輪蟲、鹵蟲無(wú)節(jié)幼體及蠅蛆三種開口餌料對(duì)黃顙魚仔魚生長(zhǎng)、存活及免疫酶活性的影響

隋延鳴 ，莊亞潤(rùn) ，周凱 ，厲成新 ，來(lái)琦芳

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院鹽堿水域漁業(yè)工程技術(shù)中心，上海200090；2.上海市上海農(nóng)場(chǎng)海豐水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，江蘇 鹽城 224153）

魚類仔魚由內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)逐漸過(guò)渡到外源性營(yíng)養(yǎng)，消化代謝能力發(fā)生了劇烈變化[1]。這一階段魚類極其敏感，容易死亡，為生活史中的“危險(xiǎn)期”。多數(shù)魚類在這一階段為肉食性，然后才逐漸分化為各自的食性。這一階段開口餌料是否適合、充足直接影響仔魚的存活率[2]。目前關(guān)于經(jīng)濟(jì)魚類開口餌料的研究報(bào)道較多。劉利平等（2017）比較了9種開口餌料對(duì)日本鰻鱺Anguilla japonica仔魚存活率的影響，發(fā)現(xiàn)投喂以鯊魚卵、磷蝦提取液為基礎(chǔ)的餌料和以鯊魚卵、海蜇勻漿液為基礎(chǔ)的餌料以及微綠球藻Nannochloris oculata液均提高了日本鰻鱺仔魚的存活率[3]；投喂?fàn)I養(yǎng)加強(qiáng)的輪蟲可以顯著提高銀漢魚Chirostoma estor仔魚的存活率[4]。探究適合仔魚階段的開口餌料是水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類人工養(yǎng)殖的基礎(chǔ)。

黃顙魚Pelteobagrus fulvidraco刺少、肉質(zhì)鮮美，雄魚比雌魚生長(zhǎng)快，深受消費(fèi)者的喜愛，全雄黃顙魚養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴(kuò)大。但是，在全雄黃顙魚養(yǎng)殖過(guò)程中，仔魚時(shí)期存活率低嚴(yán)重阻礙了全雄黃顙魚養(yǎng)殖。目前黃顙魚仔魚的開口餌料主要為池塘培養(yǎng)的輪蟲。培育輪蟲常導(dǎo)致輪蟲高峰提前或延遲，與魚苗開口攝食時(shí)間不一致[5]；輪蟲過(guò)多容易敗壞水質(zhì)，與養(yǎng)殖物種爭(zhēng)奪氧氣。因此嘗試其他開口餌料代替輪蟲非常必要。鹵蟲初孵無(wú)節(jié)幼體卵黃含量高，含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪和礦物質(zhì)，在世界各國(guó)魚蝦蟹育苗生產(chǎn)中普遍應(yīng)用[6]。蠅蛆Musca domestica vicina是一種高蛋白、高脂肪、氨基酸含量較全面的飼料資源和優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物的活餌料，被譽(yù)為“動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)寶庫(kù)”。蠅蛆含有的抗菌肽、幾丁質(zhì)等具有調(diào)節(jié)免疫功能的生理活性物質(zhì)，可以有效提高養(yǎng)殖物種的免疫水平[7]。本實(shí)驗(yàn)嘗試以鹵蟲、蠅蛆勻漿為全雄黃顙魚開口餌料，探究其對(duì)全雄黃顙魚仔魚生長(zhǎng)生理的影響。

磷酸酶作為免疫系統(tǒng)中的非特異性磷酸單酯水解酶，依催化的最適pH分為酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）。酸性磷酸酶是生物體內(nèi)磷代謝的重要酶類，除了參與磷酸酶的代謝外，還參與代謝調(diào)節(jié)、能量轉(zhuǎn)換以及信號(hào)傳導(dǎo)等重要生命活動(dòng)；堿性磷酸酶是一類單酯磷酸水解酶，為一種膜結(jié)合金屬糖蛋白，主要存在于魚類前腸上皮細(xì)胞的淺部和紋狀緣上，在堿性條件下催化無(wú)機(jī)和有機(jī)的磷酸酯水解，參與腸上皮細(xì)胞的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，在機(jī)體防御和特定藥物在養(yǎng)殖物種的代謝中發(fā)揮重要作用[8,9]。兩種磷酸酶在魚類處于不利環(huán)境時(shí)均會(huì)改變自身活性，對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)[10]。溶菌酶是一類具有免疫保護(hù)作用的天然抗菌肽，在水產(chǎn)動(dòng)物抵抗病原微生物感染中具有重要作用[11]。本實(shí)驗(yàn)以酸性磷酸酶、堿性磷酸酶以及溶菌酶為檢測(cè)指標(biāo)，探究鹵蟲以及蠅蛆勻漿對(duì)全雄黃顙魚仔魚生長(zhǎng)生理的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)在江蘇省大豐市海豐漁場(chǎng)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)用仔魚為出膜后 4d的仔魚，體長(zhǎng)為（0.25±0.004）cm,健康且規(guī)格一致。所用開口餌料為輪蟲、鹵蟲無(wú)節(jié)幼體及蠅蛆勻漿。輪蟲為漁場(chǎng)人工捕撈，鹵蟲卵為美國(guó)大鹽湖牌，蠅蛆購(gòu)自江蘇省南通希源特種養(yǎng)殖有限公司。

1.2 方法

將10 000尾全雄黃顙魚仔魚分為3組，放入長(zhǎng)2m×寬1.4m×水深30cm的孵化槽中，分別投喂輪蟲、鹵蟲無(wú)節(jié)幼體和蠅蛆勻漿。實(shí)驗(yàn)期間，每天8:00、19:00各投喂一次約20g濕重餌料，投喂1h后吸污，換水1/4。水溫維持在（25±0.5）℃，溶解氧＞6mg/L。實(shí)驗(yàn)共持續(xù)7d，在實(shí)驗(yàn)的第0d、第3d、第7d從每個(gè)孵化槽中取50尾魚，測(cè)量體長(zhǎng)和體質(zhì)量。

在實(shí)驗(yàn)第0d、第3d、第7d每個(gè)水槽隨機(jī)取6尾仔魚，稱量體質(zhì)量后與生理鹽水按質(zhì)量體積比1∶9研磨成漿，在1 200r/min離心3min后取上清液，采用磷酸苯二鈉法[12]測(cè)定磷酸酶活力，定義：每g組織蛋白在25℃與基質(zhì)作用30min產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)活力單位；溶菌酶活力采用南京建成生物工程公司試劑盒測(cè)定，試驗(yàn)步驟按說(shuō)明書進(jìn)行；采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定各組蛋白含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因子方差分析（One-way，ANOVA）比較黃顙魚仔魚體長(zhǎng)、體質(zhì)量、磷酸酶活性等指標(biāo)，并用鄧肯多重檢驗(yàn)比較各處理組間均值的差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 仔魚攝食不同餌料時(shí)的生長(zhǎng)及存活率

由圖1可知，投喂三種餌料3d后仔魚體質(zhì)量出現(xiàn)顯著性差異。投喂鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組仔魚的體質(zhì)量顯著大于投喂輪蟲組（P＜0.05），而投喂蠅蛆組仔魚體質(zhì)量介于投喂鹵蟲無(wú)節(jié)幼體與投喂輪蟲組之間，兩組間無(wú)顯著差別（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)7d后，投喂蠅蛆組仔魚體質(zhì)量最大，其次為投喂鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組，最后為投喂輪蟲組，且投喂蠅蛆和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組體質(zhì)量顯著大于投喂輪蟲組（P＜0.05）。

圖1 仔魚攝食不同開口餌料時(shí)的體質(zhì)量Fig.1 Body weight of yellow catfish larvae fed various initial food

圖2示三種餌料對(duì)仔魚體長(zhǎng)變化的影響。投喂3d后，全雄黃顙魚仔魚體長(zhǎng)出現(xiàn)顯著差異，投喂蠅蛆組和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組仔魚體長(zhǎng)顯著大于投喂輪蟲組（P＜0.05），這一趨勢(shì)一直保持到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

圖2 仔魚攝食不同開口餌料時(shí)的體長(zhǎng)Fig.2 Body length of yellow catfish larvae fed various initial food

圖3為攝食不同開口餌料的仔魚的存活率。在實(shí)驗(yàn)第3d、第7d統(tǒng)計(jì),投喂蠅蛆組和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組仔魚的存活率顯著高于投喂輪蟲組（P＜0.05），且投喂蠅蛆組仔魚存活率最高。

2.2 不同餌料對(duì)仔魚溶菌酶、ACP、AKP活力的影響

由圖4可知，黃顙魚仔魚ACP活力隨著個(gè)體增曾長(zhǎng)逐漸升高，但在實(shí)驗(yàn)前期投喂不同餌料仔魚ACP活力沒(méi)有顯著差異（P＞0.05），直到第 7d時(shí)各組別間ACP活力才出現(xiàn)顯著變化，投喂蠅蛆組ACP活力顯著性大于其余兩組（P＜0.05）。

由圖5可知，黃顙魚仔魚的AKP活力隨著個(gè)體增長(zhǎng)逐漸升高。投喂蠅蛆組仔魚AKP活力從實(shí)驗(yàn)第3d開始顯著高于其他兩組，且一直保持到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，而投喂輪蟲和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組仔魚AKP活力在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均無(wú)顯著差別。

圖3 仔魚不同開口餌料時(shí)的存活率Fig.3 Survival rate of larvae fed various initial food

圖4 仔魚攝食不同開口餌料時(shí)的酸性磷酸酶活性Fig.4 ACP activity of larvae fed various initial food

圖5 仔魚不同開口餌料時(shí)堿性磷酸酶的活性Fig.5 AKP activity of yellow catfish larvae fed various initial food

圖6示三種餌料對(duì)仔魚溶菌酶活性的影響。各實(shí)驗(yàn)組仔魚LZM活力的變化趨勢(shì)類似于AKP活力。同樣，從實(shí)驗(yàn)的第3d開始投喂蠅蛆組仔魚LZM活力顯著高于其他兩組（P＜0.05），且一直保持到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，而投喂輪蟲和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組仔魚LZM活力在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)顯著差別（P＞0.05）。

圖6 仔魚攝食不同開口餌料時(shí)的溶菌酶活性Fig.6 LZM activity of yellow catfish larvae fed various initial food

3 討論

3.1 不同開口餌料對(duì)全雄黃顙魚仔魚生長(zhǎng)性能的影響

近年來(lái)，圍繞著水生動(dòng)物開口時(shí)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的研究逐步深入。吳文化等[13]研究了不同強(qiáng)化餌料對(duì)匙吻鱘Polyodon spathala仔魚生長(zhǎng)和發(fā)育的影響。結(jié)果表明，匙吻鱘仔魚以橈足幼體為開口餌料馴化效果較好，特別是未強(qiáng)化橈足幼體組仔魚的存活率高，魚油強(qiáng)化橈足幼體組仔魚生長(zhǎng)速度較快，而以鹵蟲飼喂效果較差。何國(guó)森等[14]研究了蛋黃、輪蟲、豆?jié){、脫脂奶粉、鰻魚飼料、魚粉和酵母粉等7種餌料對(duì)泥鰍misgurnus anguillicaudatus苗種前期培育生長(zhǎng)和存活的影響。經(jīng)過(guò)21d培育，泥鰍攝食不同餌料時(shí)生長(zhǎng)速度和存活率存在顯著差異（P＜0.05），輪蟲組生長(zhǎng)速度較快，平均日增全長(zhǎng)達(dá)0.31mm，且存活率最高，達(dá)到39.5%；其次是蛋黃組，達(dá)到25.5%；其他組存活率都較低。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃顙魚仔魚攝食蠅蛆勻漿、鹵蟲較投喂輪蟲的生長(zhǎng)速度和存活率顯著上升。這說(shuō)明與輪蟲相比，蠅蛆勻漿和鹵蟲更適合作全雄黃顙魚仔魚的開口餌料。鹵蟲無(wú)節(jié)幼體含有豐富的EPA，可以提高魚蝦幼苗的存活率，作為海水魚蝦開口餌料自20世紀(jì)80年代起已廣泛應(yīng)用[6]。本實(shí)驗(yàn)中，用鹵蟲無(wú)節(jié)幼體投喂淡水黃顙魚，同樣提高了其存活率和生長(zhǎng)性能，說(shuō)明鹵蟲無(wú)節(jié)幼體作為淡水仔稚魚的開口餌料有廣闊的前景。蠅蛆富含蛋白和不飽和脂肪酸，且含有多種生命活動(dòng)所需要的微量元素、抗菌肽、幾丁質(zhì)等多種有價(jià)值的成分[15]，作為動(dòng)物蛋白源在水產(chǎn)養(yǎng)殖中廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)首次使用蠅蛆勻漿作為全雄黃顙魚開口餌料，黃顙魚仔魚存活率及生長(zhǎng)顯著高于輪蟲組，說(shuō)明蠅蛆勻漿在水產(chǎn)動(dòng)物開口餌料中也有一定的潛力。

3.2 不同開口餌料對(duì)全雄黃顙魚仔魚生理指標(biāo)的影響

磷酸酶是一類參與營(yíng)養(yǎng)代謝、礦化作用、腸道轉(zhuǎn)運(yùn)和磷酸化蛋白水解的酶類，具有兩個(gè)重要的功能：其一，參與磷酸化蛋白的胞內(nèi)水解，所產(chǎn)生的無(wú)機(jī)磷用于能量代謝（酸性磷酸酶）；其二，參與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從膜到細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)，即吸收過(guò)程（堿性磷酸酶）。此外磷酸酶還可通過(guò)對(duì)其他消化酶進(jìn)行磷酸化修飾提高其酶活力和消化能力。研究表明，磷酸酶活力快速增加時(shí)預(yù)示著腸道發(fā)育成熟，因此磷酸酶活力作為機(jī)體功能性酶在動(dòng)物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中往往作為指示指標(biāo)，直接反映個(gè)體發(fā)育水平和健康水平[16,17]。對(duì)胚胎發(fā)育的研究發(fā)現(xiàn)，點(diǎn)紋斑竹鯊Chiloscyllium punctatum堿性磷酸酶活力隨著個(gè)體發(fā)育而活力逐漸增強(qiáng)[17]。類似的結(jié)果同樣出現(xiàn)在匙吻鱘仔稚魚中。吉紅等[18]發(fā)現(xiàn)，匙吻鱘仔稚魚腸道酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性隨著發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，分別于受精后30d和40d達(dá)到最大值。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)投喂三種餌料7d后，投喂蠅蛆組的黃顙魚仔魚堿性磷酸酶和酸性磷酸酶活性顯著高于其他兩組，這說(shuō)明蠅蛆勻漿有助于全雄黃顙魚消化系統(tǒng)的發(fā)育。

溶菌酶作為魚類的非特異性免疫物質(zhì)之一，在機(jī)體的炎癥過(guò)程、修復(fù)再生、殺滅細(xì)菌等調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[19,20]。張婷婷等[21]在凡納濱對(duì)蝦Litopenaeus vannamei飼料中分別添加了四種蛋白水解物替代配方中10%的魚粉，配制成五組等氮等脂的飼料。結(jié)果添加魚蛋白水解物的飼料凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)速度以及血清溶菌酶活力顯著高于其他組，這說(shuō)明不同的飼料蛋白源會(huì)直接影響對(duì)蝦的溶菌酶活力。本實(shí)驗(yàn)中，投喂蠅蛆勻漿的全雄黃顙魚仔魚溶菌酶活力顯著高于鹵蟲無(wú)節(jié)幼體組和輪蟲組，說(shuō)明不同餌料同樣可以影響黃顙魚溶菌酶活力水平。黃顙魚仔魚易感染各種細(xì)菌性疾病（腸炎病、水腫?。┰斐纱罅克劳鯷22]，而投喂蠅蛆勻漿可以提高仔魚的溶菌酶活力，提升免疫水平，這將有助于提高黃顙魚仔魚的抗病能力。

綜上所述，認(rèn)為與輪蟲和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體相比，使用蠅蛆勻漿作為全雄黃顙魚開口餌料更有助于黃顙魚仔魚的養(yǎng)殖。

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