IL-1β、TLR3、NF-κB在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及相關(guān)性研究*

謝 偉

武漢市東西湖區(qū)人民醫(yī)院(武漢430040)

宮頸癌是臨床常見(jiàn)生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且逐漸年輕化，是導(dǎo)致女性死亡的重要原因[1]。宮頸癌發(fā)生與多種因素有關(guān)，其中持續(xù)性人類(lèi)乳頭狀瘤病毒(Papillomavirus，HPV)感染是致癌的重要因素，且宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)的發(fā)生率隨HPV感染的增加而不斷升高，治療不及時(shí)可形成浸潤(rùn)癌，最終達(dá)到宮頸癌發(fā)生，因而早期診斷和治療宮頸癌具有重要意義[2]。HPV感染可降低機(jī)體免疫系統(tǒng)，并產(chǎn)生大量炎癥因子，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)，從而造成組織損傷，其與白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)表達(dá)存在密切聯(lián)系。核轉(zhuǎn)錄因子-κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，并參與細(xì)胞凋亡，其具有免疫激活功能，在炎癥反應(yīng)中起著重要作用。Toll 樣受體(Toll-like receptors，TLRs)能夠有效調(diào)控免疫反應(yīng)，并能維持組織穩(wěn)定性，其與炎癥反應(yīng)、宮頸癌發(fā)展均存在密切聯(lián)系[3]。本研究通過(guò)探討不同宮頸組織中IL-1β、TLR3、NF-κB的表達(dá)以及相關(guān)性，旨在為宮頸癌治療方案選擇提供參考依據(jù)。

資料與方法

1 一般資料 選取2015年10月至2016年10月我院保留的106例婦科手術(shù)標(biāo)本作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合宮頸癌或CIN診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理組織檢查確診；②年齡35～60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其它炎癥疾病；②術(shù)前行放射治療或化療者。宮頸癌標(biāo)準(zhǔn)分期參照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。入選的106例患者中，宮頸癌、CIN、正常宮頸分別為45例、35例、26例，其中正常宮頸組織來(lái)源于因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)且術(shù)后病理證實(shí)為慢性宮頸炎的患者。宮頸癌分期：Ⅰ期、Ⅱ期分別為31例、14例；分化程度：低-中分化、高分化分別為29例、16例；淋巴結(jié)：轉(zhuǎn)移、未轉(zhuǎn)移分別為13例、32例。手術(shù)標(biāo)本相關(guān)病理資料保存完整，且由專(zhuān)業(yè)醫(yī)師于顯微鏡下對(duì)標(biāo)本切片進(jìn)行觀察和確診。

2 檢測(cè)方法 使用甲醛溶液對(duì)標(biāo)本組織進(jìn)行固定，采用石蠟包埋后將其連續(xù)切片備用，切片時(shí)盡量避開(kāi)壞死區(qū)，厚度以4 μm為宜。將切片置于載玻片上并烘干，采用HE染色進(jìn)行核實(shí)診斷。分別采用二甲苯、遞減梯度酒精對(duì)切片實(shí)施脫蠟和脫水處理，采用高壓熱修復(fù)后進(jìn)行PBS沖洗。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)IL-1β、TLR3NF-κB表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，其中兔抗人IL-1β、TLR3、NF-κB多克隆抗體均由上海優(yōu)維寧生物科技有限公司提供，免疫組織化學(xué)法試劑盒則由北京中杉金橋提供。分別將已知陽(yáng)性宮頸癌組織、PBS緩沖液代替一抗作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。胞質(zhì)或胞核內(nèi)均存在IL-1β、TLR3、NF-κB表達(dá)，其表達(dá)呈棕黃色顆粒。隨機(jī)觀察切片，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度、陽(yáng)性細(xì)胞在同類(lèi)細(xì)胞中的百分比對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合判定。其中染色強(qiáng)度：無(wú)著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0分、1分、2分、3分。陽(yáng)性細(xì)胞在同類(lèi)細(xì)胞中所占百分比：陽(yáng)性細(xì)胞無(wú)表達(dá)或≤5%、6%～25%、26%～75%、>75%分別記為0分、1分、2分、3分、4分。將染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞在同類(lèi)細(xì)胞中所占百分比分值相乘，0分、1～4分、5～8分、9～12分分別記為-、+、、，其中-或+均視為陰性，其余視為陽(yáng)性。

結(jié) 果

1 宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β、TLR3、NF-κB表達(dá) 見(jiàn)表1。宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β陽(yáng)性表達(dá)率分別為91.11%、71.43%、3.85%；TLR3陽(yáng)性表達(dá)率分別為26.67%、74.29%、84.62%；NF-kB陽(yáng)性表達(dá)率分別為93.33%、62.86%、3.85%。宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β、TLR3、NF-κB表達(dá)兩兩比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2 宮頸癌組織中IL-1β、TLR3、NF-κB表達(dá)與病理特征關(guān)系 見(jiàn)表2。IL-1β、NF-κB表達(dá)與病理分級(jí)、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，TLR3與腫瘤分期相關(guān)(P<0.05)。

表1 宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β、TLR3、NF-κB表達(dá)

表2 宮頸癌組織中IL-1β、TLR3、NF-κB表達(dá)與病理特征關(guān)系

討 論

TLRs受體在健康細(xì)胞中具有穩(wěn)定組織、調(diào)節(jié)生存以及參與細(xì)胞凋亡等多種功能，TLRs-NF-κB信號(hào)通路不僅參與機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)，同時(shí)參與癌變[4]。TLR3能夠有效介導(dǎo)病原體，從而促使機(jī)體發(fā)生免疫防衛(wèi)，有資料顯示[5]，TLR3處于高表達(dá)時(shí)能夠有效清除腫瘤細(xì)胞。推測(cè)其作用機(jī)制為由于宮頸發(fā)生病變，促使TLR3表達(dá)增加，通過(guò)激活髓系分化因子88進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤壞死因子、IL-1β等炎癥因子和Ⅰ型干擾素，通過(guò)激活免疫細(xì)胞，對(duì)病毒感染進(jìn)行殺傷，并轉(zhuǎn)化細(xì)胞。當(dāng)TLR3無(wú)法大量表達(dá)或水平異常時(shí)，導(dǎo)致其不能有效激活免疫應(yīng)答，進(jìn)而無(wú)法清除異常和病毒感染細(xì)胞，最終導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生病變[6]。此外TLR3能夠激活NF-κB，在細(xì)胞凋亡、炎性反應(yīng)中均發(fā)揮重要作用，并能為癌細(xì)胞逃避免疫應(yīng)答提供便利。

NF-κB存在于細(xì)胞胞漿中，當(dāng)其結(jié)合位點(diǎn)受到活化因素刺激時(shí)才能被激活。作為核轉(zhuǎn)錄因子，其介導(dǎo)多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)。此外NF-κB與多種基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)，并參與宮頸癌發(fā)展。有資料顯示[7]，在宮頸癌組織中，NF-κB呈活化表達(dá)狀態(tài)?；钚訬F-κB過(guò)度表達(dá)能夠加速癌細(xì)胞分化和增殖，抑制癌細(xì)胞凋亡并促使其向惡性轉(zhuǎn)化，通過(guò)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移逐漸形成腫瘤血管。IL-1β屬于淋巴細(xì)胞活化因子，同時(shí)在NF-κB信號(hào)通路中具有重要作用，其不僅參與炎癥反應(yīng)，同時(shí)參與抗腫瘤過(guò)程，能夠有效調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫激活。作為NF-κB的下游因子，其表達(dá)缺失可改變炎癥病理環(huán)境，在抗感染過(guò)程中缺失對(duì)免疫的監(jiān)視，同時(shí)導(dǎo)致炎癥慢性化。

目前臨床普遍認(rèn)為宮頸癌發(fā)生的病理基礎(chǔ)是持續(xù)性HPV感染，而病毒逃逸可促使HPV病毒大量復(fù)制，TLR3處于低表達(dá)狀態(tài)時(shí)，可造成HPV損傷，為持續(xù)感染提供便利，同時(shí)促使宮頸癌發(fā)展。有研究表明[8]，正常宮頸、CIN、宮頸癌中TLR3呈逐漸降低表達(dá)狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示：在宮頸癌、CIN、正常宮頸組織中TLR3表達(dá)強(qiáng)度呈上升趨勢(shì)，且與腫瘤分期具有相關(guān)性，與上述研究結(jié)果基本一致。有資料顯示[9]，在HPV感染的女性中，TLR3表達(dá)增加，則病毒清除更為明顯。另有研究表明[10]，在正常宮頸、CIN、宮頸癌中TLR3表達(dá)無(wú)明顯差異，與本研究結(jié)果不一致，推測(cè)與TLR3檢測(cè)方法、研究樣本數(shù)量等因素有關(guān)。有資料顯示[11]，在宮頸癌和CIN發(fā)展中NF-κB異常表達(dá)起著重要作用。另有研究表明[12]，在宮頸癌和CIN中NF-κB表達(dá)高于正常宮頸。本研究結(jié)果顯示：在宮頸癌、CIN、正常宮頸組織中NF-κB表達(dá)呈逐漸降低趨勢(shì)，且與腫瘤分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切相關(guān)，與上述研究結(jié)果基本一致，提示NF-κB與宮頸癌發(fā)生聯(lián)系密切，且在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程發(fā)揮作用。有研究表明[13]，宮頸癌發(fā)生與IL-1β存在密切聯(lián)系。另有研究表明[14]，正常宮頸組織中IL-1β表達(dá)低于宮頸癌和CIN組織。本研究結(jié)果顯示：宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β表達(dá)呈下降趨勢(shì)，且與腫瘤分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系，與上述研究結(jié)果基本一致，提示癌細(xì)胞通過(guò)分泌IL-1β能夠有效激活炎癥反應(yīng)，從而增強(qiáng)癌細(xì)胞侵襲能力，并加重?fù)p傷機(jī)體免疫系統(tǒng)。

綜上所述，在宮頸癌組織中，NF-κB、IL-1β均處于高表達(dá)狀態(tài)，與腫瘤分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，TLR3處于低表達(dá)狀態(tài)，與腫瘤分期存在相關(guān)性，研究IL-1β、TLR3、NF-κB在宮頸癌和CIN中表達(dá)，能夠?yàn)榕R床治療提供參考依據(jù)。

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