蜜橘皮中黃酮類物質(zhì)提取條件的優(yōu)化

崔景麗

摘 要：桔皮中含有的黃酮類物質(zhì)具有一定的生物活性。采用水提法對(duì)蜜桔皮中的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行提取，以提取液的吸光值為考察指標(biāo)，通過(guò)單因素及正交試驗(yàn)優(yōu)化提取條件。試驗(yàn)結(jié)果表明，以水為提取溶劑時(shí)，蜜桔皮中黃酮類物質(zhì)的優(yōu)化提取條件為料液比1：20、浸提溫度80℃、浸提時(shí)間90min。

關(guān)鍵詞：蜜桔皮；黃酮類物質(zhì)；水提法

柑桔在世界水果中排名第一，在國(guó)際貿(mào)易農(nóng)產(chǎn)品中排名第三。柑桔中的黃酮類物質(zhì)是一類具有顯著生物活性的化合物，并且具有明顯的藥理作用。果皮、果肉和果核是柑桔類產(chǎn)品中黃酮類物質(zhì)含量比較高的部分，深度開(kāi)發(fā)桔皮中的黃酮類化合物，并深入研究其生理作用和藥理功效，對(duì)于柑桔的深加工具有重大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

黃酮類物質(zhì)的提取方法有水提法、有機(jī)溶劑提取法、超聲波提取法、微波提取法、超臨界流體萃取法等等[4-6]。水提法操作簡(jiǎn)單，成本較低，本試驗(yàn)通過(guò)比色測(cè)定蜜桔皮提取液中的黃酮類物質(zhì)含量，確定其最佳提取條件。

一、 材料與方法

1.材料

市售蜜桔（外皮飽滿，無(wú)蟲(chóng)害，無(wú)機(jī)械損傷，無(wú)人工蠟質(zhì)）。將桔皮洗凈、烘干，粉碎后過(guò)40目篩備用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（>98%）：Fluka公司。

主要儀器：HK-08型搖擺式粉碎機(jī)，JC-HH-S型恒溫水浴鍋，765型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，HC-3018型高速離心機(jī)。

2.方法

（1）工藝流程

蜜桔皮粉末 → 熱水浸提 → 離心 → 黃酮類物質(zhì)提取液 → 取樣測(cè)吸光值

（2） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確吸取濃度為0.1mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.0 mL 、1.0 mL、2.0mL、3.0mL、4.0 mL、5.0mL于10mL比色管中，加入5%的NaNO2溶液0.3mL，搖勻靜置6min，再加入10%的Al（NO3）3溶液0.3mL，搖勻靜置6min，后加入4%的NaOH溶液4.0mL，用蒸餾水稀釋至刻度，充分搖勻放置15min，于510nm波長(zhǎng)處以空白為對(duì)照測(cè)定吸光值。由所測(cè)數(shù)據(jù)得出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A=0.0136C-0.0016， 相關(guān)系數(shù)R2=0.9950。其中C為蘆丁含量（?g/mL），A為吸光值。

（3）黃酮類物質(zhì)提取條件的選擇

選取浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比三個(gè)變量進(jìn)行單因素試驗(yàn)，然后根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行三因素三水平正交試驗(yàn)，優(yōu)化黃酮類化合物的提取條件。

二、結(jié)果與分析

1.浸提溫度對(duì)黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響

在料液比為1：30，浸提時(shí)間為90min的條件下，研究50℃、60℃、70℃、80℃、90℃不同浸提溫度對(duì)黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響。由圖1看出，隨著溫度的升高，提取液的吸光值逐漸增大，當(dāng)達(dá)到80℃時(shí)所測(cè)吸光值最高。這是因?yàn)殡S著浸提溫度的升高，分子運(yùn)動(dòng)速度加快， 滲透、擴(kuò)散、溶解速度加快[7-8]。

2.浸提時(shí)間對(duì)黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響

在料液比為1：30，浸提溫度為70℃的條件下，研究30min、60min、90min、120min、150min不同浸提時(shí)間對(duì)黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響。由圖2可知，在浸提時(shí)間低于90min時(shí)，黃酮類物質(zhì)含量呈增加趨勢(shì)；大于90min后， 呈降低趨勢(shì)。

這可能是因?yàn)榻釙r(shí)間低于90min時(shí)，蜜桔皮中黃酮類物質(zhì)含量比提取溶劑里高， 兩體系中的濃度差大，傳質(zhì)推動(dòng)力就大，所以黃酮類物質(zhì)浸出速率快。90min后， 兩體系傳質(zhì)推動(dòng)力下降，黃酮類物質(zhì)緩慢浸出，并且浸提時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，部分黃酮結(jié)構(gòu)遭到破壞，導(dǎo)致含量下降[9-10]。

3.料液比對(duì)黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響

在浸提溫度為70℃，浸提時(shí)間為90min條件下，研究1：15、1：20、1：25、1：30、1：35不同料液比對(duì)黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響。由圖3可以看出，當(dāng)料液比達(dá)到1：20時(shí)所測(cè)吸光值最高。若料液比繼續(xù)增大，提取液的吸光值反而降低。

4.正交試驗(yàn)

在黃酮類物質(zhì)提取過(guò)程中，各因素會(huì)相互產(chǎn)生影響，依照單因素試驗(yàn)結(jié)果，確定以料液比、浸提溫度和浸提時(shí)間進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)。

由表1中極差分析可知，三個(gè)因素對(duì)蜜桔皮中黃酮類物質(zhì)提取結(jié)果的影響順序?yàn)椋篈（料液比）>B（浸提溫度）>C（浸提時(shí)間），三個(gè)因素的優(yōu)選組合為A1B3C3，即料液比1：20，浸提溫度80℃，浸提時(shí)間90min。在此條件下平行驗(yàn)證三次，得平均吸光值為0.5773，提取液中黃酮類物質(zhì)含量可達(dá)到42.57?g/mL。

三、結(jié)語(yǔ)

通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)蜜桔皮中黃酮類物質(zhì)的提取條件進(jìn)行了研究，得出水提法的優(yōu)化提取條件為料液比1：20，提取溫度80℃，提取時(shí)間90min，在該條件下，蜜桔皮提取液中黃酮類物質(zhì)含量可以達(dá)到42.57?g/mL。該工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低，可供工業(yè)化生產(chǎn)參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳源，余亞白等.柑橘黃酮類化合物提取純化方法的研究進(jìn)展[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，27（2）：211-215.

[2]呂凜，陶寧萍.超臨界二氧化碳萃取橘皮中黃酮類化合物的工藝研究[J].食品科學(xué)，2008，29（9）：150-154.

[3]李良導(dǎo).皺皮柑果皮中總黃酮的提取、純化及初步鑒定[D].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008. [4]李鳳林，李青旺，馮彩寧，等.天然黃酮類化合物提取方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)食品添加劑，2008（5）：60-64.

[5]劉璐，付明哲，王俠，等.植物黃酮類化合物提取及測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（6）：151-155.

[6]劉一杰，薛永常.植物黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)生物工程雜志，2016，36（9）： 81-86.

[7]李 歌，王珊珊，丁文珺，等.柚皮中黃酮類化合物提取工藝研究[J].生物技術(shù)進(jìn)展，2016，6（2）：125-129.

[8]王瑩，王澤南，王婷.洋蔥皮黃酮類物質(zhì)提取工藝的研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2006，27（11）：87-89.

[9]程燕，曲紹風(fēng)，李福偉，等.黃芩中4種黃酮類化合物的亞臨界水提取研究[J].山東科學(xué)，2013，26（3）：11-14.

[10]王嬙，李祝，任秀秀.箭葉淫羊藿總黃酮水提法提取工藝的研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，18（3）：39-41.