分析包裝條件對小黃魚優(yōu)勢腐敗菌的影響

黃佳奇，向迎春，邵穎，楊水兵，胡亞芹，，*

（1.浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310058；2.浙江大學(xué)舟山海洋研究中心，浙江舟山316021）

水產(chǎn)品是人類不可或缺的食品之一，2016年全國全年水產(chǎn)品產(chǎn)量近7 000萬噸，比上年增長3.0%[1]，伴隨著生活水平的提高，大眾對水產(chǎn)品的需求和要求也將越來越高。水產(chǎn)品含水量高、含氮物質(zhì)豐富，加上魚鰓、內(nèi)臟處黏液是天然的微生物培養(yǎng)基，極易滋生腐敗微生物和病原菌，使魚體產(chǎn)生酸敗味和腥臭味[2]，這成為影響水產(chǎn)品品質(zhì)的首要因素。上世紀(jì)末有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，貯藏初期某些微生物數(shù)量和比例并不占明顯優(yōu)勢，但隨著貯藏時間的延長，這些微生物易適應(yīng)環(huán)境變化而大量繁殖，在數(shù)量與比重上占絕對優(yōu)勢，其他菌種所占比例明顯減少或不再繁殖，據(jù)此提出了優(yōu)勢腐敗菌（Specific spoilage organisms，SSOs）的概念[3]。隨后有關(guān)水產(chǎn)食品SSOs的研究如火如荼，甚至擴(kuò)展到其他食品領(lǐng)域，如肉類、果蔬類[4-6]等。

SSOs的種類與多種因素有關(guān)，最重要的是包裝條件和溫度[7]。SSOs鑒定方法有兩種，培養(yǎng)基分離鑒定和分子生物學(xué)鑒定，前一種方法需要利用培養(yǎng)基進(jìn)行單菌落分離，操作復(fù)雜且無法檢測不可培養(yǎng)微生物[8]，但目前仍廣泛應(yīng)用。高通量測序作為一種新型分子生物學(xué)技術(shù)較多地應(yīng)用于腐敗菌菌相的檢測，能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定。小黃魚作為中國三大海產(chǎn)品之一，極易發(fā)生腐敗變質(zhì)，而其相關(guān)研究卻非常少。本課題以小黃魚為原料，采用培養(yǎng)基分離法和高通量測序技術(shù)，探究包裝條件對4℃冷藏（4℃更接近實際情況）小黃魚SSOs的影響，為后期針對性抑菌，延長小黃魚貨架期提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

舟山小黃魚（50 g/尾～70 g/尾）：購于浙江省舟山市沈家門碼頭，選取的小黃魚外形完整，無明顯機(jī)械損傷，色澤較為艷麗。采用碎冰泡沫箱包裝并在5 h內(nèi)運輸至杭州。

大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（Soybean-Casein Digest Agar Medium，TSA）、假單胞選擇性培養(yǎng)基（Pseudomonas CFC Selective Agar，CFC）、結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（Violet Red Bile Glucose Ager，VRBGA）、貝爾德-帕克瓊脂（Baird-Parker Ager，BP）、乳酸菌培養(yǎng)瓊脂（Man Rogosa Sharpe Ager，MRS）：青島海博生物技術(shù)有限公司；離心柱細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒：天根生化科技有限公司；2×Planta Max Master Mix：南京諾唯贊生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

YS-DQ-400立式真空包裝機(jī)：杭州永創(chuàng)智能設(shè)備有限公司；DT-6D氣調(diào)包裝機(jī)：大江機(jī)械設(shè)備有限公司；I Mix均質(zhì)機(jī)：法國InterLab有限公司；HE-120核酸電泳儀：上海天能科技有限公司；VS-F PCR儀：杭州瀚基科技有限公司；5418R冷凍離心機(jī)：德國Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

小黃魚用清水清洗后，分別用無菌袋、真空袋和氣調(diào)包裝盒（氣體比例為N2∶CO2=1∶1）包裝，每種包裝條件下各8批，每批3條魚均獨立包裝，置于4℃冰箱，每隔1天取出2條小黃魚分別進(jìn)行感官評價和菌落總數(shù)測定。

1.3.2 菌落總數(shù)測定

參照國標(biāo)GB 4789.2-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》[9]，于無菌條件下切取5.0 g腐敗魚皮（這里的魚皮是指用鑷子撕下來后，魚皮和魚肉都有，內(nèi)臟因為不食用不考慮計數(shù)）置于均質(zhì)袋中，加入45 mL無菌生理鹽水，均質(zhì)5 min，進(jìn)行梯度稀釋，選取適宜的稀釋度吸取1 mL，TSA培養(yǎng)基傾注搖勻，每個梯度做3個平行，置于27℃條件下培養(yǎng)48 h[10]，選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為有效平板，樣品中細(xì)菌總數(shù)（Total viable count，TVC）用每克樣品中菌落形成單位表示（CFU/g）。

1.3.3 感官評定

感官評價參考Li[11]的方法并稍作改動。由12名實驗室成員組成評定小組，以新鮮小黃魚作為對照，從色澤、質(zhì)構(gòu)、氣味角度進(jìn)行感官評價，其中外觀色澤占20%，黏液量、背部組織和腹部組織各占15%，氣味占35%，去掉最高分和最低分后計算加權(quán)平均分。其中以5分為感官接受臨界點（貨架期），低于5分表示魚已腐敗不可食用。小黃魚感官評定表見表1。

表1 小黃魚感官評定表Table 1 Sensory evaluation standards of little yellow croaker

1.3.4 DNA提取與擴(kuò)增

提?。簠⒖键S林和Parlapani[4，12]的方法并作改動。感官評分達(dá)到5分時，取該貯藏天數(shù)的小黃魚樣品，前處理同1.3.2操作。培養(yǎng)基分離法：每個稀釋度取200 μL菌液，分別涂布于事先晾干的培養(yǎng)基中（TSA、CFC、BP、MRS、VRBGA、孟加拉紅），每個梯度做 3個平行。培養(yǎng)條件設(shè)置如下：TSA 25℃培養(yǎng)48 h；CFC 25℃培養(yǎng) 48 h；MRS 25℃培養(yǎng) 72 h；VRBGA 37℃培養(yǎng) 24 h；BP 37℃培養(yǎng)48 h；孟加拉紅37℃培養(yǎng)72 h。選取有一定菌落且不互相重疊的平板，根據(jù)色澤、形態(tài)、隆起度、光滑度等挑取典型的單菌落，反復(fù)進(jìn)行平板劃線，得到純化的單菌落后保存接種至30 mL營養(yǎng)肉湯中，并于27℃下培養(yǎng)18 h。擴(kuò)增后的單菌液用于DNA提取。高通量測序法；直接取小黃魚樣品細(xì)菌稀釋液進(jìn)行DNA提取。兩者均使用Tiangen細(xì)菌DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取。

擴(kuò)增:培養(yǎng)基分離法以 27f（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）與 1492r（5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’）為引物:高通量測序法以338f（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'） 與 806r （5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）為引物。兩者反應(yīng)體系均為:2×Planta Max Master Mix 25 μL，引物各 2 μL，模板3 μL，ddH2O 18 μL；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）條件為：95℃預(yù)變性3 min，95℃變性30 s，54℃退火 30 s，72℃延伸 1 min，變性退火延伸重復(fù)35個循環(huán)，最后72℃徹底延伸5 min。PCR產(chǎn)物采用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.3.5 測序與分析

培養(yǎng)基分離法：將純度合格的DNA樣品送至上海生工有限公司測序。使用美國國家生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）中的BLAST對各菌株序列分析比對，選取同源性在98%以上的菌株序列。

高通量測序法：測序、序列優(yōu)化、可操作分類單元（Operational Taxonomy Unit，OTU）種屬鑒定和分類分析委托南京諾唯贊生物科技有限公司進(jìn)行，參考數(shù)據(jù)庫為 RDP 數(shù)據(jù)庫（Ribosomal Database Project）、Greengenes數(shù)據(jù)庫和NCBI 16SMicrobial數(shù)據(jù)庫。

2 結(jié)果與分析

2.1 感官評分

感官評價是判斷食品品質(zhì)的重要手段之一，根據(jù)人們的味覺、嗅覺、視覺、觸覺等對食品的色香味形等進(jìn)行主觀評分，根據(jù)評分結(jié)果判斷食品優(yōu)劣程度[13]。3種包裝條件下小黃魚的感官評分如圖1所示。

圖1 不同包裝條件下冷藏小黃魚感官評分變化情況Fig.1 Sensory evaluation of refrigerated little yellow croaker under various conditions during storage

空氣、真空和氣調(diào)包裝下小黃魚的貨架期分別為4、6、10 d。第 0天時魚肉的評分為（9.30±0.86）分，等級為非常新鮮，隨著貯藏時間的延長，新鮮度逐漸降低?？諝饨M小黃魚的從貯藏第2天開始腐臭味逐漸增強(qiáng)，表皮逐漸變黏稠；真空組小黃魚的腐臭味從第4天出現(xiàn)，并逐漸增強(qiáng)，其表皮黏液量也逐漸增多，而組織結(jié)構(gòu)相關(guān)的評分變化很?。粴庹{(diào)組小黃魚其組織結(jié)構(gòu)因失水而皺縮導(dǎo)致彈性下降，腐臭味從第6天開始出現(xiàn)，但腐臭味強(qiáng)度不及另外兩組，整個貯藏期間都沒有明顯的黏液產(chǎn)生（P＜0.05）。

結(jié)果表明包裝條件對小黃魚貨架期有明顯的影響，不同包裝條件主要為O2和CO2含量的差異，即O2和CO2含量會影響微生物的種類和代謝速率，從而造成貨架期的不同[14]。

2.2 菌落總數(shù)測定

3種包裝條件下小黃魚菌落總數(shù)隨貯藏時間的變化情況如圖2所示。

圖2 3種包裝條件下冷藏小黃魚菌落總數(shù)隨貯藏時間的變化情況Fig.2 Changes of total valuable counts of refrigerated little yellow croaker under various conditions during storage

初始狀態(tài)下的菌落總數(shù)為4.01 lg（CFU/g），貯藏前10天里菌落總數(shù)呈指數(shù)式增長，第10到14天增長速度明顯放緩。貯藏末期空氣組、真空組和氣調(diào)組小黃魚的菌落總數(shù)分別達(dá)到 8.42、8.00、7.55 lg（CFU/g）。在貯藏2 d至6 d內(nèi)，空氣組小黃魚的菌落總數(shù)呈現(xiàn)快速增長并逐步放緩的趨勢，顯示微生物數(shù)量漸趨飽和狀態(tài)；真空組和氣調(diào)組小黃魚的菌落總數(shù)增長出現(xiàn)了明顯的放緩，真空組在第4天出現(xiàn)明顯的拐點，氣調(diào)組在第6天出現(xiàn)明顯的拐點，隨后菌落總數(shù)又呈現(xiàn)快速增長，原因可能是這段貯藏期內(nèi)，微生物因缺少O2、高濃度CO2這等限制因素，導(dǎo)致缺氧而無法存活或轉(zhuǎn)而厭氧呼吸。出現(xiàn)拐點表示厭氧微生物在沒有需氧微生物的競爭后占據(jù)主導(dǎo)地位，開始新一輪強(qiáng)烈的代謝活動。推測在貯藏后期3種包裝條件下的腐敗菌菌相組成會存在比較大的差異。菌落總數(shù)結(jié)合感官評分可以看出，在感官評價終點時（得分≤5），對應(yīng)的腐敗微生物數(shù)量均介于 6.5 lg（CFU/g）～7.5 lg（CFU/g）之間，感官評分與菌落總數(shù)之間存在著顯著的相關(guān)性（P＜0.05）。

2.3 DNA提取與擴(kuò)增

培養(yǎng)基分離法：空氣組從VRBGA、CFC和MRS中分別分離出3株、1株和1株腐敗菌，編號A1～A5；真空組從VRBGA、CFC和MRS中分別分離出3株、2株和1株腐敗菌，編號V1～V6；氣調(diào)組從VRBGA、CFC和MRS中分別分離出2株、1株和1株菌，編號M1～M4，其他選擇性培養(yǎng)基中均沒有微生物生長。單菌培養(yǎng)提取DNA，PCR擴(kuò)增16S rDNA后，產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測如圖3所示。

圖3 培養(yǎng)基分離法篩選的腐敗菌16s rDNA電泳圖Fig.3 Electrophoregram of bacterial 16s r DNA

圖4 16S rDNA V3～V4可變區(qū)電泳圖Fig.4 Electrophoregram of V3～V4 variable DNA area

圖5 培養(yǎng)基分離測得3種包裝下的優(yōu)勢腐敗菌組成Fig.5 Composition of SSOs in 3 conditions by culture-dependent method

圖6 高通量測序法測得3種包裝下的優(yōu)勢腐敗菌組成Fig.6 Composition of SSOs in 3 conditions by culture-independent method

高通量測序法：將3種包裝條件下小黃魚表皮腐敗菌懸液直接進(jìn)行DNA提取，并PCR擴(kuò)增V3～V4可變區(qū)，產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測如如圖4所示。

2.4 腐敗菌檢測結(jié)果分析

培養(yǎng)基分離法空氣包裝（Culture dependent method-Aerobic condition，CA）、真空包裝（Culture dependent method-VP condition，CV）和氣調(diào)包裝（Culture dependent method-MAP condition，CM）小黃魚 SSOs組成如圖5所示；高通量測序法空氣包裝（High-throughput sequencing-Aerobic condition，HA），真空包裝（High-throughput sequencing-VP condition，HV） 和氣調(diào)包裝（High-throughput sequencing-MAP condition，HM）小黃魚SSOs組成圖6所示，高通量測序結(jié)果只顯示占比1%以上的腐敗微生物。結(jié)果顯示高通量測序法測得的腐敗微生物數(shù)量和種類要遠(yuǎn)超培養(yǎng)基分離法，且包裝條件也會對SSOs組成產(chǎn)生較大差異，空氣條件下SSOs以需氧型為主，真空和氣調(diào)包裝下的SSOs主要以兼性厭氧型為主。

Shewanella glacialipiscicola是唯一一種所有條件下都檢測到的腐敗菌，培養(yǎng)基分離法檢測該腐敗菌所占比例要高于高通量測序法，可能是培養(yǎng)基過濾了不可培養(yǎng)腐敗菌。希瓦氏菌屬是生鮮肉食品常見的SSOs之一，在自然界中分布廣泛，其適應(yīng)力強(qiáng)，可通過調(diào)整其嗜鹽能力來適應(yīng)環(huán)境，是自然條件下海鱸魚[10]、大菱鲆[15]，真空包裝白蝦[16]，氣調(diào)包裝三文魚[17]等的SSO。S.glacialipiscicola作為優(yōu)勢腐敗菌只被發(fā)現(xiàn)于大黃魚中[18]，考慮到大黃魚和小黃魚的親緣關(guān)系和活動范圍，這種菌株可能具有物種特異性和地區(qū)性。Carnobacterium maltaromaticum分布范圍僅次于S.glacialipiscicola，除HA外，其他條件下均被檢測到。該腐敗菌屬兼性厭氧型，在多種食品中均被發(fā)現(xiàn)為優(yōu)勢腐敗菌，如雞肉、三文魚、南美對蝦等[19-21]，其在無氧條件下致腐能力較強(qiáng)，而在有氧條件下，其代謝活動較弱[22]，因此真空包裝和氣調(diào)包裝下該腐敗菌所占比例要遠(yuǎn)高于空氣包裝。

空氣包裝下的變形桿菌屬是另一種常見的腐敗菌株，會對人體造成不適。Proteus Hauseri只作為生牛肉的SSO被報道[23]，因此推測該種菌以人體為媒介在捕撈和運輸過程中污染小黃魚，該菌在CA下和高通量測序法下能被檢測到，但在空氣包裝下所占比例要高于其它包裝，推測其在厭氧條件下活動能力不強(qiáng)，加上培養(yǎng)基的過濾使其未在CV和CM下被檢測到。Providencia heimbachae至今沒有在魚類中作為優(yōu)勢腐敗菌被發(fā)現(xiàn)，但在人體排泄物中有報道[24]，因此這種腐敗菌污染途徑可能與P.Hauseri類似。Planococcus migula只在HA下被發(fā)現(xiàn)，且占比達(dá)29.8%，該菌種廣泛分布于海洋，但至今未有文獻(xiàn)報道其為優(yōu)勢腐敗菌，該腐敗菌需在一定的鹽濃度下生長，推測培養(yǎng)基的鹽濃度未達(dá)到其要求而無法培養(yǎng)，有待進(jìn)一步研究論證。

真空包裝下的Aeromonas salmonicida是另一種普遍的厭氧腐敗菌，其在HV條件下所占比例遠(yuǎn)大于CV，但其競爭能力較弱故作為SSO存在的時間較短[14，25]，因此在氣調(diào)包裝的第10天已經(jīng)被其他微生物所競爭淘汰而未能檢測到。

氣調(diào)包裝下的兩種檢測方法間的差異性最小，C.maltaromaticum和S.glacialipiscicola兩者之和占80%以上。Bacillus Cohn只在HM條件下檢測到，該菌屬在許多種類的食品中都有發(fā)現(xiàn)，特別是面團(tuán)、面包、雞蛋等[26-27]，但鮮有作為水產(chǎn)品SSOs而被報道，張雯等發(fā)現(xiàn)某些芽孢桿菌對大黃魚SSOs有一定的拮抗作用[28]。

培養(yǎng)基分離法檢測到的一些占比較低的腐敗菌在高通量測序下占比例均小于1%，而高通量測序法下一些腐敗菌并未由培養(yǎng)基分離得到，可能的原因是該腐敗菌無法在培養(yǎng)基上生長，有待進(jìn)一步研究。由于這些腐敗菌占比較低故不考慮其為冷藏小黃魚的SSOs。

3 結(jié)論

包裝方式影響小黃魚的腐敗菌種類，進(jìn)而影響代謝，導(dǎo)致貨架期的不同。檢測方法影響SSOs種類和比例，主要原因是高通量測序法可以檢測不可培養(yǎng)微生物，總體而言高通量測序法在檢測腐敗菌組成上的準(zhǔn)確性要高于培養(yǎng)基分離法。如何減緩腐敗速率是未來水產(chǎn)保鮮的重點研究方向之一，獲得小黃魚SSOs種類為后期針對性研究抑菌劑，如殼聚糖、Nisin及其衍生物等，提供了重要的理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國國家統(tǒng)計局.2016年國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展統(tǒng)計公報[EB/OL].2017-02-28 http://www.stats.gov.cn/tjsj/zxfb./2017 02/t20170228_1467424.html

[2]沈月新.水產(chǎn)食品學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2001

[3]Gram L,Trolle G,Huss H H.Detection of specific spoilage bacteria from fish stored at low(0℃)and high(20℃)temperatures[J].International Journal of Food Microbiology,1987,4(1):65-72

[4]黃林,陳全勝,張燕華,等.冷卻豬肉優(yōu)勢腐敗菌分離鑒定及致腐能力測定[J].食品科學(xué),2013(1):205-209

[5]包英才,王丹,趙曉燕,等.鮮切青椒優(yōu)勢腐敗菌的分離純化及鑒定[J].食品工業(yè)科技,2013(3):332-334

[6]俞龍浩,賀旺林,李晶晶,等.真空包裝哈爾濱紅腸菌相分析及優(yōu)勢腐敗菌初步鑒定[J].現(xiàn)代食品科技,2015(3):66-70

[7]Casaburi A,Piombino P,Nychas G,et al.Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage[J].Food Microbiology,2015,45,Part A:83-102

[8]Parlapani F F,Meziti A,Kormas K A,et al.Indigenous and spoilage microbiota of farmed sea bream stored in ice identified by phenotypic and 16S rRNA gene analysis[J].Food Microbiology,2013,33(1):85-89

[9]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定GB 4789.2-2016[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2017

[10]唐文靜,王楚文,柳云龍,等.冷藏海鱸魚優(yōu)勢腐敗菌的篩選和鑒定[J].食品科學(xué),2016(3):170-174

[11]Li T,Hu W,Li J,et al.Coating effects of tea polyphenol and rosemary extract combined with chitosan on the storage quality of large yellow croaker(Pseudosciaena crocea)[J].Food Control,2012,25(1):101-106

[12]Parlapani F F,Boziaris I S.Monitoring of spoilage and determination of microbial communities based on 16S rRNA gene sequence analysis of whole sea bream stored at various temperatures[J].LWTFood Science and Technology,2016,66(Supplement C):553-559

[13]董開成,楊水兵,余海霞,等.不同預(yù)凍條件對小黃魚品質(zhì)的影響[J].現(xiàn)代食品科技,2015(2):225-231

[14]Schirmer B C,Heiberg R,Eie T,et al.A novel packaging method with a dissolving CO2headspace combined with organic acids prolongs the shelf life of fresh salmon[J].International Journal of Food Microbiology,2009,133(1/2):154-160

[15]崔正翠,許鐘,楊憲時,等.冷藏大菱鲆細(xì)菌組成變化和優(yōu)勢腐敗菌[J].食品科學(xué),2011(13):184-187

[16]Wang L,Liu Z,Dong S,et al.Effects of vacuum and modiied atmosphere packaging on microbial flora and shelf-life of pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei)during controlled freezing-point storage at-0.8°C[J].Food Science and Technology Research,2014,20(6):1141-1152

[17]Powell S M,Tamplin M L.Microbial communities on Australian modified atmosphere packaged Atlantic salmon[J].Food Microbiology,2012,30(1):226-232

[18]Ge Y,Zhu J,Ye X,et al.Spoilage potential characterization of Shewanella and Pseudomonas isolated from spoiled large yellow croaker(Pseudosciaena crocea)[J].Letters in Applied Microbiology,2017,64(1):86-93

[19]Macé S,Cardinal M,Jaffrès E,et al.Evaluation of the spoilage potential of bacteria isolated from spoiled cooked whole tropical shrimp(Penaeus vannamei)stored under modified atmosphere packaging[J].Food Microbiology,2014,40:9-17

[20]Mejlholm O,B?kn?s N,Dalgaard P.Shelf life and safety aspects of chilled cooked and peeled shrimps(Pandalus borealis)in modified atmosphere packaging[J].Journal of Applied Microbiology,2005,99(1):66-76

[21]Macé S,Joffraud J,Cardinal M,et al.Evaluation of the spoilage potential of bacteria isolated from spoiled raw salmon(Salmo salar)fillets stored under modified atmosphere packaging[J].International Journal of Food Microbiology,2013,160(3):227-238

[22]Groth Laursen B,Bay L,Cleenwerck I,et al.Carnobacterium divergens and Carnobacterium maltaromaticum as spoilers or protective cultures in meat and seafood:phenotypic and genotypic characterization[J].Systematic and Applied Microbiology,2005,28(2):151-164

[23]Kurcubic V S,Ma?kovic P Z,Veskovic-Moracˇanin S D,et al.Influence of the herb extract on inhibition of beef meat spoilage-Potential source of natural preservative:CEFood[C].Serbia:2012-Proceedings of 6th Central European Congress on Food,2012,553-558

[24]O'Hara C M,Steigerwalt A G,Green D,et al.Isolation of Providencia heimbachae from human feces[J].Journal of Clinical Microbiology,1999,37(9):3048-3050

[25]Qian Y,Xie J,Yang S,et al.In vivo study of spoilage bacteria on polyphenoloxidase activity and melanosis of modified atmosphere packaged Pacific white shrimp[J].Food Chemistry,2014,155:126-131

[26]Techer C,Baron F,Delbrassinne L,et al.Global overview of the risk linked to the Bacillus cereus group in the egg product industry:identification of food safety and food spoilage markers[J].Journal of Applied Microbiology,2014,116(5):1344-1358

[27]Valerio F,De Bellis P,Di Biase M,et al.Diversity of spore-forming bacteria and identification of Bacillus amyloliquefaciens as a species frequently associated with the ropy spoilage of bread[J].International Journal of Food Microbiology,2012,156(3):278-285

[28]張雯,倪莉,陳雅靜,等.枯草芽孢桿菌BS08對大黃魚腐敗菌的抑制及培養(yǎng)基優(yōu)化[J].中國食品學(xué)報,2013(8):102-109