巴天酸模水提物對大腸桿菌致瀉小鼠胃腸蠕動的影響研究

孫艷，黃志宏，陳朝喜*

（1.四川省涼山彝族自治州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，四川 西昌 615042；2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川 成都 610041）

巴天酸模又名土大黃、洋鐵酸模、牛西西等，其莖和葉中含有維生素C、胡蘿卜素及鐵、硒、碘等豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，不僅是一種優(yōu)良的飼用牧草，而且在民間常以根和葉入藥，具有清熱解毒、活血止血、通便殺蟲的功效，在治療多種皮膚病、出血癥及各種炎癥方面具有較高的藥用價值[1]。本研究以大腸桿菌復(fù)制小鼠腹瀉模型，初步探討不同劑量巴天酸模水提物對感染小鼠胃腸蠕動的影響。

1 材料與方法

1.1 藥材、試劑和供試菌株等 巴天酸模于2016年8月份采自四川省紅原縣西南民族大學(xué)青藏高原研究基地，經(jīng)西南民族大學(xué)獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室陳朝喜副教授鑒定為蓼科酸模屬植物巴天酸模，采新鮮全草，自然風(fēng)干后粉碎，置于恒溫干燥箱內(nèi)備用。大腸桿菌臨床分離株從一例腹瀉牦牛糞便樣本中采集，經(jīng)前期動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有較強(qiáng)的致腹瀉作用。

胭脂紅：臨用前用生理鹽水配成1%溶液；瓊脂粉、MH肉湯和胰蛋白胨大豆肉湯：購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，臨用前按照說明書配制備用；主要實(shí)驗(yàn)器材包括小鼠灌胃器、手術(shù)剪、眼科鑷和透明尺；實(shí)驗(yàn)小鼠購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 巴天酸模水提物的制備 稱量巴天酸模100g，加入10倍體積的去離子水后置于提取裝置上，在加熱回流條件下提取1h，提取3次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至浸膏狀。使用前取浸膏適量制成1g/mL的懸濁液，加入0.5%羧甲基纖維素鈉混勻后備用。

1.2.2 巴天酸模水提物L(fēng)D50測定 將63只體重18～25g的小鼠隨機(jī)分成7組，飼養(yǎng)適應(yīng)1周左右后，將巴天酸模水提物按照等比濃度梯度分別灌胃給藥，并在給藥24h內(nèi)觀察和記錄各組小鼠的精神狀態(tài)和死亡狀況，參照改良寇氏法計算其LD50。

1.2.3 巴天酸模水提物對大腸桿菌致瀉小鼠胃腸蠕動的影響 參考陳奇等[2]方法以臨床分離的牦牛源大腸桿菌新鮮菌液腹腔注射小鼠，復(fù)制大腸桿菌腹瀉模型。模型復(fù)制成功后，小鼠禁食12h。模型組和對照組每組各10只小鼠，將巴天酸模水提物分別按1/20 LD50（低劑量組）、1/10 LD50（中劑量組）和1/5 LD50（高劑量組）的藥量灌服模型組小鼠，對照組小鼠以0.1mL/10g體重灌服生理鹽水。15min后，每只小鼠均灌胃含1%胭脂紅的生理鹽水0.2mL，再經(jīng)15min將各組小鼠全部脫臼處死，剖開腹腔，取出胃腸道，剪開附著在腸管上的腸系膜，將腸管拉成直線。以幽門為起點(diǎn)，測量胭脂紅在腸道內(nèi)的移動距離和小腸（幽門至盲部）的全長，按照公式“胭脂紅移動距離占小腸全長的百分比=胭脂紅的移動距離/小腸全長×100%”計算，即得每組小鼠的腸推進(jìn)率，比較各組之間的差異性。

2 結(jié)果

2.1 巴天酸模水提物L(fēng)D50的測定 各組小鼠給藥后，除了高劑量組部分小鼠出現(xiàn)焦慮、多動、排便次數(shù)相對增多等特征外，其他組小鼠沒有任何異常，因此本試驗(yàn)未能測到其LD50。為避免后續(xù)試驗(yàn)中藥物存在蓄積毒性，本研究對24h內(nèi)未發(fā)生死亡的各組小鼠繼續(xù)按照同樣給藥方法給藥1周，除了高劑量組小鼠死亡1只外，其他各組小鼠與24h內(nèi)給藥的表現(xiàn)基本一樣。

對高劑量組死亡小鼠進(jìn)行剖檢觀察和病理學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)實(shí)質(zhì)器官心、肝、脾、肺、腎均未見任何眼觀變化；病理組織學(xué)結(jié)果顯示：少數(shù)心肌細(xì)胞明顯腫大，胞漿消失，胞漿有大量空泡或裂隙，殘存的胞漿呈顆粒狀或絲網(wǎng)狀，細(xì)胞核正常或明顯腫大，染色質(zhì)溶解呈空泡狀，病變心肌細(xì)胞呈散在分布或2～4個小灶狀分布；腎臟皮質(zhì)部大量腎小管上皮細(xì)胞腫脹，胞漿淡染，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡，殘存的胞漿呈顆粒狀或絲網(wǎng)狀，多數(shù)病變細(xì)胞的細(xì)胞核溶解消失，病變腎小管多呈形狀不規(guī)則的散在分布，病變腎小管超過50%；脾臟、肺臟和肝臟未觀察到病變。

2.2 巴天酸模水提物對大腸桿菌致瀉小鼠胃腸蠕動的影響 小鼠大腸桿菌腹瀉模型復(fù)制成功后，小鼠均出現(xiàn)不同程度的腹瀉現(xiàn)象。在給藥巴天酸模水提物后，胭脂紅在各組小鼠的腸推進(jìn)率如圖1所示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果表明，大腸桿菌腹瀉模型組小鼠的腸推進(jìn)率為23.29%，低、中、高劑量組小鼠的腸推進(jìn)率分別為35.72%、37.10%、48.25%。與腹瀉模型組相比，高劑量組的腸推進(jìn)率差異極顯著，低劑量組和中劑量組差異顯著。

圖1 不同劑量巴天酸模對小鼠腸推進(jìn)率的影響

3 結(jié)論與分析

前期體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明，從紅原縣采集的巴天酸模等幾種蓼科植物水提物對大腸桿菌的抑制作用存在不同程度的差異性（試驗(yàn)結(jié)果未發(fā)表）?；诖?，本試驗(yàn)擬通過體內(nèi)抗腹瀉試驗(yàn)來驗(yàn)證其效果是否與體外一致。然而，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著巴天酸模水提物劑量的升高，各組小鼠的腸推進(jìn)率也隨著升高，說明巴天酸模水提物可以引起腹瀉小鼠的胃腸蠕動增加。分析本試驗(yàn)出現(xiàn)此種結(jié)果的原因，主要有以下幾點(diǎn)：

（1）巴天酸模化學(xué)成分和濃度的影響：Demirezer等[3]報道蒽醌是酸模屬乃至蓼科植物中最具特征性的一類成分，而蒽醌類具有較強(qiáng)的下瀉作用[4-5]。（2）巴天酸模采集時間和環(huán)境因素：本試驗(yàn)巴天酸模的采收時間為多雨的夏季，采收時植株內(nèi)的化學(xué)成分對藥材質(zhì)量具有影響，因此后續(xù)工作要進(jìn)一步證實(shí)并確定最佳采收期。此外，巴天酸模的生長環(huán)境對其質(zhì)量的影響也較大，本試驗(yàn)藥材樣本采集于無污染的高原地區(qū)，避免了有害元素對試驗(yàn)結(jié)果的影響[6-11]。（3）胭脂紅灌胃量和小鼠處死時間也會對試驗(yàn)結(jié)果造成一定的誤差，加上剪取腸管時過度用力牽拉導(dǎo)致長度測量結(jié)果不準(zhǔn)確，同樣會引起誤差。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱晶晶，王崢濤，張朝鳳，等.酸模屬植物中化學(xué)成分及其藥理活性研究進(jìn)展[J].中草藥，2008，39（3）：450-454.

[2]陳奇，張伯禮.中藥藥效研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2016：280-290.

[3]Demirezer O L，Ayse K，Isabelle B，et al.The structures of antioxidant and cytotoxic agents from naturalsource：anthraquinones and tannins from roots of Rumex patientia[J].Phytochemistry，2001，58（8）：1213-1217.

[4]原源，陳萬生，鄭水慶，等.巴天酸模的化學(xué)成分[J].中國中藥雜志，2001，26（4）：256-258.

[5]曾涌，羅建軍，李沖.巴天酸模地上部分化學(xué)成分研究[J].中藥材，2013，36（1）：57-60.

[6]劉景，夏忠庭，周桂榮，等.巴天酸模根化學(xué)成分研究[J].中藥材，2011，34（6）：893-895.

[7]蘇躍增，高黎明，鄭旭東，等.巴天酸模中的蒽醌類化合物[J].西北師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2000，36（3）：47-49.

[8]楊波，王慧穎，趙萍，等.巴天酸模籽中蒽醌與黃酮類成分的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2015，38（5）：63-65.

[9]鄧麗娜，李博然，王睿，等.尼泊爾酸模中分離到的1 個新萘酮類化合物[J].中國中藥雜志，2017，42（16）：3143-3145.

[10]楊波，趙萍，許春暉，等.巴天酸模籽非蒽醌化學(xué)成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：262-263.

[11]高黎明，魏小梅，鄭尚珍，等.巴天酸模中化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2002，33（3）：207-209.