霍山石斛多糖研究進(jìn)展

崔勝文，羅雙群，周婧琪，高愿軍

（1.漯河中德雙成功能食品研究院有限公司，河南漯河462300；2.漯河食品職業(yè)學(xué)院食品檢測(cè)系，河南漯河462300）

霍山石斛（Dendrobium huoshanense）屬于蘭科，多年生草本植物，主要分布于中國(guó)安徽省霍山縣，河南省也有分布[1]?；羯绞且环N珍稀中藥材，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其具有滋陰消渴、生津潤(rùn)肺、清音明目等功效[2]。多糖是霍山石斛中最主要的活性成分之一，研究發(fā)現(xiàn)霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide，DHP）具有抗氧化、抗白內(nèi)障、抗肝損傷和肝纖維化、抗疲勞、調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、抗糖基化等生理功能[3]，且藥物毒性極小，從而成為藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。本文擬從DHP的提取、結(jié)構(gòu)特性以及生理功能等進(jìn)行綜述，為霍山石斛多糖的開發(fā)和利用提供參考。

1 霍山石斛多糖的提取方式

DHP的含量受生長(zhǎng)部位以及生長(zhǎng)年限的影響，在葉中含量最高，莖中含量最低，且兩年生莖中多糖含量最高，但3年生莖中含量減少。當(dāng)前DHP提取工藝有多種，其中最常用的為熱水提醇沉法[4]，該法提取所需溫度高，時(shí)間長(zhǎng)，一般需重復(fù)提取兩次，經(jīng)濟(jì)效率和提取率均較低。黃森等[5]用該法在提取溫度為69.4℃，pH 值為 5.9，料液比為 1∶20（g/mL），提取次數(shù)為 2次，提取時(shí)間為1.57 h時(shí)所得DHP提取率最高僅為0.1821 g/g。谷仿麗[6]和董澤梁[7]用該法分別從霍山石斛組培苗和新鮮的霍山鐵皮石斛根莖中提取DHP，其得率分別為17.763%和17.45%[8]。若在提取過(guò)程中添加超聲波輔助不僅可提升浸提速率，還可顯著提升多糖提取率，劉艷艷等通過(guò)比較超聲波輔助提取工藝和熱水浸提工藝對(duì)DHP提取率的影響，發(fā)現(xiàn)超聲波輔助提取所得DHP得率是傳統(tǒng)熱水浸提工藝的1.70倍。QIN Xia[9]等也通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，在超聲功率250 W，固液比1∶10（g/mL）條件下提取僅 30min，DHP 的提取率可高達(dá)到28.02%。此外，微波輔助法也能有效提高DHP的提取率[10]。近年來(lái)出現(xiàn)了酶法提取，該方法條件溫和，提取效率和收率均提升，且多糖活性獲得較大限度保留。魏明等[11]采用超聲波協(xié)同纖維素酶法提取DHP，當(dāng)料液比1∶40（g/mL）、纖維素酶 500 U/g、酶解溫度 40 ℃、酶解時(shí)間3 h、超聲波功率為300 W、超聲時(shí)間6 min時(shí)，多糖提取量可達(dá)0.283 g/g。

2 霍山石斛多糖的結(jié)構(gòu)特性

DHP主要是非淀粉類中的中性多糖，多數(shù)不含有還原糖[12]。查學(xué)強(qiáng)等[13]最早開展霍山石斛活性多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定的研究，已從霍山石斛水溶性多糖中分離出一種具有免疫活性的均一性多糖HPS-1B23。該多糖為α-吡喃構(gòu)型，平均分子量為2.2×104Da，由葡萄糖、甘露糖和半乳糖按31∶10∶8的分子摩爾比組成，含有以下6個(gè)重復(fù)單元，見圖1[14]。

圖1 α-吡喃多糖結(jié)構(gòu)式Fig.1 The structure of α-pyran polysaccharides

田長(zhǎng)城等[15]發(fā)現(xiàn)的DHP1A（分子量為6.7×103Da）也主要由葡萄糖、甘露糖和少量半乳糖組成，其摩爾組成比為 2.5∶16∶0.1，其主鏈由（1→4）-α-D-Glc p、（1→6）-α-D-Glc p 和（1→4）-β-D-Man p，與終端一個(gè)分支的β-D-Gal p組成。黃月純等[16]對(duì)10批霍山石斛多糖柱前衍生高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）特征圖譜與國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2004A版）生成圖譜對(duì)比發(fā)現(xiàn)，10批霍山石斛多糖柱前衍生特征圖譜標(biāo)示出6個(gè)特征峰，主要由D-甘露糖（71.8%）與D-葡萄糖（27.2%）組成，D-甘露糖與D-葡萄糖峰面積比值為2.05～3.71，此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。與對(duì)照?qǐng)D譜比較，10批霍山石斛的相似度為0.994～1.000，說(shuō)明霍山石斛多糖提取具有良好的重復(fù)性。但是霍山石斛多糖的分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)、微觀結(jié)構(gòu)等又受提取方法、提取溫度等的影響。

2.1 提取方法對(duì)DHP結(jié)構(gòu)特性的影響

提取方法對(duì)DHP的微觀結(jié)構(gòu)、分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)等影響很大。劉艷艷[17]對(duì)超聲波輔助提取法和熱水浸法所得霍山石斛多糖粗提液從分離純化所得多糖組分DHP-1A（熱水浸提所得）和UDHP-1A（超聲波輔助提取所得）進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，兩種多糖組分粘度都較小，但DHP-1A特性粘度大于UDHP-1A；從結(jié)構(gòu)上看，兩種多糖組分均不含三股螺旋結(jié)構(gòu)，也不含蛋白質(zhì)和核酸等雜質(zhì)；但DHP-1A固態(tài)聚集體顆粒較大，表面較為平整，而UDHP-1A顆粒較小，表面較為粗糙，呈現(xiàn)出松散的碎片狀堆積；從紅外光譜圖可知DHP-1A中存在β-型糖苷鍵，超聲輔助提取的多糖UDHP-1A這一結(jié)構(gòu)受到影響。高效液相色譜法檢測(cè)結(jié)果顯示多糖DHP-1A和UDHP-1A均為分子量均一體系，分子量分別為 1.17×104Da和 6.08×103Da。

馮寶軍[18]將熱水浸提法所得霍山石斛粗多糖進(jìn)行脫蛋白及分離純化所得的分子量為7.3×104Da的DHP-W2經(jīng)全水解分析表明，DHP-W2主要由葡萄糖（Glc）、木糖（Xyl）和半乳糖（Gal）按 1.1∶1.0∶0.5 的分子摩爾比以及少量的半乳糖醛酸組成。甲基化分析和核磁共振波譜分析表明，DHP-W2的主鏈由1，6-連接和1，4-連接的β-D-glucose組成，分枝點(diǎn)位于O-4/6：DHP-W2 的枝鏈由 1，4-連接的 α-D-xylose、1，2，4-連結(jié)的 α-D-xylose以及末端殘基 α-D-xylose、α-D-galactose和α-D-galacturonicacid組成。董澤梁[7]將熱水浸提法所得霍山鐵皮石斛粗多糖（HDCP）經(jīng)DEAE-52色譜分離可以得到HDCP-W、HDCP-1和HDCP-3這3個(gè)組分，將粗多糖及各組分分別進(jìn)行氣相色譜（GC）分析。GC結(jié)果顯示，HDCP含有11.4%的阿拉伯糖、8%的鼠李糖、13.4%的木糖、10.7%的半乳糖、44.5%的葡萄糖和12%的甘露糖：HDCP-W含有38.9%的阿拉伯糖、21.3%的半乳糖、24.2%的葡萄糖和15.6%的甘露糖：HDCP-1含有81.1%的木糖、3.4%的半乳糖和15.5%的葡萄糖；HDCP-3含有23.2%的阿拉伯糖、30%的鼠李糖、15.4%的葡萄糖和31.4%的甘露糖。研究還證明，HDCP-W不含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，其分子量為3.538×105g/mol，分子旋光半徑為51.9 nm，分散系數(shù)為1.139，分子構(gòu)象傾向于無(wú)規(guī)則線團(tuán)。經(jīng)掃描電鏡掃描觀察，發(fā)現(xiàn)其微觀形態(tài)主要為細(xì)線條狀、大小不一的碎片狀和無(wú)規(guī)則網(wǎng)團(tuán)狀。肖婧婧[19-20]用水提醇沉法提取總多糖，經(jīng)分離純化獲得兩種相對(duì)均一組分DHP-D1、DHP-D2。采用高效液相測(cè)得DHP-D1、DHP-D2 的相對(duì)分子量分別為 3.2×103Da、8.09×106Da。DHP-D1主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖組成，摩爾比為 1.023∶0.023∶0.021，同時(shí)還存在極少量的甘露糖和木糖：DHP-D1 主鏈主要由 1，4-α-D-Glcp、1，5-α-L-Araf、1，6-α-D-Glcp 和 1，6-α-D-Glap 構(gòu)成，其中部分1，4-α-D-Glcp的C-6位上連接有1-α-Glcp及微量的1-β-D-Xylp，此外還存在微量的1，3-α-DManp，其的C-6位上連接有1-α-Glcp。DHP-D2主要由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖組成，其摩爾比為 0.896∶0.723∶0.2∶0.072∶0.031∶0.028，其主鏈主要由 1，6-β-D-Galp、1，4-β-D-Glcp、1，6-β-DGlcp、1，5-α-L-Araf和 1，6-α-D-Glcp 組成，其中1，6-β-D-Galp的 C-3位連接有少量的 1-α-D-Manp、1-α-D-Xlyp、3-α-L-Rhap。

2.2 提取溫度對(duì)DHP結(jié)構(gòu)特性的影響

霍山石斛多糖的結(jié)構(gòu)特性還受提取溫度的影響，江賢敏、王正明等[21-22]研究發(fā)現(xiàn)，DHP的特性黏度隨提取溫度的升高而呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；用HPLC分析表明不同溫度（40、60、80、100℃）條件下水提醇沉法提取的DHP均由高分子質(zhì)量（higher molecular weight，HMW）和低分子質(zhì)量（lower molecular weight，LMW）兩種組分所構(gòu)成，LMW熱穩(wěn)定性好、主要存在于陰離子交換色譜的水洗脫組分（water-eluted fraction，DHPW），HMW熱穩(wěn)定性弱、主要存在于陰離子交換色譜的鹽洗脫組分（salt-eluted fraction，DHPS）；GC和FTIR分析顯示，DHPW主要由呈α-構(gòu)型的葡萄糖所組成、不含糖醛酸，DHPS主要由呈β-構(gòu)型的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖所組成，且含糖醛酸。由此可見，提取溫度不僅影響DHP的提取量，而且可明顯改變DHP的特性黏度、分子質(zhì)量分布、單糖組成。

3 霍山石斛的生理功能

大量研究表明，DHP具有廣泛的生理活性，包括：抗氧化、抗白內(nèi)障、抗肝損傷和肝纖維化、抗疲勞、調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、抗糖基化等生理功能。

3.1 抗氧化

DHP具有體外抗自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用，汪曙等[23]研究發(fā)現(xiàn)DHP對(duì)·OH的半數(shù)清除濃度為6.79 mg/mL，對(duì)O2-的半數(shù)抑制濃度分別為3.04 mg/mL，且對(duì)VC-Fe2+誘導(dǎo)的肝勻漿的脂質(zhì)過(guò)氧化均有一定的抑制作用，并可減輕VC-Fe2+系統(tǒng)誘導(dǎo)所致小鼠肝線粒體氧化損傷程度。DHP的體外抗氧化能力與其相對(duì)分子量大小有一定關(guān)系。郝杰等[24]分別用40%、50%、60%和80%終濃度的乙醇連續(xù)沉淀霍山石斛苗總多糖（ST：2.52×105Da）所得 4 種多糖組分（S1：4.79×105Da、S2：3.16×105Da、S3：3.07×105Da 和 S4：8.59×104Da）為材料，研究DHP體外抗氧化能力。研究發(fā)現(xiàn)，不同相對(duì)分子質(zhì)量DHP均有抗氧化作用，其中相對(duì)分子量最大的S1對(duì)H2O2、·OH的清除作用強(qiáng)于其他多糖組分，IC50分別為0.15 mg/mL和1.81 mg/mL，并具有顯著的還原力和抑制Fe2+-VC誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化能力，最大效應(yīng)分別為0.312和45.67%；S3對(duì)超氧自由基的清除作用較好，最大清除率達(dá)到72%；ST抑制H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞溶血能力最強(qiáng)，達(dá)到67.23%，而在其他抗氧化試驗(yàn)中效果較差；S2在上述體外抗氧化評(píng)價(jià)體系中的效果較差。田長(zhǎng)城等[15]也通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)低分子霍山石斛多糖DHP1A（分子量6.7×103Da）對(duì)FeCl2誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化有顯著抑制作用。劑量對(duì)抗氧化能力也有一定影響，谷仿麗等[25]研究發(fā)現(xiàn)DHP具有降低肥胖小鼠氧化應(yīng)激的作用，DHP高劑量組[0.2 g/（kg·d）]能顯著降低模型小鼠體重、Lee′s、體脂比、血清游離脂肪酸（free fatty acids，F(xiàn)FA）、血清胰島素（insulin，INS）和丙二醛（malona-ldehyde，MDA），顯著提高肝谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）、肝超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、肝總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）水平（P＜0.05v模型組），空腹血糖（FBG）有降低趨勢(shì)，但不顯著。此外，DHP提取方式對(duì)其抗氧化能力也有一定影響，用超聲波輔助提取工藝所得DHP還原力和ABTS自由基清除率均優(yōu)于熱水浸提的多糖[8]。

3.2 抗白內(nèi)障

DHP是一種良好的糖尿病性白內(nèi)障防治藥物，它能從氧化途徑和蛋白糖基化途徑兩方面同時(shí)抑制晶狀體渾濁進(jìn)程。DHP可保證注射鏈脲佐菌素（strepto-zotocin，STZ）大鼠正常的生活規(guī)律和體重增長(zhǎng)，降低血糖水平，并且減緩晶狀體渾濁發(fā)生，治療效果隨用藥劑量增加。DHP可顯著降低糖尿病性大鼠NO水平及其合成酶iNOS活性，多色熒光實(shí)時(shí)定量PCR證實(shí)DHP可以下調(diào)iNOS基因表達(dá)，抑制效果與多糖劑量正相關(guān)[26-27]。DHP對(duì)STZ大鼠谷胱甘肽家族酶活性有顯著保護(hù)作用，它能夠顯著增加糖尿病性白內(nèi)障大鼠晶狀體組織中谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平、降低MDA及羰基的含有量，提高其GSH-PX、谷胱甘肽還原酶（gutathione reductase，GR）、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、SOD酶活力[28]。此外，DHP還可抑制蛋白糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products，AGEs）的形成，200 mg/（kg·d）劑量組多糖時(shí)抑制率達(dá)到了40.2%。

3.3 抗肝損傷和肝纖維化

黃靜[29]等發(fā)現(xiàn)霍山石斛粗多糖能夠有效增強(qiáng)小鼠對(duì)四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）肝損傷的抵抗能力，DHP 各劑量組（200、100、50 mg/kg） 均能降低CCl4致小鼠急性肝損傷血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（anine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）的升高，降低肝勻漿中MDA含量，增強(qiáng)SOD的活性，抑制肝細(xì)胞中腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）表達(dá)，減輕 CCl4對(duì)肝組織的病理?yè)p傷。田長(zhǎng)城等[30]將用熱水浸提法所得霍山石斛粗多糖通過(guò)DEAE-纖維素陰離子交換法分離純化所得的 4種多糖組分（DHP1、DHP2、DHP3和 DHP4）用于研究它們對(duì)CCl4肝毒性的保護(hù)作用。發(fā)現(xiàn)口服DHP1顯著降低了CCl4誘導(dǎo)的小鼠血清ALT和AST活性的升高，削弱了肝組織中MDA的表達(dá)，同時(shí)恢復(fù)了肝組織中SOD和CAT的活性。得出DHP1可能是霍山石斛中一種潛在的保肝多糖成分。該學(xué)者[31]采用Sephadex G-100凝膠層析對(duì)DHP1進(jìn)一步分離和純化，得到 DHP1A（分子量：6.7×103Da）和 DHP1B（分子量：3.51×103Da）兩種多糖片段。進(jìn)一步評(píng)價(jià)了DHP1A的保肝功效，結(jié)果表明，DHP1A的攝入可以有效降低CC14肝損傷中各種生化指標(biāo)的升高，降低了丙二醛和8-羥基脫氧鳥苷（8-hydroxyl deoxyguanosine，8-OHdG）的產(chǎn)生；DHP1A可以調(diào)節(jié)小鼠肝內(nèi)各種炎性分子的表達(dá)，如 TNF-α、白介素（IL-1β）、單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP）-1、巨噬細(xì)胞炎性蛋白（macrophage inflammatory protein，MIP）-2和CD68。此外，DHP1A還干擾了CCl4誘導(dǎo)的核因子（NF）-κB的激活，緩解了小鼠的肝損傷。

孟海濤等[32]比較了霍山石斛冷凍干燥物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、水提粗多糖等5種提取物抗小鼠亞急性酒精性肝損傷效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，霍山石斛水提醇溶物抗亞急性酒精性肝損傷的活性最差，醇沉物、水提物、冷凍干燥物具有一定的肝損傷保護(hù)活性，水提粗多糖各個(gè)劑量組均可顯著改善肝臟組織損傷和脂肪變性（P＜0.05），降低血清 ALT、AST、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性和低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）水平，提高血清高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）含量，增強(qiáng)肝組織乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）、乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）、SOD 和 GSH-PX活性，減少肝組織中還原性谷胱甘肽（glutathione，GSH）損耗并抑制肝組織MDA含量增加，這說(shuō)明多糖是霍山石斛抗小鼠亞急性酒精性肝損傷的功能因子。聶春艷等[33]也證明DHP對(duì)亞急性酒精性肝損傷小鼠有顯著的保護(hù)作用，能減輕酒精對(duì)肝臟的病理?yè)p傷。此外，DHP還可以通過(guò)輔助飲食調(diào)節(jié)改善SD大鼠非酒精性脂肪性肝（nonalcoholic fatty liver，NAFL）損傷，這種改善保護(hù)作用可能是通過(guò)恢復(fù)機(jī)體脂質(zhì)代謝平衡而實(shí)現(xiàn)的[34]。

潘利華等[35]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，DHP對(duì)亞硒酸鈉致大鼠肝損傷和肝纖維化也有干預(yù)效果，DHP可以明顯改善亞硒酸鈉導(dǎo)致的大鼠體重減輕、肝臟縮小和脾臟增大的癥狀，有效干預(yù)肝損傷和肝纖維化的發(fā)展，對(duì)亞硒酸鈉導(dǎo)致的大鼠血清ALT、AST和LDH活性升高具有顯著的抑制作用：DHP還可以恢復(fù)亞硒酸鈉處理的大鼠肝臟內(nèi) H2O2、GSH、MDA、SOD、CAT 和 GST 至對(duì)照的水平，維持肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜的正常流動(dòng)性。該學(xué)者[36]還通過(guò)免疫熒光組織化學(xué)分析證明，DHP對(duì)肝損傷和肝纖維化的干預(yù)和它有效減少轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β1和肝臟內(nèi)膠原蛋白表達(dá)相關(guān)。該學(xué)者[37]還研究發(fā)現(xiàn)霍山石斛均一多糖半乳葡甘露聚糖（GGM）可通過(guò)進(jìn)一步降低轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-02051（TGF-02051）和I型膠原的表達(dá)來(lái)預(yù)防亞硒酸鈉誘導(dǎo)的肝損傷和肝纖維化，這意味著GGM可能發(fā)展成為一種新型的對(duì)肝損傷和肝纖維化有防治作用的抗纖維化劑。

3.4 抗疲勞

DHP可有效提高小鼠運(yùn)動(dòng)能力，余剛，夏云建等[38-39]從負(fù)重游泳力竭時(shí)間、血乳酸、血清尿素氮、丙二醛、肝糖元等方面探討了低劑量[150 mg/（kg·d）]、高劑量[450 mg/（kg·d）]DHP抗疲勞作用機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)，兩種劑量的DHP都能顯著延長(zhǎng)小鼠游泳時(shí)間，降低運(yùn)動(dòng)后小鼠的乳酸累積，降低血清尿素氮、丙二醛含量，增加運(yùn)動(dòng)后小鼠的肝糖原儲(chǔ)備值，但高劑量DHP效果優(yōu)于低劑量DHP。

3.5 免疫調(diào)節(jié)

Hsieh[40]等分別證實(shí)了霍山石斛水溶性總多糖具有促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞釋放TNF-a、IL-6、IL-1等細(xì)胞因子和GM-CSF、G-CSF等造血生長(zhǎng)因子的功能，并通過(guò)分離純化、結(jié)構(gòu)表征和構(gòu)效關(guān)系的研究表明霍山石斛多糖發(fā)揮免疫增強(qiáng)活性需要適度的乙?；?。Lin等[41]研究了DHPS對(duì)小鼠體內(nèi)和體外誘導(dǎo)的細(xì)胞因子/趨化因子的影響。研究發(fā)現(xiàn)，DHPS在體內(nèi)和體外均可誘導(dǎo)小鼠TH1、TH2、炎性細(xì)胞因子和趨化因子。DHPS能擴(kuò)增小鼠脾細(xì)胞，包括CD4（+）T細(xì)胞、CD8（+）T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，特別是DHPS誘導(dǎo)小鼠和人的免疫細(xì)胞（尤其是單核細(xì)胞）產(chǎn)生了一種抗炎分子IL-1ra。注射DHPS將使血清IL-1ra水平達(dá)到IL-1的10倍以上，提示DHPS誘導(dǎo)的抗炎活性因子可能會(huì)過(guò)度依賴IL-1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)，DHPS誘導(dǎo)IL-1ra產(chǎn)生的信號(hào)通路包括：ERK/ELK、p38 MAPK、PI3K和 NF-κB。這些結(jié)果表明，DHPS可能有改善IL-1誘導(dǎo)的致病條件的作用。查學(xué)強(qiáng)等[42]研究了口服 DHP（50 mg/kg～200 mg/kg）對(duì)沒(méi)有或有氨甲喋呤小鼠腸道、脾臟和肝臟的免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)。腸道免疫反應(yīng)顯示，從口服DHP小鼠中分離出的小腸淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液，可使骨髓細(xì)胞增殖，這表明所有的DHP治療組都有顯著增強(qiáng)腸道免疫反應(yīng)的能力：脾臟免疫反應(yīng)顯示，所有的DHP治療組都能顯著促進(jìn)脾細(xì)胞增殖和分泌干擾素（IFN-γ）；肝臟免疫應(yīng)答顯示，不僅所有的DHP治療組能顯著刺激肝細(xì)胞增殖和IFN-γ的分泌，而且100 mg/kg和200 mg/kg劑量組還能顯著提高IL-4的分泌。此外，DHP還可以恢復(fù)氨甲喋呤損傷小鼠小腸免疫功能（100 mg/kg和200 mg/kg），促進(jìn)氨甲喋呤治療小鼠脾和肝的細(xì)胞增殖以及IFN-γ的產(chǎn)生（200 mg/kg）。這些結(jié)果表明，口服DHP對(duì)小腸免疫系統(tǒng)和全身免疫系統(tǒng)都具有免疫調(diào)節(jié)能力。

DHP對(duì)腸對(duì)黏膜免疫調(diào)節(jié)活性受濃度和溫度的影響，郝冉等[43]通過(guò)口服和離體小腸培養(yǎng)以及Peyer’s結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)，用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)DHP在小腸內(nèi)的吸收分布以及與Peyer's結(jié)細(xì)胞的結(jié)合情況，研究發(fā)現(xiàn)，DHP具有腸黏膜免疫調(diào)節(jié)活性，在體內(nèi)和體外均可通過(guò)Peyer's結(jié)細(xì)胞被小腸吸收，且DHP濃度越高，免疫調(diào)節(jié)活性越強(qiáng)，在質(zhì)量濃度為 25、50、100、200 μg/mL時(shí)，其腸黏膜免疫調(diào)節(jié)活性分別提高到對(duì)照組的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%。江賢敏等[21]發(fā)現(xiàn)不同溫度（40、60、80、100℃）條件下水提醇沉法提取的DHP及其陰離子交換色譜水洗脫組分（water-eluted fraction，DHPW）和鹽洗脫組分（salt-eluted fraction，DHPS）均表現(xiàn)出腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性，且DHPS比DHPW具有更強(qiáng)的腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)活性，但它們的活性均隨提取溫度的升高而下降。

3.6 抗腫瘤

黃森等[44]優(yōu)化了霍山石斛多糖的提取工藝，純化分離了多種多糖組分，重點(diǎn)研究了霍山石斛多糖對(duì)人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901的抑制作用，探討了多糖抗腫瘤作用與腫瘤相關(guān)基因之間的相關(guān)性。通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合Box-Behnken設(shè)計(jì)和響應(yīng)曲面分析，建立了提取溫度、提取pH和提取時(shí)間與霍山石斛多糖提取率間的數(shù)學(xué)模型。水提獲得的霍山石斛粗多糖HDP通過(guò)DEAE-纖維素離子交換色譜分離得到多糖HDP-1，HDP-2，HDP-3，HDP-4，HDP-5，HDP-6。其中抗胃癌活性最強(qiáng)的多糖HDP-2經(jīng)Se：phacryl-200HR色譜后，又獲得HDP-2-A和HDP-2-B兩種多糖組分，經(jīng)UV掃描不含蛋白。多糖組份HDP-2對(duì)胃腺癌細(xì)胞SGC-7901的作用在熒光定量RT-PCR下檢測(cè)得到，多糖組份HDP-2明顯下調(diào)胃腺癌細(xì)胞SGC-7901中原癌基因c-myc的表達(dá)，僅為對(duì)照組表達(dá)率的42.34%。同時(shí)大幅提高腫瘤抑制基因野生型p53的表達(dá)，為對(duì)照組表達(dá)率的2.042倍。鮑麗娟[45]研究發(fā)現(xiàn)，霍山石斛多糖具有良好的抑制HelaS3人宮頸癌細(xì)胞和HepG2人肝癌細(xì)胞毒性作用，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。DHP具有顯著的抗心肌缺血-再灌注損傷的作用，其作用機(jī)制可能是激活GSK-3β信號(hào)通路發(fā)揮抗氧化、抗炎和抗凋亡作用。房雪等[46]采用Langendorff離體灌流系統(tǒng)建造大鼠離體缺血-再灌注損傷模型，研究DHP 低、中、高濃度（0.1、0.5、1.0 mg/L）對(duì)抗心肌缺血-再灌注損傷的影響，發(fā)現(xiàn)與模型組相比，DHP中、高劑量組的心肌壞死程度、梗死面積和細(xì)胞凋亡率顯著降低，心功能顯著改善：冠脈流出液中乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）水平逐漸降低：心肌組織中MDA以及TNF-α和白介素6（IL-6）含量顯著降低，SOD活性和還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）比值顯著升高（P＜0.01）。高劑量DHP可顯著降低心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，升高心肌組織中GSK-3β磷酸化水平。

3.7 抗糖基化

肖婧婧[19]以體外蛋白質(zhì)非酶糖基化反應(yīng)體系為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究DHP及其硫酸化衍生物的抗蛋白質(zhì)非酶糖基化活性。結(jié)果表明，在培養(yǎng)的前21天，DHP及其硫酸化衍生物對(duì)蛋白質(zhì)非酶糖基化初期產(chǎn)物Amadori的抑制率呈上升趨勢(shì)，隨后下降至不同水平。DHP及其硫酸化衍生物對(duì)蛋白質(zhì)非酶糖基化中期產(chǎn)物二羰基化合物和末期產(chǎn)物AGEs形成的抑制作用均存在劑量依賴關(guān)系，在培養(yǎng)的第28天抑制率最大。研究還表明，硫酸化修飾可提高DHP對(duì)蛋白質(zhì)非酶糖基化的抑制作用，其抑制活性的高低與取代度的大小呈一定的正相關(guān)關(guān)系，并且6-O-硫酸化霍山石斛多糖衍生物對(duì)蛋白質(zhì)非酶糖基化的抑制活性強(qiáng)于2，2’，4-O-硫酸化霍山石斛多糖衍生物。

3.8 其他

孟鴿等[47]研究發(fā)現(xiàn)DHP對(duì)嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)有一定的影響作用，當(dāng)添加DHP濃度為6 g/L時(shí)，嗜酸乳桿菌生物量及生長(zhǎng)速度較對(duì)照組明顯提高。此濃度下，還原糖的利用和蛋白質(zhì)及乳酸的合成量也均高于對(duì)照組：同時(shí)發(fā)現(xiàn)添加多糖提高了嗜酸乳桿菌LDH、SOD、GSH-Px 3種酶活力。王長(zhǎng)順[48]以霍山石斛原球莖中提取的DHP與牛血清白蛋白偶聯(lián)后作為抗原，免疫小鼠獲得單克隆抗體，以獲得的單克隆抗體為一級(jí)抗體對(duì)小鼠進(jìn)行免疫組織化學(xué)試驗(yàn)。證實(shí)了CDAP活化法可有效偶聯(lián)多糖與蛋白質(zhì)，且以制備的偶聯(lián)物能引起小鼠免疫反應(yīng)從而制備出所需的單克隆抗體，利用獲得的活性較高、特異性較好的單克隆抗體得到多糖在小鼠組織的分布圖，該方法可為霍山石斛多糖進(jìn)入機(jī)體后分布情況提供科學(xué)依據(jù)。

4 發(fā)展方向

當(dāng)前，針對(duì)DHP的研究以成為熱點(diǎn)研究，DHP的提取工藝被不斷改進(jìn)，提取效率和提取率也有了極大提高，DHP的分子量與化學(xué)成分間的關(guān)系也被進(jìn)一步明確。目前，眾學(xué)者對(duì)DHP的生理功能研究仍停留在動(dòng)物試驗(yàn)階段，且其具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。此外，DHP進(jìn)入機(jī)體后的分布情況目前也尚不明確，對(duì)DHP生理功能的人體試驗(yàn)更是尚未涉及。

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“互聯(lián)網(wǎng)+”時(shí)代迅速發(fā)展，互聯(lián)網(wǎng)融資平臺(tái)猶如雨后春筍般爭(zhēng)先恐后般進(jìn)入市場(chǎng)，政府應(yīng)與時(shí)俱進(jìn)，對(duì)大學(xué)生創(chuàng)業(yè)融資制度進(jìn)行優(yōu)化升級(jí)，降低大學(xué)生互聯(lián)網(wǎng)創(chuàng)業(yè)融資的風(fēng)險(xiǎn)；相關(guān)政策制定部門要與政府、高校、銀行建立起大學(xué)生創(chuàng)業(yè)互聯(lián)網(wǎng)融資服務(wù)網(wǎng)站，充分利用新媒體傳播途徑，加大力度宣傳互聯(lián)網(wǎng)創(chuàng)業(yè)融資模式，讓大學(xué)生正確看待互聯(lián)網(wǎng)創(chuàng)業(yè)融資的諸多方式，降低融資風(fēng)險(xiǎn)；另外，互聯(lián)網(wǎng)融資平臺(tái)迅猛爆發(fā)，致使其信用程度良莠不齊，甚至?xí)用晒镇_。相關(guān)部門的監(jiān)管力度，未能提供良好的互聯(lián)網(wǎng)融資環(huán)境；最后，政府部門應(yīng)適度降低融資門檻，對(duì)大學(xué)生創(chuàng)業(yè)應(yīng)采取更加科學(xué)、便捷的審批措施。

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