動物內臟塑化標本的制作技術

林建和 肖雍琴 陳張華 李福泉 張娟

摘 要： 以動物內臟為材料，研究塑化標本制作中固定、脫水脫脂、真空滲透塑化、定型整形環(huán)節(jié)工藝技術要求，經(jīng)過試驗，優(yōu)化參數(shù)及工藝要求，塑化標本制作方法簡便、設備簡易，具有推廣利用價值。

關鍵詞： 動物內臟；塑化標本

塑化標本制作是將試驗材料利用滲透塑化技術，經(jīng)過固定、脫水脫脂、真空浸漬塑化和定型處理等工序后，制作成方便用于教學或其它試驗用途的一種標本制作方法。長期以來。解剖標本的制作均以福爾馬林等有害藥物進行浸泡、固定和保存。福爾馬林作為保存液會慢慢揮發(fā)而致使?jié)舛冉档?，并且福爾馬林液在保存中往往形成多聚甲醛，使浸液變濁，影響觀察[1-2]。福爾馬林浸泡式標本強烈的刺激性氣味和毒性，難免會對廣大師生身體健康造成傷害。生物塑化標本相對于傳統(tǒng)標本來說，更具安全性，更有利于教學和研究。目前塑化標本的制作工藝復雜，設備多，成本也因此較高。本文旨在探索在低成本的情況下，普通生物實驗室就能制作小型塑化標本的方法。

1 主要設備及材料

1.1主要設備

真空干燥箱，恒溫干燥箱，玻璃缸，電吹風，比重計。

1.2主要試劑

甲醛（HCHO），乙醇（CH3CH2OH），丙酮（CH3COCH3），聚乙二醇HO（CH2CH2O）nH（PEG）。

1.3材料

經(jīng)5%～10%甲醛溶液固定后的內臟標本。

2 塑化內臟標本制備

2.1內臟標本材料處理

用于塑化的內臟標本按常規(guī)解剖進行處理。經(jīng)福爾馬林固定后的肺，帶氣管或支氣管，肺門結構盡量保留完整。心臟應清除心腔內的凝血污塊，必須保留主動脈、肺動脈、前后腔靜脈和肺靜脈，并進行開窗處理，以便于觀察心臟結構。腸道類空腔器官，應盡量清除其內容物。

2.2漂白

經(jīng)丙酮脫水脫脂后的標本與空氣接觸時間略長，顏色會加深，應進行漂白處理。將內臟標本直接放入1%～2%的過氧化氫溶液中浸泡一周。

2.3脫水

脫水前將內臟標本放在流動水源處長時間連續(xù)清洗，動作要緩和輕柔，48小時后開始脫水。把內臟標本放入80%、95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ的乙醇溶液進行梯度脫水，每一種乙醇溶液各浸泡一周，乙醇量應淹沒標本。

2.4脫脂

標本脫水后，還應進行脫脂，乙醇只有脫水作用，丙酮有脫水和脫脂的作用。在內臟標本經(jīng)95%的乙醇溶液脫水后，可用100%丙酮進行脫水脫脂，在室溫下進行10天脫脂。

2.5真空塑化

塑化劑采用聚乙二醇，是一種溫和低毒無刺激性的高分子化合物，能完全溶于水，具有較好的穩(wěn)定性。根據(jù)聚乙二醇分子量大小不同，其物理形態(tài)可由白色粘稠液（分子量200～700）到蠟質半固體（分子量1000～2000）直到堅硬的蠟質固體（分子量3000～20000）。

經(jīng)脫水脫脂后的內臟標本，即刻放入分子量為600的聚乙二醇溶液中完全浸沒，可用鐵塊下壓標本于塑化劑內，溫度保持在25℃～30℃，塑化全過程均在真空干燥器和間歇負壓下完成。浸漬開始時，將標本放入裝有塑化劑的塑化容器內，這時即可見塑化劑液面有許多氣泡冒出。由于氣泡的數(shù)量較多，此時不宜抽真空，可放置12～24h后再抽真空[4]。第一天壓力控制從70KPa逐漸調至50KPa ，第二天的壓力從50KPa 逐漸調至40KPa；第三天的壓力從 40KPa調至30KPa，至第五天逐漸調至10KPa，后面保持10KPa壓力不變。此時標本內部基本上已被塑化劑填充，每次調節(jié)進氣閥，均須仔細觀察塑化劑液面氣泡的產生量。在整個塑化過程中，每半分鐘氣泡數(shù)控制10～20個，后期每半分鐘氣泡數(shù)須在5個以內[4]，直到無氣泡產生，即完成了整個真空塑化過程。

2.6標本定型整形

將分子量為6000的聚乙二醇放入59℃的恒溫干燥箱內，待其完全溶化后，將標本轉入并將其完全浸沒。10～12小時后，取出標本，電吹風加熱，同時用塑料泡沫吸取表面多余的聚乙二醇，待其未冷卻時，即時定型。經(jīng)過塑化處理后的標本，內臟部分遇到收縮時，可用石蠟填充。具體操作是：將塑化后的標本放入60℃的保溫箱，注射器抽取溶化的石蠟（要求60℃以上溶化的石蠟），注入標本收縮的部位以填充飽滿即可[1]。

3 結果

由以上論述可知，塑化的實質是動物組織內的液體通過真空滲透過程被活性塑料置換出來，使動物細胞及組織器官、整體形態(tài)仍舊保持其生前的狀態(tài)。用本方法塑化所得到的內臟標本成型好，較柔韌，具有一定彈性。外觀光亮，色澤、質地都較好地達到了教學的要求。沒有福爾馬林的刺激氣味，對人體無危害，能夠取代傳統(tǒng)福爾馬林浸泡保存標本的方法。由于標本經(jīng)脫水脫脂處理，所以可以長期保存。

4 討論

4.1 乙醇和丙酮脫水脫脂的比較

乙醇價格低廉，容易購買和管理，脫水力強，同時可以使組織硬化，但其脫脂力較弱；丙酮價格較乙醇昂貴，脫水和脫脂力都較強[3]。在采用乙醇脫水的同時，采用結合丙酮脫脂性能的使用，節(jié)約了制作成本。

4.2固定的效果

取材后的內臟標本在5%～10%福爾馬林溶液中固定時間不能太長.常采用短期固定（10h～48h），并保存于福爾馬林溶液中，短期固定可以很好地保存標本的原有色澤，最好是采用新鮮的標本固定，能防止標本色澤發(fā)黑發(fā)暗，組織發(fā)硬變脆.而在低溫下比在室溫下對保存標本的色澤更有利，其固定的效果還取決于甲醛的濃度。

4.3重視塑化各環(huán)節(jié)操作

在塑化過程的任何環(huán)節(jié).如標本在取材后長期暴露在空氣中或沒有浸泡在乙醇或丙酮的液面以下，或者標本脫水不徹底等都可造成組織皺縮.如果脫水時間過長則能造成組織器官脆弱，容易改變器官的形狀和顏色[3]。

4.4本方法與傳統(tǒng)塑化標本制作方法比較

采用乙醇常溫脫水，丙酮常溫脫脂，設備簡易，方法簡便，易于操作，成本低，在短時間內可制備出品質較好的塑化標本。極大程度上降低了塑化標本制作的設備要求，利于塑化技術的推廣和普及。

5 小結

1）塑化標本的制作工藝流程為：初次解剖固定——第二次解剖——脫水脫脂——真空滲透塑化——定型整形。

2）真空滲透塑化是塑化技術的中心環(huán)節(jié)，在此環(huán)節(jié)的操作過程中，要做好壓力的正確控制與塑化劑液面氣泡的觀察。

3）利用塑化技術可以除去標本水分并且使動物的組織器官保持其生存前的狀態(tài)，標本不僅干燥、無味，還可以用手觸摸及抓放。塑化標本從外觀、色澤、彈性、標本質地和氣味以及對人體的危害性看，能滿足動物解剖實驗室教學和科研要求。

參考文獻

[1] 唐安科.一種簡易塑化動物標本的制作方法[J].生物學通報，2006，41（9）：56-57.

[2] 白春黎.動物肌肉組織器官塑化標本制作技術[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2007，26（1）：125-126.

[3] 喬治良，王澤恩，等.實驗性常溫下制備塑化標本技術[J].解剖學雜志，2009，32（4）：558-560.

[4] 譚立文，張紹祥.生物塑化技術中真空浸漬的改進[J].CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ANATOMY，2001，19（4）：380.