亡的發(fā)生，其治療關(guān)鍵在于早期診斷和治療以控制腎衰竭發(fā)生、發(fā)展[1]。而近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，學界對LN的認識不斷深入，有研究顯示，血清miR-145、血尿酸與LN的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[2-3]，但關(guān)于血清miR-145、血尿酸水平對LN疾病活動度及其腎損害作用的報道較少。對此，本研究通過檢測LN患者血清miR-145、血尿酸水平，并分析二者與LN疾病活動度及其腎損害的關(guān)系，以為LN的臨床診治提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年6月～2017年6月廣東省中醫(yī)院和我院收治的LN患者150例作為LN組，同期選取30例健康人員作為健康組，納入標準：（1）LN均經(jīng)臨床癥狀、病史、實驗室、影像學等檢查確診[4]；（2）年齡＞18歲、無精神病病史；（3）入院前無降尿酸藥、保腎藥、利尿劑等藥物史；（4）患者或其家屬簽署知情同意書。排除標準：（1）近1周內(nèi)進食高脂高蛋白食物、大量飲酒等；（2）有高血壓、糖尿?。唬?）有心、肝、腦等嚴重性疾?。唬?）拒絕參與本次研究；本次研究已經(jīng)我院倫理委員會審批且通過，LN組：男88例，女62例，年齡23～59歲、平均（42.58±10.24）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）值18.28 ～ 30.29kg/m2、平 均（24.57±4.72）kg/m2，健康組：男17例，女13例，年齡22～58歲、平均（41.87±10.16）歲，BMI值 18.22～ 30.36kg/m2、平均（24.65±4.77）kg/m2，兩組在性別、年齡、BMI值等一般資料上比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-145、血尿酸水平檢測 所有受檢測者于清晨空腹抽取上臂靜脈血6mL置入無菌試管中，室溫放置2h內(nèi)，取3mL常規(guī)分離血清（3000r/min、10min、離心半徑 8.5cm）后，通過貝克曼全自動生化分析儀檢測血尿酸水平；另取3mL通過miRNA提取分離試劑盒采用TRIzol一步法提取總RNA，并反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，將1μL的cDNA置于10μL反應體系、94℃中進行擴增反應2min后純化DNA片段，采用實時熒光定量聚合酶聯(lián)反應檢測外周血中單個核細胞miR-145水平，miR-145基因序列為CTGGGAAAACTGGACCGTGAGG'，以β-actin 為內(nèi)參物，采用相對定量法行相對表達量計算，以2-△△CT法分析基因相對表達量，試劑均購自北京天根生化科技有限公司。

1.2.2 疾病活動度評估[5]采用SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）對LN患者進行疾病活動度評估，0～4分為無活動、5～9分為輕度、10～14分為中度、＞14分為重度。

1.2.3 腎損害評估[6]采用慢性腎臟?。–KD）分期法對LN患者進行腎損害評估，腎小球濾過率（GFR）～59mL/min為早期、30～59為中期、＜30為晚期。

1.2.4 觀察指標 記錄和比較所有患者血清miR-145、血尿酸水平、LN疾病活動度、腎損害情況。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，對計數(shù)資料比較以（%）表示采用χ2檢驗，對計量資料比較以（±s）表示，采用t檢驗，對多組資料采用重復測量方差分析F檢驗，在P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-145、血尿酸水平比較

LN組血清miR-145水平明顯低于健康組，LN組血尿酸水平明顯高于健康組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），見表1。

表1 兩組血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

表1 兩組血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

組別 n 血清miR-145 血尿酸（μmol/L）健康組 30 2.17±0.32 253.47±30.24 LN組 150 1.03±0.23 468.17±68.57 t 23.085 16.796 P＜0.001 ＜0.001

2.2 不同疾病活動度LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較

本研究150例LN患者中，疾病活動度為輕度、中度、重度的患者分別有30例（20.00%）、68例（45.33%）、52例（34.67%）；不同疾病活動度LN患者血清miR-145、血尿酸水平基本相同，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同疾病活動度LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

表2 不同疾病活動度LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

疾病活動度 n 血清miR-145 血尿酸（μmol/L）輕度 30 1.06±0.15 464.19±50.39中度 68 1.03±0.14 468.25±50.58重度 52 1.01±0.15 470.36±50.87 F 1.142 1.049 P 0.358 0.406

2.3 不同腎損害LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較

本研究150例LN患者中，腎損害早期、中期、晚期的患者分別有79例（52.67%）、56例（37.33%）、15例（10.00%）；在血清miR-145水平方面，腎損害晚期LN患者明顯低于中期患者，中期患者明顯低于早期患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在血尿酸水平方面，腎損害晚期LN患者明顯高于中期患者，中期患者明顯高于早期患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同腎損害LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（± s）

表3 不同腎損害LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（± s）

注：與早期同指標比較，*P＜0.05；與中期同指標比較，#P＜0.05

腎損害 n 血清miR-145 血尿酸（μmol/L）早期 79 1.15±0.16 445.66±40.26中期 56 1.01±0.13* 477.15±50.15*晚期 15 0.53±0.07*# 553.20±60.23*#F 43.592 36.487 P＜0.001 ＜0.001

3 討論

SLE是一種多系統(tǒng)、多器官受累的，免疫功能紊亂所致的慢性自身免疫性疾病，常累及腎臟而導致LN，LN實質(zhì)是一種免疫復合物性腎小球炎，嚴重增加了患者死亡的風險[7-8]。近年來，隨著LN早期診斷、免疫抑制療法及并發(fā)癥診療水平的提高，患者的疾病預后得到了良好的改善，但仍有部分患者進展為終末期腎臟病，因此如何有效評估患者的疾病轉(zhuǎn)歸具有重要的臨床價值[9-10]。

有研究顯示，尿酸是嘌呤代謝的終產(chǎn)物，也是LN腎功能損害進展的危險因素，其水平過高會促進腎功能損害的進展及增加腎臟疾病患者的死亡風險[11-12]。而有研究表明，LN不僅與腎小球和腎間質(zhì)損傷相關(guān)，還與腎血管損害有關(guān)，腎血管的損害會進一步促進、加重慢性腎臟病進展而形成惡性循環(huán)，加速腎衰竭的進程[13-14]。而miR-145是最重要的血管調(diào)節(jié)因子，在血管平滑肌細胞促進血管增殖表型和收縮表型間轉(zhuǎn)換過程中起重要的作用[15-16]。

而本研究通過檢測LN患者血清miR-145、血尿酸水平，并與健康人員作比較，發(fā)現(xiàn)LN組血清miR-145水平明顯低于健康組，LN組血尿酸水平明顯高于健康組，表明血清miR-145、血尿酸水平與LN的發(fā)生有關(guān)。這可能是由于機體的70%的尿酸通過腎臟排泄，會轉(zhuǎn)化為單鹽-水化合物或尿酸鹽結(jié)晶沉積在腎間質(zhì)及腎小管中，并激活腎素-血管緊張素系統(tǒng)而促進炎性反應[17-18]，因此其水平過高會造成腎臟炎癥反應和纖維化的形成，損傷腎小球基底膜通透性、血管平滑肌細胞和血管內(nèi)皮細胞等，從而導致腎損害的發(fā)生。而miR-145在可表達于腎臟中的血管平滑肌細胞、系膜細胞、未分化近髓細胞等，具有血管損傷與修復的動態(tài)平衡的調(diào)節(jié)作用[19-20]，因此其水平過低會促使血管平滑肌細胞表型調(diào)節(jié)，促使細胞外基質(zhì)的加速遷移、增殖及堆積，使血管內(nèi)膜脫落、中膜增厚，導致腎血管完整性缺失加重，從而加劇了腎損害。而本研究中，在血清miR-145水平方面，腎損害晚期LN患者明顯低于中期患者，中期患者明顯低于早期患者，在血尿酸水平方面，腎損害晚期LN患者明顯高于中期患者，中期患者明顯高于早期患者，提示血清miR-145、血尿酸水平與LN的腎損害有關(guān)。這可能是由于腎損害程度越嚴重的患者，上述的病理損害變化越嚴重，故表現(xiàn)為血清miR-145水平較低、血尿酸水平較高，隨腎損害程度的加重，血清miR-145水平有降低的趨勢、血尿酸水平有升高的趨勢。但本研究中，輕度、中度、重度疾病活動度LN患者血清miR-145、血尿酸水平基本相同，提示血清miR-145、血尿酸水平與LN疾病活動度無關(guān)，這可能是因為本研究采用的評估疾病活動度的標準包含很多影響因素，其中腎臟因素所占比例較小所致。

綜上所述，血清miR-145、血尿酸水平與LN疾病活動度無關(guān)，但與LN發(fā)生及其腎損害有關(guān)，血尿酸可能參與患者腎組織的損害，血清miR-145則可能參與患者腎組織的修復，提示監(jiān)測二者水平可能有助于了解腎臟損害程度以及進一步了解LN的發(fā)病機制，并為LN的診治提供新的思路和依據(jù)。

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