副干酪乳桿菌FX-6產(chǎn)抗菌肽粗提物對(duì)荔枝貯藏品質(zhì)的影響

彭 勃，馮孔龍，苗建銀,2,3，陳運(yùn)嬌,3，陳飛龍,4，曹 庸,3,*

荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是亞熱帶常綠植物無(wú)患子科（Sapindaceae）荔枝屬植物，原產(chǎn)于我國(guó)華南亞熱帶地區(qū)，具有廣泛的市場(chǎng)價(jià)值[1]。荔枝果實(shí)在采摘前后都容易遭受病原菌的入侵，主要腐敗菌包括霜疫霉、黑曲霉、黃曲霉、青霉等，此外一些酵母菌和細(xì)菌也會(huì)在果皮表面繁殖并深入果內(nèi)，使果肉變酸、腐爛[2]。另外，荔枝采后的生理代謝旺盛，極易發(fā)生果皮褐變、水分流失和果肉營(yíng)養(yǎng)成分降解等問(wèn)題，十分不耐貯存。目前，荔枝采后病原菌的防治仍然主要依靠化學(xué)藥物[3]，如廣譜低毒的殺菌劑等。然而這類(lèi)殺菌劑容易在果皮上殘留，甚至通過(guò)果皮滲入果肉，對(duì)人體健康造成危害。隨著社會(huì)生活水平的提高，人們對(duì)食品品質(zhì)要求越來(lái)越高，天然防腐劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用受到廣泛關(guān)注。因此，開(kāi)發(fā)更為安全有效的防腐保鮮劑是目前荔枝保鮮技術(shù)的研究熱點(diǎn)。

抗菌肽是一類(lèi)天然來(lái)源的具有抗菌活性的多肽類(lèi)物質(zhì)，對(duì)各種細(xì)菌和真菌均具有抑制作用[4]，但其抗菌機(jī)制有異于傳統(tǒng)抗生素[5-6]，可以有效抑制對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性的細(xì)菌[7]，還具有殺菌速度快、不易被蛋白酶水解等特點(diǎn)[8]。因此，抗菌肽目前已被廣泛應(yīng)用于食品保鮮等領(lǐng)域。

在前期研究中[9-11]，本實(shí)驗(yàn)室從由西藏開(kāi)菲爾中篩選得到了一株新菌株——副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei）FX-6，通過(guò)該菌株發(fā)酵獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，經(jīng)初步分離純化及冷凍干燥后得到了抗菌肽粗提物。經(jīng)分離鑒定，該抗菌肽粗提物中主要作用物質(zhì)包括具有廣譜性、高效性的天然抗菌肽F1、F3以及少量乳酸，對(duì)多種常見(jiàn)的食源性致病菌（包括荔枝采后的主要致病菌：黑曲霉、黑根霉、黃曲霉、灰綠青霉等）均有較強(qiáng)的抑制作用。目前已發(fā)現(xiàn)該抗菌肽粗提物能夠有效抑制牛乳、饅頭、冷鮮肉、鮮蝦等食品在貯藏過(guò)程中的腐敗變質(zhì)[11-13]，具有潛在的應(yīng)用前景。

本研究通過(guò)離體實(shí)驗(yàn)研究抗菌肽粗提物對(duì)荔枝霜疫霉菌（荔枝主要腐敗菌之一）的抑制作用；選取‘桂味’荔枝為研究對(duì)象，通過(guò)檢測(cè)用抗菌肽粗提物處理后的不同貯藏時(shí)期荔枝果實(shí)感官指標(biāo)和理化指標(biāo)，探討常溫條件下抗菌肽粗提物對(duì)荔枝貯藏品質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

抗菌肽粗提物由廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)室自制[13]；‘桂味’荔枝采摘于潮州市果樹(shù)研究所；發(fā)酵菌為副干酪乳桿菌FX-6，從西藏開(kāi)菲爾中分離得到，現(xiàn)保存于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院；供試菌株為荔枝霜疫霉菌（Peronophythora litchi），由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院殺菌劑研究室分離和保存。

施?？诉漉r胺（以下簡(jiǎn)稱(chēng)施?？耍?江門(mén)市大光明農(nóng)化新會(huì)有限公司；馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS） 武漢博士德生物工程有限公司；2,6-二氯靛酚 上海源葉生物科技有限公司；酒石酸鉀鈉、3,5-二硝基水楊酸 天津市大茂化學(xué)試劑廠；氫氧化鈉 上海國(guó)藥集團(tuán)。

1.2 儀器與設(shè)備

PL203型電子天平 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司；UV-1750型紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì) 日本島津公司；DH500BII型電熱恒溫培養(yǎng)箱 天津市泰斯特儀器有限公司；EnSpire2300型多功能酶標(biāo)儀 美國(guó)PerkinElmer公司；DC-P3型全自動(dòng)測(cè)色色差儀 北京市興光測(cè)定儀器有限公司；PHS-3C型酸度計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；手持式折光儀 衢州艾普計(jì)量?jī)x器有限公司；90plus型Zeta電位測(cè)定儀 美國(guó)布魯克海文儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 菌落培養(yǎng)及抑菌率的測(cè)定

參照陳興龍等[14]的方法并修改，分別向培養(yǎng)皿中倒入含有抗菌肽粗提物0.0（對(duì)照）、2.5、5.0、7.5、10.0 mg/mL的PDA培養(yǎng)基20 mL，待培養(yǎng)基凝固后，在培養(yǎng)基中心放置一個(gè)直徑為8 mm的荔枝霜疫霉菌菌餅，使長(zhǎng)有菌絲的一面與培養(yǎng)基相接觸，于25 ℃條件下培養(yǎng)72 h，用十字交叉法測(cè)量不同處理組的菌落直徑，抑菌率、菌落凈生長(zhǎng)直徑計(jì)算分別如式（1）、（2）所示。

1.3.2 抗菌肽粗提物對(duì)采后荔枝保鮮作用的評(píng)價(jià)

1.3.2.1 分組及處理

選取大小均一、顏色均勻、無(wú)病蟲(chóng)害的荔枝果實(shí)，從果蒂處剪斷后隨機(jī)分組。將各組荔枝分別用蒸餾水（對(duì)照組）、0.5 mg/mL施?？怂芤骸?.5 mg/mL和1.0 mg/mL抗菌肽粗提物水溶液浸泡2 min，取出后自然風(fēng)干，用聚乙烯自封袋（36 mm×26 mm，厚0.05 mm）包裝，每袋裝20 個(gè)果實(shí)，密封后于（25.0±0.5）℃、85%～95%相對(duì)濕度條件下貯存，并于貯藏第0、2、4、6、8天對(duì)荔枝的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2.2 荔枝果實(shí)感官指標(biāo)的測(cè)定

好果率的測(cè)定參照李念文等[15]的方法，計(jì)算如式（3）所示。

霉變率計(jì)算如式（4）所示。

褐變指數(shù)的測(cè)定參照Scott等[16]的分級(jí)法，計(jì)算如式（5）所示。

1.3.2.3 荔枝果皮色澤的測(cè)定

色澤的測(cè)定參照McGuire[17]的方法，每組取5 顆荔枝，采用色差儀在每顆荔枝果肩不同部位測(cè)定3 次，以L值表示亮度、C值表示色度，其中a值表示紅度（色澤由紅到綠的變化），b值表示黃度（色澤由黃到藍(lán)的變化）。

1.3.2.4 荔枝果皮水分含量的測(cè)定

每組隨機(jī)取3 份果皮，每份（1.0±0.2）g，用烘箱法測(cè)定水分含量。

1.3.2.5 荔枝果皮相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定

相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定參照楊松夏等[18]的方法。用打孔器從果皮打取直徑0.8 mm的圓片（3 片/果），每組取10 片，加入25 mL蒸餾水浸泡30 min，使用Zeta電位測(cè)定儀測(cè)定電導(dǎo)率C1；再在沸水中煮15 min，迅速冷卻到室溫后測(cè)定電導(dǎo)率C2，相對(duì)電導(dǎo)率計(jì)算如式（6）所示。

1.3.2.6 荔枝果皮pH值的測(cè)定

將荔枝果皮加入液氮研磨成粉，取5 g凍粉用蒸餾水定容至50 mL，靜置提取30 min后過(guò)濾，用pH計(jì)測(cè)量濾液的pH值。

1.3.2.7 荔枝果皮花色苷含量的測(cè)定

參照張昭其等[19]的方法，采用pH值示差法檢測(cè)。

1.3.2.8 荔枝果皮多酚氧化酶和過(guò)氧化物酶活力的測(cè)定

多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）活力的測(cè)定參照王德培等[20]的方法，以每克果皮在415 nm波長(zhǎng)處每分鐘吸光度變化0.001為1 個(gè)酶活力單位，單位為U/g；過(guò)氧化物酶（peroxidase，POD）活力的測(cè)定參照龐學(xué)群等[21]的方法，以每克果皮在470 nm波長(zhǎng)處每分鐘吸光度變化0.01為1 個(gè)酶活力單位，單位為U/g。

1.3.2.9 荔枝果肉營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

將每個(gè)重復(fù)20 個(gè)果的果肉充分勻漿，用4 層紗布過(guò)濾。可溶性固形物（total soluble solid，TSS）含量的測(cè)定參考Cabral等[22]的方法，使用手持式折光儀測(cè)定；VC含量采用2,6-二氯靛酚滴定法測(cè)定；還原糖含量采用3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

運(yùn)用Origin 9.0軟件繪圖，運(yùn)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差法，當(dāng)方差齊時(shí)采用Duncan’s新復(fù)極差法，當(dāng)方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3法。P＜0.05時(shí)表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝霜疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響

圖1 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝霜疫霉菌生長(zhǎng)的影響Fig. 1 Effect of crude antimicrobial peptide extract on the growth of Peronophythora litchi

荔枝霜疫霉菌既是荔枝采前的主要病原菌之一，也是采后荔枝腐敗變質(zhì)的重要因素[23]。由圖1可知，抗菌肽粗提物能夠有效抑制荔枝霜疫霉菌的生長(zhǎng)，并隨其添加物質(zhì)量濃度的增加，抑菌效果顯著增加（P＜0.05），其中含有抗菌肽粗提物10.0 mg/mL的培養(yǎng)基上，72 h的菌落凈生長(zhǎng)直徑僅為9.9 mm，抑菌率達(dá)到63.33%。

2.2 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝好果率的影響

圖2 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝好果率的影響Fig. 2 Effect of crude antimicrobial peptide extract on the percentage of marketable fruits

由圖2可知，荔枝在貯藏過(guò)程中好果率呈下降趨勢(shì)，并且貯藏中后期下降迅速。對(duì)照組的好果率下降速率最快，從第4天起顯著低于施?？撕涂咕拇痔嵛锾幚斫M（P＜0.05）?？咕拇痔嵛锝M的好果率在貯藏初期下降緩慢，其中1.0 mg/mL抗菌肽粗提物組的好果率在第4天時(shí)與施?？私M具有顯著性差異（P＜0.05）。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理組間好果率差異減小，但仍然高于對(duì)照組，說(shuō)明抗菌肽粗提物可有效提高荔枝的好果率，延長(zhǎng)荔枝的貯藏期。

2.3 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝霉變率的影響

由圖3可知，荔枝在貯藏過(guò)程中霉變率呈上升趨勢(shì)，并且隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，霉變率上升速率加快。對(duì)照組的荔枝從貯藏第2天起即發(fā)生霉變現(xiàn)象，并且不斷加劇，在第6天時(shí)已達(dá)到28.33%。而經(jīng)過(guò)施?？撕涂咕拇痔嵛锾幚磉^(guò)的荔枝霉變率始終較低，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），在第8天時(shí)，1.0 mg/mL抗菌肽粗提物組的霉變率僅為18.33%，低于施?？私M，且與對(duì)照組之間具有極顯著差異（P＜0.01）。說(shuō)明抗菌肽粗提物和施保克都能夠有效抑制荔枝果皮表面微生物的生長(zhǎng)繁殖，防止荔枝霉變，但0.5 mg/mL的抗菌肽粗提物效果不及同等質(zhì)量濃度的施?？?，而將質(zhì)量濃度提高至1.0 mg/mL后效果優(yōu)于0.5 mg/mL施?？?。

圖3 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝霉變率的影響Fig. 3 Effect of crude antimicrobial peptide extract on mildewing rate of litchi fruits

2.4 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝褐變指數(shù)的影響

圖4 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝褐變指數(shù)的影響Fig. 4 Effect of crude antimicrobial peptide extract on browning index of litchi pericarp

荔枝果皮的褐變通常是由水分流失、pH值升高、花青素降解、相關(guān)酶的作用和微生物生長(zhǎng)等因素引起的，并且這些因素之間往往存在相互協(xié)同作用[24]。果皮褐變嚴(yán)重影響荔枝的品質(zhì)和商品價(jià)值，是縮短荔枝貯存時(shí)間的主要問(wèn)題之一[25]。由圖4可知，各組荔枝在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中褐變指數(shù)呈持續(xù)上升趨勢(shì)。對(duì)照組的褐變指數(shù)始終高于施?？撕涂咕拇痔嵛锾幚斫M，并且從第4天起開(kāi)始與其他處理組之間呈現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，施?？颂幚斫M的褐變指數(shù)始終高于抗菌肽粗提物處理組，從第6天開(kāi)始與1.0 mg/mL抗菌肽粗提物處理組差異顯著（P＜0.05）。說(shuō)明抗菌肽粗提物能夠顯著抑制荔枝果皮的褐變，并且效果優(yōu)于施?？恕?/p>

2.5 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮色澤的影響

果皮色澤的變化可以客觀地反映出荔枝在貯藏過(guò)程中的褐變情況。L值表示亮度，由圖5A可知，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中荔枝果皮L值呈下降趨勢(shì)。在貯藏初期各組間差異不顯著（P＞0.05），至中期對(duì)照組L值迅速下降，6 d后下降速率有所減慢。施保克處理組的L值在貯藏中后期高于對(duì)照組，在第4天時(shí)與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）?？咕拇痔嵛锝ML值始終高于對(duì)照組，且各處理組在4～6 d均與對(duì)照組具有顯著性差異（P＜0.05），貯藏后期與對(duì)照組逐漸接近，其中1.0 mg/mL的抗菌肽粗提物處理組的L值最大。

圖5 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮L值（A）和C值（B）的影響Fig. 5 Effect of crude antimicrobial peptide extract on L (A) and C value (B) of litchi pericarp

C值表示色度，體現(xiàn)荔枝果皮色澤的飽和度。由圖5B可知，實(shí)驗(yàn)前期各組C值總體變化不大，貯藏至6 d后，抗菌肽粗提物處理組和施?？颂幚斫M開(kāi)始顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但各處理組間差異不顯著（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)后期各組C值均有所下降，對(duì)照組C值仍處于最低水平。綜合L值和C值可知，抗菌肽粗提物能夠顯著抑制果皮亮度和色度的下降，效果優(yōu)于施保克。各處理組L值和C值的變化規(guī)律與果皮褐變指數(shù)具有負(fù)相關(guān)性。

2.6 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮水分含量的影響

圖6 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮水分含量的影響Fig. 6 Effect of crude antimicrobial peptide extract on moisture content of litchi pericarp

荔枝在貯藏過(guò)程中果皮水分會(huì)隨果實(shí)自身的呼吸代謝而不斷流失，當(dāng)果實(shí)受到微生物侵染時(shí)，果皮結(jié)構(gòu)的完整性下降，水分流失增加，而果皮的水分含量與褐變是息息相關(guān)的。由圖6可知，各組荔枝果皮水分含量均呈下降趨勢(shì)。對(duì)照組的果皮水分含量始終處于最低水平，并且在貯藏后期下降速率加快?？咕拇痔嵛锝M和施?？私M的果皮水分含量均高于對(duì)照組，從第6天起與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），其中1.0 mg/mL抗菌肽粗提物處理組水分含量最高，但各處理組之間差異不顯著（P＞0.05）。說(shuō)明抗菌肽粗提物能夠在一定程度上減少荔枝果皮的水分流失，有利于減少褐變，延長(zhǎng)荔枝果實(shí)的貯藏時(shí)間。

2.7 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮相對(duì)電導(dǎo)率的影響

圖7 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮相對(duì)電導(dǎo)率的影響Fig. 7 Effect of crude antimicrobial peptide extract on relative conductivity of litchi pericarp

荔枝采收后，隨細(xì)胞內(nèi)的呼吸代謝作用持續(xù)進(jìn)行，細(xì)胞膜透性增加，導(dǎo)致生物膜系統(tǒng)受損，從而加劇了荔枝果實(shí)的衰老和變質(zhì)。相對(duì)電導(dǎo)率與細(xì)胞膜透性具有一定的正相關(guān)性，可以用相對(duì)電導(dǎo)率來(lái)表征細(xì)胞膜透性，從而反映果皮細(xì)胞衰老和破壞的程度[18]。由圖7可知，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中荔枝果皮相對(duì)電導(dǎo)率呈上升趨勢(shì)。對(duì)照組的果皮相對(duì)電導(dǎo)率高于其他處理組，至第4天顯著高于施保克組和1.0 mg/mL抗菌肽粗提物組（P＜0.05），從第6天起與其他處理組均具有顯著差異（P＜0.05）。1.0 mg/mL抗菌肽粗提物組的相對(duì)電導(dǎo)率最低，但與其他處理組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。說(shuō)明抗菌肽粗提物有利于延緩荔枝果皮相對(duì)電導(dǎo)率的上升，保持果皮的完整性，有利于荔枝的貯藏。

2.8 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮pH值的影響

圖8 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮pH值的影響Fig. 8 Effect of crude antimicrobial peptide extract on pH of litchi pericarp

荔枝在貯藏過(guò)程中，表皮水分的流失會(huì)引起果皮pH值升高，從而導(dǎo)致果皮組織顯微結(jié)構(gòu)被破壞，發(fā)生細(xì)胞破裂、底物溢出等現(xiàn)象，加速了果皮的衰老和褐變；另外，pH值的變化會(huì)改變花色苷結(jié)構(gòu)，當(dāng)pH值高于4.69時(shí)，花色苷就開(kāi)始褪色和變褐[26]。因此抑制果皮pH值的上升對(duì)采后荔枝的保鮮和防止荔枝褐變具有重要的意義，在生產(chǎn)中，采后荔枝就常用浸酸處理來(lái)改善荔枝果皮褐變[27]。

由圖8可知，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中荔枝果皮pH值總體呈上升趨勢(shì)，尤其從第2天后加速上升。對(duì)照組果皮pH值上升最快，至第6天已經(jīng)超過(guò)5.0。施?？颂幚斫M果皮pH值低于對(duì)照組，從第4天起具有顯著性差異（P＜0.05）?？咕拇痔嵛锾幚斫M果皮pH值較低，第2天時(shí)甚至低于初始值，這是由于抗菌肽粗提物中含少量的乳酸，呈天然弱酸性所致。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，抗菌肽粗提物組果皮pH值緩慢上升，但始終低于對(duì)照組和施?？私M，其中1.0 mg/mL抗菌肽粗提物組果皮pH值最低，至第8天時(shí)仍然低于4.9，與對(duì)照組具有極顯著差異（P＜0.01）。結(jié)果表明，抗菌肽粗提物和施?？四苎泳徖笾A藏過(guò)程中果皮pH值上升，其中抗菌肽粗提物的作用更明顯，可延緩荔枝果皮的褐變和衰老。

2.9 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮花色苷含量的影響

圖9 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮花色苷含量的影響Fig. 9 Effect of crude antimicrobial peptide extract on anthocyanin content of litchi pericarp

花色苷是一類(lèi)水溶性黃烷類(lèi)植物色素，是導(dǎo)致荔枝褐變的重要物質(zhì)之一，其結(jié)構(gòu)容易受到pH值和溫度等因素的影響[19]。由圖9可知，常溫下荔枝果皮花色苷含量在貯藏過(guò)程中呈下降趨勢(shì)，并且與荔枝的褐變指數(shù)具有負(fù)相關(guān)性，與張昭其等[19]的研究結(jié)果一致。對(duì)照組果皮花色苷含量下降較快，貯藏4 d后顯著低于其他處理組（P＜0.05）。貯藏過(guò)程中施?？私M和抗菌肽粗提物處理組果皮花色苷含量緩慢降低，并且抗菌肽粗提物處理組花色苷含量高于施?？颂幚斫M，其中1 mg/mL抗菌肽粗提物組下降較慢，從第6天起已顯著高于施?？颂幚斫M（P＜0.05）。結(jié)果表明，抗菌肽粗提物能夠抑制荔枝在貯藏過(guò)程中果皮花色苷含量下降，可能是由于抗菌肽粗提物所具有的廣譜抗菌性及其降低果皮pH值的作用所致。

2.10 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮PPO和POD活力的影響

圖10 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果皮PPO（A）和POD（B）活力的影響Fig. 10 Effect of crude antimicrobial peptide extract on PPO activity (A)and POD activity (B) of litchi pericarp

荔枝在貯藏過(guò)程中，隨著細(xì)胞膜透性的增加，細(xì)胞內(nèi)多種有機(jī)物釋放出來(lái)，成為酶促褐變的底物，其中PPO和POD在褐變過(guò)程中具有重要作用[28-29]。并且PPO和POD能夠共同氧化酚成醌，醌轉(zhuǎn)變成縮合型鞣制，最后形成褐色的聚合體[30]。

由圖10A可知，貯藏期間各組荔枝果皮PPO活力總體呈上升趨勢(shì)，但前期上升較緩慢，中后期上升速率加快。各處理組間荔枝果皮PPO活力在前2 d內(nèi)差異不明顯，4 d后對(duì)照組的果皮PPO活力顯著上升（P＜0.05），且顯著高于其他處理組（P＜0.05），然后上升速率有所減慢，至第8天時(shí)接近其他處理組?？咕拇痔嵛锾幚斫M和施?？颂幚斫M的果皮PPO活力在前4 d內(nèi)較低，4 d后迅速上升，其中0.5 mg/mL抗菌肽粗提物處理組略低于施保克處理組，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；而1.0 mg/mL抗菌肽粗提物處理組在貯藏后期處于最低水平。

由圖10B可知，各處理組荔枝在常溫貯藏過(guò)程中果皮POD活力均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在第6天達(dá)到峰值。對(duì)照組荔枝果皮POD活力在貯藏前期迅速上升，且高于其他處理組。施保克處理組和抗菌肽粗提物處理組荔枝果皮POD活力呈交替上升趨勢(shì)，在第6天時(shí)抗菌肽粗提物處理組果皮POD活力顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），其中1.0 mg/mL抗菌肽粗提物處理組的POD活力最低，比對(duì)照組低8.44 U/g，0.5 mg/mL抗菌肽粗提物處理組次之。

以上結(jié)果表明，抗菌肽粗提物能夠有效延緩荔枝果皮PPO和POD活力上升，且效果優(yōu)于施?？?，對(duì)荔枝褐變及衰老的控制具有積極意義。

2.11 抗菌肽粗提物對(duì)荔枝果肉營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響

荔枝果肉中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不僅使荔枝具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，也賦予其良好的口感。由圖11A可知，貯藏前期各組荔枝TSS含量略微上升，各組間差異不顯著（P＞0.05）。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組TSS含量迅速下降，施保克處理組和抗菌肽粗提物處理組TSS含量下降較緩慢，至第8天顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但各處理組間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

對(duì)于荔枝果肉的還原糖含量（圖11B），各處理組均呈先上升后下降的趨勢(shì)，這是由于荔枝采收后果實(shí)不斷成熟，一部分淀粉轉(zhuǎn)化為還原糖。對(duì)照組的還原糖含量變化范圍最大，在第2天時(shí)上升至24.78%，隨后迅速降低，顯著低于其他處理組（P＜0.05）。施?？颂幚斫M和抗菌肽粗提物處理組的還原糖含量也在第2天時(shí)達(dá)到峰值，隨后不斷降低，但始終高于對(duì)照組。貯藏第8天時(shí)，各處理組間還原糖含量出現(xiàn)較大差異，其中1.0 mg/mL抗菌肽粗提物處理組的還原糖含量最高，比對(duì)照組高2.49%。

由圖11C可知，荔枝在貯藏過(guò)程中果肉VC含量不斷下降，并且在前2 d內(nèi)迅速下降，這與VC容易發(fā)生氧化反應(yīng)有關(guān)；隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，下降趨勢(shì)逐漸趨于平緩。對(duì)照組果肉VC含量下降最快，在貯藏第2天已顯著低于其他處理組（P＜0.05）；施保克處理組和0.5 mg/mL抗菌肽粗提物處理組的VC含量下降速率次之，1.0 mg/mL抗菌肽粗提物處理組VC含量始終高于其他處理組，并且從第6天后與施?？颂幚斫M具有顯著性差異（P＜0.05）。

以上結(jié)果表明，抗菌肽粗提物能夠顯著抑制荔枝果肉在常溫條件下貯藏過(guò)程中TSS、還原糖和VC含量下降，使荔枝果肉保持較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，且效果優(yōu)于0.5 mg/mL施?？恕?/p>

3 結(jié) 論

本研究表明，抗菌肽粗提物對(duì)荔枝霜疫霉菌具有顯著的抑制作用。在荔枝采后的常溫貯藏過(guò)程中，抗菌肽粗提物能夠顯著抑制荔枝的霉變和褐變的發(fā)生，抑制荔枝果皮水分含量和花色苷含量下降，有效延緩荔枝果皮pH值、相對(duì)電導(dǎo)率、PPO和POD活力上升，同時(shí)抑制荔枝果肉的TSS、還原糖和VC含量的下降。其機(jī)理可能是抗菌肽粗提物中含有天然抗菌肽F1和F3，能夠抑制荔枝在生長(zhǎng)和采摘過(guò)程中感染的多種細(xì)菌及真菌的生長(zhǎng)繁殖，從而維持果皮結(jié)構(gòu)的完整性，減少酶促反應(yīng)底物的泄露，延緩PPO和POD活力上升；同時(shí)抗菌肽粗提物中含有少量乳酸，呈天然弱酸性，有利于花色苷保持其鮮艷的色澤，并且抑制PPO和POD活力的升高，對(duì)控制荔枝褐變具有積極作用?？傊咕拇痔嵛锬軌蝻@著改善荔枝果實(shí)在貯藏過(guò)程中的品質(zhì)，其中0.5 mg/mL抗菌肽粗提物效果優(yōu)于同等質(zhì)量濃度的施?？?，1.0 mg/mL抗菌肽粗提物對(duì)荔枝保鮮效果更佳，能將‘桂味’荔枝常溫下的貯藏期延長(zhǎng)1～2 d。

參考文獻(xiàn)：

[1] LIANG D W, LIN F Y, YANG G M, et al. Advantages of immersion freezing for quality preservation of litchi fruit during frozen storage[J].LWT-Food Science and Technology, 2015, 60(2): 948-956. DOI:10.1016/j.lwt.2014.10.034.

[2] 蔡學(xué)清. 荔枝采后主要病原菌的特性及內(nèi)生細(xì)菌對(duì)其防治保鮮研究[D]. 福州: 福建農(nóng)林大學(xué), 2010: 3-4.

[3] 彭埃天, 凌金鋒, 習(xí)平根, 等. 我國(guó)荔枝產(chǎn)區(qū)殺菌劑的使用現(xiàn)狀及建議[J]. 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè), 2011(5): 64-67. DOI:10.3969/j.issn.1673-0658.2011.05.024.

[4] AFSHAR M, GALLO R L. Innate immune defense system of the skin[J].Veterinary Dermatology, 2013, 24(1): 32-39. DOI:10.1111/j.1365-3164.2012.01082.x.

[5] DERDE M, LECHEVALIER V, GUERIN-DUBIARD C, et al. Hen egg white lysozyme permeabilizes Escherichia coli outer and inner membranes[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013,61(41): 9922-9929. DOI:10.1021/jf4029199.

[6] SHARMA P C, JAIN S, YADAV G, et al. Natural preservatives: current insights and applications[J]. Der Pharmacia Sinica, 2010, 1(3): 95-108.

[7] MOLLOY E M, FIELD D, O’CONNOR P M, et al. Saturation mutagenesis of lysine 12 leads to the identification of derivatives of nisin a with enhanced antimicrobial activity[J]. PLoS ONE, 2013, 8(3): e58530.DOI:10.1371/journal.pone.0058530.

[8] DE ZOTTI M, BIONDI B, PARK Y, et al. Antimicrobial lipopeptaibol trichogin GA IV: role of the three Aib residues on conformation and bioactivity[J]. Amino Acids, 2012, 43(4): 1761-1777. DOI:10.1007/s00726-012-1261-7.

[9] MIAO J Y, GUO H X, OU Y W, et al. Purification and characterization of bacteriocin F1, a novel bacteriocin produced by Lactobacillus paracasei subsp. tolerans FX-6 from Tibetan kefir, a traditional fermented milk from Tibet, China[J]. Food Control, 2014, 42: 48-53. DOI:10.1016/j.foodcont.2014.01.041.

[10] MIAO J Y, GUO H X, CHEN F L, et al. Antibacterial effects of a cellpenetrating peptide isolated from kefir[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2016, 64(16): 3234-3242. DOI:10.1021/acs.jafc.6b00730.

[11] 苗建銀, 郭浩賢, 符翠歡, 等. 西藏開(kāi)菲爾發(fā)酵提取物對(duì)牛奶和饅頭防腐作用的研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2013, 29(7): 1509-1513.DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2013.07.047.

[12] 陳飛龍, 苗建銀, 廖瑋靈, 等. 副干酪乳桿菌堅(jiān)韌亞種FX-6發(fā)酵提取物對(duì)鮮蝦的保鮮評(píng)價(jià)[J]. 食品工業(yè)科技, 2016, 37(4): 351-355.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2016.04.062.

[13] MIAO J, PENG W, LIU G, et al. Biopreservative effect of the natural antimicrobial substance from Lactobacillus paracasei subsp. Tolerans FX-6 on fresh pork during chilled storage[J]. Food Control, 2015, 56: 53-56. DOI:10.1016/j.foodcont.2015.03.013.

[14] 陳興龍, 潘汝謙, 蓋云鵬, 等. 31 種植物甲醇提取物對(duì)荔枝霜疫霉菌和炭疽病菌的抑菌活性測(cè)定[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 39(3): 1-3.DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2012.03.045.

[15] 李念文, 陳麗君, 徐樺, 等. 不同保鮮劑對(duì)冷藏條件下荔枝品質(zhì)保鮮效果的研究[J]. 上海農(nóng)業(yè)科技, 2015(5): 80; 81-82. DOI:10.3969/j.issn.1001-0106.2015.05.048.

[16] SCOTT K J, BROWN B I, CHAPLIN G R, et al. The control of rotting and browning of litchi fruit by hot benomyl and plastic film[J]. Scientia Horticulturae,1982, 16(3): 253-262. DOI:10.1016/0304-4238(82)90073-5.

[17] MCGUIRE R G. Reporting of objective color measurements[J].Hortscience, 1992, 27(12): 1254-1255.

[18] 楊松夏, 呂恩利, 陸華忠, 等. 不同保鮮運(yùn)輸方式對(duì)荔枝果實(shí)品質(zhì)的影響[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào), 2014, 30(10): 225-232. DOI:10.3969/j.issn.1002-6819.2014.10.028.

[19] 張昭其, 龐學(xué)群, 段學(xué)武, 等. 荔枝果皮褐變過(guò)程中花色素苷含量的變化及測(cè)定[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2002(1): 16-19. DOI:10.3969/j.issn.1001-411X.2002.01.005.

[20] 王德培, 彭志英. 荔枝護(hù)色干制的工藝研究[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào),2005(11): 158-162. DOI:10.3321/j.issn:1002-6819.2005.11.034.

[21] 龐學(xué)群, 段學(xué)武, 張昭其, 等. 荔枝果皮過(guò)氧化物酶的純化及部分酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào), 2004(5): 449-454. DOI:10.3969/j.issn.1005-3395.2004.05.011.

[22] CABRAL T A, DE MORAIS CARDOSO L, PINHEIRO-SANT’ANA H M. Chemical composition, vitamins and minerals of a new cultivar of lychee (Litchi chinensis cv. Tailandes) grown in Brazil[J]. Fruits, 2014,69(6): 425-434. DOI:10.1051/fruits/2014031.

[23] 戚佩坤, 潘雪萍, 劉任. 荔枝霜疫病的研究I. 病原菌的鑒定及其侵染過(guò)程[J]. 植物病理學(xué)報(bào), 1984(2): 113-119. DOI:10.13926/j.cnki.apps.1984.02.009.

[24] MANGARAJ S, GOSWAMI T K, GIRI S K, et al. Permselective MA packaging of litchi (cv. Shahi) for preserving quality and extension of shelf-life[J]. Postharvest Biology and Technology, 2012, 71: 1-12.DOI:10.1016/j.postharvbio.2012.04.007.

[25] SOMBOONKAEW N, TERRY L A. Influence of temperature and packaging on physiological and chemical profiles of imported litchi fruit[J]. Food Research International, 2011, 44(7): 1962-1969.DOI:10.1016/j.foodres.2010.04.035.

[26] 龐學(xué)群, 張昭其, 段學(xué)武, 等. pH值和溫度對(duì)荔枝果皮花色素苷穩(wěn)定性的影響[J]. 園藝學(xué)報(bào), 2001(1): 25-30. DOI:10.3321/j.issn:0513-353X.2001.01.005.

[27] NEOG M, SAIKIA L. Control of post-harvest pericarp browning of litchi(Litchi chinensis Sonn)[J]. Journal of Food Science and Technology,2010, 47(1): 100-104. DOI:10.1007/s13197-010-0001-9.

[28] ZAUBERMAN G, RONEN R, AKERMAN M, et al. Post-harvest retention of the red colour of litchi fruit pericarp[J]. Scientia Horticulturae, 1991, 47(1/2): 89-97. DOI:10.1016/0304-4238(91)90030-3.

[29] ZHANG D, QUANTICK P C. Effects of chitosan coating on enzymatic browning and decay during postharvest storage of litchi (Litchi chinensis Sonn.) fruit[J]. Postharvest Biology and Technology, 1997, 12(2): 195-202. DOI:10.1016/s0925-5214(97)00057-4.

[30] 張永麗. 荔枝果皮褐變過(guò)程中POD活性變化及其基因表達(dá)分析[D].?？? 華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué), 2007: 1-15.