醫(yī)用器械絡(luò)合氯消毒液性能研究

李長青 高珊 肖瀟 高迪

醫(yī)用器械絡(luò)合氯消毒液(由北京萬金兆元消毒技術(shù)有限公司提供)是以二氯異氰尿酸鈉為主要?dú)⒕煞?，輔助成分為增效劑、穩(wěn)定劑和緩蝕劑。該器械消毒液為淺黃色有氯氣味的液體，原液有效氯含量為4.90 g/L，pH值為12.74。為研究該消毒劑的消毒性能，在實(shí)驗(yàn)室條件下，于2017年1－6月對(duì)其殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢效果及影響因素、穩(wěn)定性、腐蝕性和毒性進(jìn)行了研究。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 方法［1］

1.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取密封包裝的器械消毒液原液3份，分別置54℃恒溫箱內(nèi)存放14 d和37℃存放90 d。于存放前、后分別取樣，測(cè)定有效氯含量，計(jì)算下降率。

1.2 金屬腐蝕性試驗(yàn) 將不銹鋼、銅、鋁和碳鋼制成直徑(24±0.2)mm、厚1.0 mm、中間有一直徑2.0 mm小孔的圓片。用120號(hào)粒度水砂紙磨去表面氧化層，經(jīng)洗滌劑浸泡10 min，洗凈;用無水乙醇再次脫脂。置50℃干燥1 h，稱重(精確至0.1 mg)后浸泡于該器械消毒液原液中(200 mL/片)。連續(xù)浸泡72 h后，取出金屬片，用蒸餾水和軟毛刷反復(fù)洗凈，濾紙吸干，置50℃干燥1 h后稱重，計(jì)算腐蝕速率(R)。

1.3 染菌載體制備 取枯草桿菌黑色變種(ATCC 9372)芽孢(由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)研消毒檢測(cè)中心提供)。按規(guī)定程序培養(yǎng)制備芽孢懸液，用胰蛋白胨肉湯(TSB)制備成試驗(yàn)濃度芽孢懸液。取芽孢懸液10 μL滴染在無菌不銹鋼圓片上(直徑15 mm、厚0.5 mm)，置37℃溫箱烘干，制成染菌載體菌片備用。

1.4 中和劑鑒定試驗(yàn) 以枯草桿菌黑色變種芽孢為代表，設(shè)6組試驗(yàn)，按載體定量殺菌試驗(yàn)程序進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)?shù)?組不長菌或菌數(shù)遠(yuǎn)少于第2組，第2組菌數(shù)≥100 cfu/片，第3、4、5組組間菌數(shù)相差≤10%時(shí)，第6組不長菌時(shí)，表明所用中和劑及其濃度適宜。

1.5 殺菌試驗(yàn) ①載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)。按每個(gè)菌片5 mL消毒液用量，將盛有消毒液(陽性對(duì)照為PBS)的平皿置19～21℃水浴中恒溫，再將菌片浸入消毒液中。作用至預(yù)定時(shí)間，將菌片移入含5.0 mL中和劑溶液的試管中，中和作用10 min，經(jīng)充分振蕩洗脫，取洗脫液或其稀釋液作活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值。試驗(yàn)重復(fù)3次。②載體浸泡定性滅菌試驗(yàn)。試驗(yàn)條件和過程同載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)。作用至預(yù)定時(shí)間，將菌片移入含5.0 mL中和劑TSB溶液的試管中，經(jīng)充分振蕩混合，置于37℃條件下培養(yǎng)7 d觀察結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)5次。結(jié)果以陽性對(duì)照組有菌生長且回收菌數(shù)對(duì)照組符合要求，陰性對(duì)照組無菌生長，5次試驗(yàn)均無菌生長為滅菌合格。

1.6 有機(jī)物影響試驗(yàn) 在枯草桿菌黑色變種芽孢懸液中加入體積分?jǐn)?shù)25%和50%小牛血清，用其滴染菌片。用有效氯含量2 000 mg/L的該器械消毒液進(jìn)行載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)，計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值，觀察有機(jī)物對(duì)殺菌效果的影響。

1.7 醫(yī)療器械模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) ①醫(yī)療器械消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。載體為截?cái)嗟闹寡Q關(guān)節(jié)部位，將枯草桿菌黑色變種芽孢菌懸液滴染在載體朝上的齒部，干燥后進(jìn)行試驗(yàn)。將盛有消毒液(陽性對(duì)照為PBS)的平皿置19～21℃水浴上恒溫，按每件樣品浸泡10 mL消毒液用量將染菌載體浸沒于消毒液中。作用至規(guī)定時(shí)間，分別將染菌載體移入含10.0 mL中和劑溶液的塑料管中，中和作用10 min，經(jīng)充分振蕩洗脫，取洗脫液或其稀釋液作活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值。重復(fù)試驗(yàn)30份。②醫(yī)療器械滅菌模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)條件和過程同醫(yī)療器械消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。作用至規(guī)定時(shí)間，分別將染菌載體移入含10.0 mL中和劑肉湯的試管中進(jìn)行定性培養(yǎng)7 d。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 連續(xù)使用穩(wěn)定性試驗(yàn) 將清潔的醫(yī)用止血鉗置于2 000 mL消毒液中，達(dá)滿載要求。每日將止血鉗取出、洗滌、瀝干、在空氣中暴露后再放入，連續(xù)使用7 d。分次吸取浸泡后的器械消毒液，作定量和定性殺滅枯草桿菌黑色變種試驗(yàn)，觀察其殺滅效果變化情況。

1.9 毒理學(xué)評(píng)價(jià) ①小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn):選體重18～22 g清潔級(jí)昆明種小鼠20只(由斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2014－0006)，隨機(jī)分成2組，每組10只，雌、雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食(只給飲水)過夜。采用一次最大限度試驗(yàn)法，設(shè)10 000 mg/kg(體質(zhì)量)1個(gè)劑量組，按0.1 mL/10 g(體質(zhì)量)一次性灌胃給藥。給藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14 d，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況，計(jì)算LD50。②小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn):選體質(zhì)量25～30 g清潔級(jí)昆明種小鼠50只(來源同1.9①)，隨機(jī)分成5組，每組10只，雌、雄各半。共設(shè) 5 000、2 500、1 250 mg/kg(體質(zhì)量)3 個(gè)劑量組，另設(shè)陽性對(duì)照組給予環(huán)磷酰胺40 mg/kg(體質(zhì)量)，陰性對(duì)照組以去離子水灌胃給藥。受試物均采用經(jīng)口灌胃30 h染毒法，在0、24 h各給藥1次。第二次給藥后6 h，常規(guī)取胸骨制片固定、染色，于油鏡下對(duì)每只動(dòng)物觀察1 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞(PEC)，記錄觀察200個(gè)PEC同時(shí)出現(xiàn)的成熟紅細(xì)胞數(shù)(NEC)，計(jì)算微核細(xì)胞率，并采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)檢測(cè)，該器械消毒液原液有效氯含量為4.90 g/L，經(jīng)54℃恒溫存放14 d后，有效氯含量下降率平均為3.47%;經(jīng)37℃恒溫存放90 d后，有效氯含量下降率平均為7.76%。

2.2 金屬腐蝕性試驗(yàn)結(jié)果 用該器械消毒液原液浸泡金屬片72 h后，對(duì)不銹鋼、碳鋼、銅、鋁片平均腐蝕速率依次為0.000 0、0.004 8、0.001 5 和0.0 046 mm/a;結(jié)果表明，該器械消毒液對(duì)以上四種金屬基本無腐蝕。

2.3 中和劑試驗(yàn)結(jié)果 用含5 g/L硫代硫酸鈉、10 g/L吐溫－80的PBS作為中和劑，可有效中和含有效氯為4 000 mg/L的該器械消毒液對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殘留作用，且中和劑、中和產(chǎn)物對(duì)試驗(yàn)菌生長無明顯影響。

2.4 殺菌試驗(yàn)結(jié)果 用有效氯含量為1 000 mg/L該器械消毒液作用10 min，有效氯含量為2 000 mg/L作用5 min，對(duì)載體上枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為3.31和4.27(表1)。用有效氯含量為2 000 mg/L該器械消毒液作用20 min，有效氯含量為4 000 mg/L作用10 min，對(duì)載體上枯草桿菌黑色變種芽孢可達(dá)到完全殺滅(表2)。

表1 器械消毒液對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果

表2 器械消毒液載體浸泡定性滅菌試驗(yàn)結(jié)果

2.5 有機(jī)物影響試驗(yàn)結(jié)果 在枯草桿菌黑色變種芽孢懸液中加入體積分?jǐn)?shù)25%和50%小牛血清制備染菌載體，經(jīng)含2 000 mg/L有效氯的器械消毒液作用不同時(shí)間，顯示有機(jī)物對(duì)器械消毒液殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢效果有輕度影響(表3)。

表3 有機(jī)物對(duì)器械消毒液殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢的效果影響

2.6 模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明，用有效氯含量為2 000 mg/L該器械消毒液作用10 min，對(duì)污染于止血鉗關(guān)節(jié)部位上枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅對(duì)數(shù)值均＞3.57;有效氯含量為4 000 mg/L作用20 min，對(duì)該細(xì)菌芽孢可達(dá)完全殺滅。

2.7 連續(xù)使用穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 用含有效氯為2 000 mg/L的器械消毒液連續(xù)浸泡器械7 d后，取浸泡液進(jìn)行載體定量殺菌試驗(yàn)，作用10 min，對(duì)污染于止血鉗關(guān)節(jié)部位上枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅對(duì)數(shù)值均＞3.07。用含有效氯為4 000 mg/L的器械消毒液連續(xù)浸泡器械7 d后，取浸泡液進(jìn)行載體定性殺菌試驗(yàn)，作用20 min，對(duì)該細(xì)菌芽孢可達(dá)完全殺滅。

2.8 毒性試驗(yàn)結(jié)果 ①小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)期內(nèi)受試動(dòng)物生長良好、進(jìn)食正常，無中毒癥狀及死亡，小鼠經(jīng)口 LD50＞10 000 mg/kg(體質(zhì)量)，屬實(shí)際無毒級(jí)。②小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果。受試物各劑量組動(dòng)物微核細(xì)胞率均在正常范圍內(nèi)，陽性對(duì)照組微核細(xì)胞率與陰性對(duì)照組比較，差異有極顯著性(P＜0.01);PCE/NCE均值在正常范圍內(nèi);結(jié)果表明，微核試驗(yàn)結(jié)果陰性。

3 討論

3.1 以二氯異氰尿酸鈉為主要?dú)⒕煞值脑撈餍迪疽褐饕捎昧嗽鲂?、穩(wěn)定劑和緩蝕劑復(fù)配而成。在堿性條件下(pH＞10)，配方中的某些成分與氯離子形成了絡(luò)合物，該絡(luò)合物性質(zhì)比較穩(wěn)定，與溶液中的次氯酸(HCIO)和次氯酸根(CLO－)保持著動(dòng)態(tài)平衡。配方中的某些成份與氯絡(luò)合反應(yīng)后，在特定條件下，可能在金屬表面形成一種極薄的“鈍化膜”和“氧化膜”物質(zhì)，使金屬表面的電極電位等于或接近零，這樣金屬表面沒有了電位差，也就停止了電池現(xiàn)象的電子轉(zhuǎn)移了，從而大大降低了腐蝕性。因而該器械消毒液表現(xiàn)出腐蝕性低、性能穩(wěn)定、耐儲(chǔ)存，在37℃儲(chǔ)存3個(gè)月其有效氯下降率＜10%。

3.2 該器械消毒液屬于含氯消毒劑，由于其pH值比較高，不利于氯的活化［2］，因此殺菌所需有效氯劑量較大。本研究結(jié)果表明，該器械消毒液在常規(guī)使用濃度下對(duì)載體上細(xì)菌芽孢具有較好的殺滅效果;經(jīng)毒性試驗(yàn)證明屬實(shí)際無毒級(jí)物質(zhì)微核試驗(yàn)結(jié)果陰性，毒性低，此可能與產(chǎn)品的配方有關(guān)，需進(jìn)一步研究。

［1］衛(wèi)生部.消毒技術(shù)規(guī)范［S］.(2006－02－09).http://www.nhfpc.gov.cn/zhjcj/s9139/200804/86d017920ad84 e64a90806717719624f.shtml.

［2］楊華明，易濱.現(xiàn)代醫(yī)院消毒學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2008:126－130.