實驗室檢測方法確認過程探討

劉蕾

摘要：闡述了實驗室方法確認的步驟，針對方法確認終采樣過程的確認、檢出限驗證、精密度驗證、準確度驗證、加標回收實驗、實驗室間比對、人員間比對等問題進行了研究，提出在確認過程中要采用不同濃度的檢驗樣本進行檢驗，采用對比實驗及增加分析次數(shù)等方式，保障新項目在實施過程當(dāng)中的可靠性。

關(guān)鍵詞：職業(yè)衛(wèi)生檢測;方法確認;實驗室資質(zhì)認定

前言

全世界每天都有成千上萬個實驗室在進行著無數(shù)次的檢測分析，其目的可能涉及到社會各個領(lǐng)域的不同需求。但是，檢測分析的結(jié)果如果缺乏可信性，那么這個操作就毫無價值，并且這個操作也不應(yīng)該實施。而通過對檢測方法的確認，可以確保操作者足以證明其個人或其所在實驗室能夠正確運用某方法，或該方法能夠滿足某一特定預(yù)期用途的特殊要求。因此，方法確認正確與否是分析操作中的一個重要程序。

1方法確認的條件和原則

1.1方法確認的條件

方法確認或者重新確認總是發(fā)生在方法、實驗室、操作人員、儀器和環(huán)境的不同或發(fā)生變化時，當(dāng)需要驗證對某一特定預(yù)期用途所采用的方法是否能夠滿足特殊要求時，這就需要進行方法確認。

1.2方法確認的原則

（1）實驗室正在使用的方法必須是經(jīng)過充分驗證并且可靠的，有必要進行進一步的工作補充一些已有的資料。

（2）很多關(guān)于方法的確認公開發(fā)表的文獻都是經(jīng)過合作研究完成的，并且也會有很多方法和這種確認相關(guān)，如果一種方法在很大范圍內(nèi)已經(jīng)被使用，或已經(jīng)制定為一種標準程序，那么一系列實驗室的合作研究可能首選確認的這種方式。

（3）對那些沒有使用由基本方法所衍生出的方法，方法確認往往依賴于同常規(guī)方直接比較進行。

（4）AOAC已經(jīng)實施把多個實驗室進行實驗用來作為方法確認的首選方式。

1.3方法確認的內(nèi)容

按照中國實驗室國家認可委員會（CNAL）準則性文件CNALΠACO1：2003《檢測和校準實驗室認可準則》（等同采用ISOΠIEC17025：1999）51415規(guī)定，需要確認的方法包括四類：實驗室設(shè)計/制定的方法、實驗室采用的非標準方法、超出其預(yù)定范圍使用的標準方法、經(jīng)過擴充和更改的方法。若對已確認的方法進行了更改，則應(yīng)將更改的影響文件化，適當(dāng)時進行重新確認。方法確認包括：①詳細說明有關(guān)要求（指被確認的方法應(yīng)滿足的某一具體預(yù)期用途的特定要求）;②確定檢測方法的特性;③檢查核實使用方法能夠滿足有關(guān)要求;④聲明有效性。

2方法確認步驟

對于需要應(yīng)用到的設(shè)備儀器、環(huán)境狀況、人員技術(shù)等方面均需進行相應(yīng)的確認，并能夠給予相關(guān)的驗證證實，以確保實驗室能夠正常的應(yīng)用新檢測方法，其具體步驟如下：

（1）確定新項目開展的標準規(guī)范。依據(jù)相應(yīng)的技術(shù)標準或規(guī)范內(nèi)容，采用適當(dāng)?shù)姆椒皺z測程序，所選取的標準應(yīng)為國家、地方或行業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的權(quán)威標準。

（2）檢測人員在進行新項目的準備過程當(dāng)中，要對項目方案內(nèi)容、試劑及儀器設(shè)備等，要嚴格按照項目方案及標準的要求進行物品的采購，同時對于采購的新置儀器建立相關(guān)的記錄檔案，且按照要求進行檢定。

（3）對檢測記錄的表格進行編制，同時還應(yīng)對檢測報告的格式內(nèi)容進行確認。

（4）依據(jù)相關(guān)的標準及規(guī)范進行實驗記錄，并以此產(chǎn)生出相應(yīng)的檢測報告并送檢審查，同時開展檢出限及精密度準確度的檢驗，并進行比對實驗，以確保新實施檢測方法的可靠性。

（5）新方法確認過程中記錄環(huán)境狀況及條件。

3方法確認的技術(shù)

方法確認的技術(shù)按照CNALΠACO1：200351415規(guī)定，用于確定方法性能的技術(shù)包括：①使用參考標準或標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）進行比較;②與其他方法所得結(jié)果進行比較;③實驗室間比對;④對影響結(jié)果的因素做系統(tǒng)性評價;⑤根據(jù)對方法原理的科學(xué)理解和實踐經(jīng)驗，對所得結(jié)果不確定度進行評價。

3.1加標回收試驗

加標回收試驗是在被檢測樣本中加入已知濃度（與樣本中被測組分濃度相當(dāng)）的參考物質(zhì)，進行同時檢測，按下式計算回收率 回收率（%）=（C1-C2）/C3×100

C1-樣本添加參考物質(zhì)后檢測值;C2-樣本檢測值;C3-添加參考物質(zhì)濃度。

用回收率評價準確度時須注意：a）樣品中待測物質(zhì)濃度和加入?yún)⒖嘉镔|(zhì)的濃度對回收率的影響。參考物質(zhì)常加入量與待測物質(zhì)濃度水平相等或接近為宜。若待測物質(zhì)濃度較高，則加標后的總濃度不宜超過方法線性范圍上限的90%;若其濃度小于檢出限量，可按測量下限加標。在任何情況下，加標量不得大于待測物質(zhì)含量的三倍。b）對回收率的要求數(shù)值是個比較復(fù)雜的問題，依分析測量方法的難易和不同類型的分析方法而變化。一般mg/kg級，應(yīng)在90%以上;μg/kg級80%;更復(fù)雜的方法可低至70%;但最小不能低于70%。

3.2線性確認

對于任何定量的方法，都需要確定被分析物濃度的適用范圍，這里提到的濃度范圍是實際測量的溶液。在工作范圍內(nèi)可能存在線性反應(yīng)范圍，在線性范圍內(nèi)信號反應(yīng)與被分析物的濃度呈線性相關(guān)，因此，過高的濃度通常會受到反應(yīng)系統(tǒng)各種因素的影響，過低的濃度可能會受到檢測限量的限制。建立標準曲線確定線性范圍必須建立多個標準點，一般分兩個步驟：a）空白附加參考物質(zhì)：在不同濃度（或數(shù)量級）范圍的參考物質(zhì)+空白樣本（除空白外少需要6個濃度），以操作反應(yīng)信號為y軸，以操作濃度為x軸，制作標準曲線，確定各種濃度范圍的最大和最小線性范圍。b）回歸計算：在各濃度（或數(shù)量級）范圍，用至少6個不同濃度的參考物質(zhì)或加強空白樣本，以操作反應(yīng)信號為y軸，以操作濃度為x軸，制作標準曲線，或進行線性回歸計算，或通過操作系統(tǒng)確定回歸方程。

3.3檢出限

檢出限即為相關(guān)的分析方法在所給出的置信度當(dāng)中，從采集到的樣本中檢測出待測樣品的最小濃度數(shù)量值。不同的分析方法和標準檢出限不同，由于實驗室環(huán)境不同，在進行檢測方法認定中，應(yīng)準確測量出實際檢出限數(shù)值，看是否符合該方案和標準的檢出限的實際要求。若未能達到檢出限的數(shù)值的要求，則要從實驗過程中逐一排查，尋找原因，最終能夠符合檢出限的數(shù)值要求。

3.4精密度

（1）僅對標準樣本進行精密度的檢測。采用濃度為校準曲線最高濃度的0.1或0.9倍的標準溶液，同時對采集的標準樣本以及加入標準溶液兩種檢測樣本內(nèi)容，均應(yīng)達到三種或三種以上。

（2）對于采集到的標準樣本要檢測其在不同濃度下的精密度數(shù)值，對于同一樣本至少要檢測兩種濃度的標準溶液，同時進行至少6次的檢驗。

（3）在精密度的檢驗當(dāng)中采用檢測標準當(dāng)中的誤差數(shù)值作為差異分析，其具體的可靠性將會受檢測次數(shù)的干擾，因此必須要重復(fù)能夠多的檢驗次數(shù)才能獲得較為可靠的檢測數(shù)值，建議進行分析的次數(shù)應(yīng)當(dāng)至少達到5次或以上。

3.5準確性

測定標準物質(zhì)或質(zhì)控樣。標準物質(zhì)或質(zhì)控樣是由權(quán)威機構(gòu)給出準確量值，與檢測樣品基質(zhì)相同的物質(zhì)，檢測時和樣品同樣處理和測定。計算測定值與標準物質(zhì)和質(zhì)控樣給定值之間的誤差，如果誤差在標準物質(zhì)和質(zhì)控樣允許范圍之內(nèi)，或相對誤差小于10%，則表示該測定結(jié)果是準確可靠的。

3.6實驗室間比對

實驗室間比對是由上一級實驗室（或相關(guān)技術(shù)機構(gòu)）對下級實驗室提供質(zhì)控樣品或盲樣，檢測結(jié)果由分發(fā)質(zhì)控樣品或盲樣的實驗室進行統(tǒng)計評價，以考核方法的可靠性。

4結(jié)論

綜上所述，方法確認的內(nèi)容和進行方法確認的方法。在開展新項目的過程中，一方面要對儀器設(shè)備及相關(guān)的環(huán)境檢測工作人員進行嚴格的選取，另一方面還應(yīng)當(dāng)依據(jù)相關(guān)的標準方法及手段對其進行確認，特別是要加強對于所采集樣品的現(xiàn)場試驗、空白試驗、加標回收率、精密度以及檢出限的驗證確定。此外，在精密度及準確度的檢驗程序當(dāng)中，應(yīng)該采用不同濃度的試驗樣本同時進行檢驗驗證，通過對比試驗，以及增加分析次數(shù)等的方式，來保障新項目在進行過程當(dāng)中的可靠性。

參考文獻

[1]李忠華.環(huán)境監(jiān)測實驗室質(zhì)量控制技術(shù)及問題分析.〖J〗科技與生活，2011（3）

[2]劉卓慧.實驗室資質(zhì)認定工作指南（第二版）〖M〗.北京：中國計量出版社，2012

（作者單位：嘉興嘉衛(wèi)檢測科技有限公司）