妊娠期糖尿病產(chǎn)婦局麻藥神經(jīng)毒性損傷的機(jī)制探索△

宋少良 李亞文 文亞杰 李戈輝

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳婦幼保健院麻醉科 深圳 518020)

高糖性疾病患者對(duì)局麻藥神經(jīng)毒性具易感性[1～2]，這就造成妊娠期糖尿病的孕婦有可能在使用局麻藥物過程中出現(xiàn)神經(jīng)毒性損傷反應(yīng)[3]。機(jī)體在高血糖時(shí)存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的狀態(tài)，胞外Ca2+內(nèi)流增多，而局麻藥具有激活鈣離子通道和干擾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能，因此使得機(jī)體出現(xiàn)鈣超載性的細(xì)胞損傷[4]。同時(shí)高血糖還會(huì)通過ERK通路引起神經(jīng)元損傷，而局麻藥也能夠進(jìn)一步激活ERK下游通路[5]。本研究針對(duì)AKT/ERK信號(hào)通路失衡狀態(tài)及伴隨的離子通道狀態(tài)改變進(jìn)行分析討論。

1 對(duì)象與方法

研究使用人未分化SH-SY5Y神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞培養(yǎng)，局麻藥(LA)損傷模型建立：對(duì)SH-SY5H細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)將培養(yǎng)的細(xì)胞分為4組，每組66孔。對(duì)照組：為SH-SY5H細(xì)胞繼續(xù)單純培養(yǎng)24h；A組(鈣離子拮抗劑米貝地爾+ SH-SY5H細(xì)胞組)：加入米貝地爾后孵育24h；B組(局麻藥布比卡因+SH-SY5H細(xì)胞組)：加入布比卡因后孵育24h；C組(米貝地爾+布比卡因+SH-SY5H細(xì)胞組)：加入米貝地爾以及布比卡因后孵育24h；米貝地爾濃度均為5umol/L,布比卡因濃度1mmol/L，葡萄糖濃度13.3mmol/L。

于不同時(shí)間點(diǎn)(開始時(shí)刻、孵育1h、孵育6h以及孵育24h)觀察SH-SY5H細(xì)胞活力、凋亡率，同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化等，以評(píng)價(jià)妊娠期糖尿病產(chǎn)婦局麻藥神經(jīng)毒性情況。統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS20.0行統(tǒng)計(jì)分析P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)觀測結(jié)果

研究對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，可見對(duì)照組細(xì)胞胞體粗大，為多角形，神經(jīng)突起多而粗，總體分布成網(wǎng)絡(luò)狀。A組細(xì)胞與對(duì)照組形態(tài)學(xué)差別不顯著，無明顯改變；B組細(xì)胞可見胞體變圓會(huì)所，神經(jīng)突起部分消失；C組則見胞體變圓，神經(jīng)突起h情況較B組略有減輕。

2.2 不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力對(duì)比

研究發(fā)現(xiàn)對(duì)照組細(xì)胞在4個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力未見明顯改變；A組細(xì)胞在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞活力變動(dòng)也不大；均有P>0.05；B組細(xì)胞以及C組細(xì)胞可見隨著孵育進(jìn)程細(xì)胞活力逐漸減低，特別是B組細(xì)胞活力減退顯著；B、C組細(xì)胞在孵育1h、孵育6h以及孵育24h時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞活力均顯著低于開始時(shí)刻水平均有P<0.05，見表1。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力對(duì)比

A組B組C組對(duì)照組開始時(shí)刻100100100100孵育1h92±1280±10?#88±11?#96±11孵育6h94±1132±9?#67±12?#93±13孵育24h90±1326±8?#57±11?#90±13

注：*與開始時(shí)刻比較，P<0.05；#與對(duì)照組比較，P<0.05。

2.3 不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡率對(duì)比

研究中在4個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)對(duì)比4組細(xì)胞的凋亡率，結(jié)果提示對(duì)照組和使用米貝地爾的A組細(xì)胞凋亡未見明顯改變；P>0.05；與此同時(shí)B組細(xì)胞以及C組細(xì)胞可見隨著孵育進(jìn)程細(xì)胞凋亡率逐漸增加，特別是B組細(xì)胞最為顯著；B、C組細(xì)胞在孵育1h、孵育6h以及孵育24h時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞凋亡率均顯著高于開始時(shí)刻水平；均有P<0.05，見表2。

3 討論

妊娠期糖尿病的出現(xiàn)與孕婦機(jī)體營養(yǎng)過剩以及在代謝刺激下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能發(fā)生變化關(guān)聯(lián)密切；而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)體系的受損會(huì)形成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激致活性氧(reactive oxygen species,ROS)在細(xì)胞中的毒性不斷積累，長期持續(xù)就會(huì)引發(fā)細(xì)胞凋亡[7～10]。本研究結(jié)果提示對(duì)照組細(xì)胞胞體粗大，為多角形，神經(jīng)突起多而粗，總體分布成網(wǎng)絡(luò)狀。A組細(xì)胞與對(duì)照組形態(tài)學(xué)差別不顯著，無明顯改變；B組細(xì)胞可見胞體變圓會(huì)所，神經(jīng)突起部分消失；C組則見胞體變圓，神經(jīng)突起情況較B組略有減輕。

表2 不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡率對(duì)比

A組B組C組對(duì)照組開始時(shí)刻7．1±2．36．8±2．07．0±2．06．9±1．9孵育1h7．4±2．215．7±2．3?#9．1±2．2?#7．2±2．1孵育6h6．8±2．132．4±2．4?#18．3±2．3?#6．7±2．0孵育24h6．9±2．341．1±2．2?#20．1±2．1?#6．9±2．2

注：*與開始時(shí)刻比較，P<0.05；#與對(duì)照組比較，P<0.05。

基于機(jī)體在高血糖時(shí)存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，Ca2+通道異常；以及高血糖會(huì)通過ERK通路引起神經(jīng)元損傷的理論基礎(chǔ)[11～12]，本研究針對(duì)AKT/ERK信號(hào)通路失衡狀態(tài)及伴隨的離子通道狀態(tài)改變進(jìn)行分析討論，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組細(xì)胞在4個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力未見明顯改變；米貝地爾組細(xì)胞在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞活力變動(dòng)也不大。與此同時(shí)使用布比卡因的B組細(xì)胞以及米貝地爾、布比卡因聯(lián)用的C組細(xì)胞可見隨著孵育進(jìn)程細(xì)胞活力逐漸減低，特別是B組細(xì)胞活力減退顯著；B、C組細(xì)胞在孵育1h、孵育6h以及孵育24h時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞活力均顯著低于開始時(shí)刻水平。從凋亡的角度來分析在4個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)對(duì)比凋亡率，B組細(xì)胞以及C組細(xì)胞可見隨著孵育進(jìn)程細(xì)胞凋亡率逐漸增加，特別是B組細(xì)胞最為顯著；B、C組細(xì)胞在孵育1h、孵育6h以及孵育24h時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞凋亡率均顯著高于開始時(shí)刻水平。

總之，AKT/ERK信號(hào)通路在高糖環(huán)境和局麻藥可能發(fā)生協(xié)同作用下對(duì)離子通道產(chǎn)生影響。妊娠期糖尿病產(chǎn)婦使用局麻藥物進(jìn)行手術(shù)或鎮(zhèn)痛出現(xiàn)藥物神經(jīng)毒性損害需引起臨床關(guān)注，并給于恰當(dāng)防治。

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