探討分析和比較不同流感病毒檢驗方法的實際應(yīng)用效果

王順東 王開宇 羅小莉 林忠荔

（達州市疾病預(yù)防控制中心 四川 達州635002）

流行性感冒俗稱流感，是由于流感病毒而引發(fā)的急性上呼吸道感染疾病，其傳染性較強，且具有較高的發(fā)病率，極易感染免疫力較低的兒童、老年人以及免疫系統(tǒng)疾病患者，對其身體健康及生活質(zhì)量造成嚴重的影響。流感疾病與其它呼吸道感染疾病的臨床癥狀相似，但其診斷和治療方法卻有很大差異，諸多的醫(yī)學(xué)研究與臨床實踐表明對流感患者及時診斷并予以早期治療的效果更好。因而，及早診斷及時治療對于防控流感，保證患者健康至關(guān)重要[1]。臨床上診斷流感病毒的方法很多，包括血清學(xué)檢測、核酸檢測、免疫熒光檢測、病毒培養(yǎng)以及抗原快速檢測等。膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實時熒光RT-PCR是臨床上檢測流感病毒比較常用的兩種方法[2]。此次研究以我中心所監(jiān)測的160例急性呼吸道感染患者標本作為研究對象，分別運用膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實時熒光RT-PCR兩種檢測方法對所有患者實施流感病毒檢測，然后觀察并比較兩種方法的檢測結(jié)果。現(xiàn)將整個研究報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我中心在2016年6月—2017年8月期間所監(jiān)測的160例急性呼吸道感染患者標本作為研究對象，所有患者均符合急性上呼吸道感染相關(guān)診斷標準，臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱，且發(fā)熱溫度在38℃以上，并根據(jù)患者自身病情差異，伴有不同程度的咳嗽及咽喉痛癢等癥狀。160例患者中男性88例，女性72例，患者年齡分布在14～76歲，平均年齡為（54.2±1.6）歲。

1.2 方法

（1）實驗材料：RNA提取試劑、流感病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）、流感病毒抗原檢測試劑（膠體金法）以及博日FQA-48A型實時熒光定量PCR擴增儀。

（2）樣本提取

將壓舌板抵住病人舌根部，并在患者咽部同時探入兩根咽拭子，然后取下患者扁桃體隱窩位置的上皮細胞組織。將其中的一根咽拭子置于病毒專用采樣管（北京友康），而另一根咽拭子置于膠體金檢測所對應(yīng)的裂解液中。

（3）GICA檢測

對細胞裂解液予以充分的攪拌，以吸管吸取3～4滴液體放在檢測卡對應(yīng)加樣孔中，等15min以后觀察并分析檢測的結(jié)果。如果檢測區(qū)與對照區(qū)均有一條紅色帶，此時檢測結(jié)果表示為陽性；如果檢測區(qū)沒有紅色帶，而只有對照區(qū)有一條紅色帶，此時檢測結(jié)果表示為陰性。

（4）RT-PCR檢測

根據(jù)《全國流感監(jiān)測方案（2010年版）》中推薦的實時熒光RT-PCR對流感病毒的定性檢測。運用QIAcubeHT型自動核酸提取儀以及與其相配套的試劑對病毒核酸進行提取，相應(yīng)檢測試劑是由上海之江所提供的甲型流感病毒核酸檢測試劑盒，并用博日FQA-48A型實時熒光定量PCR擴增儀進行檢測。

1.3 觀察指標

觀察并統(tǒng)計兩種檢測方法對患者檢測的陽性率。

1.4 統(tǒng)計分析方法

運用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對此次研究所觀察的數(shù)據(jù)資料予以統(tǒng)計分析，其中計數(shù)資料以百分比（%）來表示，并對其施以χ2表示，若結(jié)果有P＜0.05，則表示組間比較差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

RT-PCR法對160例患者進行檢測，結(jié)果共檢測出陽性患者118例，陽性率為73.75%；GICA法對160例患者進行檢測，結(jié)果共檢出陽性患者127例，陽性率為79.38%，通過對比發(fā)現(xiàn)兩種方法其檢測結(jié)果一致的患者數(shù)共107例，統(tǒng)計學(xué)分析表明兩種方法的檢測結(jié)果差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。具體詳見表。

表 兩種檢測方法檢測結(jié)果比較

3.討論

流感已成為全球傳染性疾病，其傳染性極強，且具有較高的發(fā)病率，極易感染免疫力較低的兒童、老年人以及免疫系統(tǒng)疾病患者，患者臨床癥狀主要表現(xiàn)為突然發(fā)熱，體溫多在38～40℃，且持續(xù)時間較長，同時會出現(xiàn)咳嗽、咽喉腫痛、頭痛、畏寒、肌肉酸痛以及全身不適等癥狀，對人們的生活質(zhì)量造成嚴重的影響[3]。流感的臨床表現(xiàn)并不具有特異性，與其它呼吸道感染疾病的臨床癥狀相似，但其診斷和治療方法卻有很大的差異，諸多的醫(yī)學(xué)研究與臨床實踐表明對流感患者及時診斷并予以早期治療的效果更好。因而，及早診斷及時治療對于防控流感，保證患者健康至關(guān)重要。

目前，臨床上對流感病毒進行檢測的方法較多，如血清學(xué)檢測、核酸檢測、免疫熒光檢測、病毒培養(yǎng)以及抗原快速檢測等。咽拭子診斷是最原始的實驗室診斷方式，接種雞胚、狗腎臟傳代細胞分離病毒，并定型判斷，但這種檢測方式費時費力，而且流感病毒治療藥物的最佳時期為2天內(nèi)，尤其是在暴發(fā)疫情的處理中，診斷的及時性極為重要。隨著醫(yī)療技術(shù)和檢驗技術(shù)的發(fā)展，膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實時熒光RT-PCR是臨床上檢測流感病毒比較常用的兩種方法。病毒培養(yǎng)對于病毒檢測具有較高的準確率，其需要分別實施病毒分型以及抗原變異分析，因而檢測周期較長，且操作相當繁雜，對檢測人員的要求比較嚴格，因而不適宜對爆發(fā)式疫情實施快速的檢測和診斷。RT-PCR檢測法在疫情監(jiān)測和臨床上比較常用，其具有諸多優(yōu)點，從標本處理開始只需3～4小時可完成檢測，在流感等病毒性傳染病快速確診中可快速確診，是實驗室快速診斷流感等病毒的重要手段，但其檢測需要大型的專用設(shè)備和儀器，且對實驗室的潔凈度要求比較嚴格，這將大大增加檢測成本。GICA檢測是以膠體金作為示蹤物，從而對抗原抗體之間的反應(yīng)進行跟蹤和標記，這一檢測方法具有操作簡便、快速、準確率高、操作誤差較小、穩(wěn)定性好以及檢驗成本不高等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用于疾病的臨床診斷和鑒別。近年來，諸多醫(yī)學(xué)研究表明以膠體金免疫層析法（GICA法）對流感病毒進行檢測，表現(xiàn)出較高的準確率、特異性及穩(wěn)定性，且其靈敏度也可以滿足臨床應(yīng)用方面的要求，從而能夠為臨床診斷與治療提供準確可靠的參考依據(jù)。

此次研究以我市中心醫(yī)院流感監(jiān)測點所監(jiān)測的160例急性呼吸道感染患者標本作為研究對象，分別運用膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實時熒光RT-PCR兩種檢測方法對所有患者實施流感病毒檢測，然后觀察并比較兩種方法的檢測結(jié)果。結(jié)果表明，RT-PCR法對160例患者進行檢測，結(jié)果共檢測出陽性患者118例，陽性率為73.75%；GICA法對160例患者進行檢測，結(jié)果共檢出陽性患者127例，陽性率為79.38%，通過對比發(fā)現(xiàn)兩種方法其檢測結(jié)果一致的患者數(shù)共107例，統(tǒng)計學(xué)分析表明兩種方法的檢測結(jié)果差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。這與相關(guān)的研究結(jié)果相似，表明膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實時熒光RT-PCR均能有效檢測流感病毒，而膠體金免疫層析技術(shù)比實時熒光法具有更高的穩(wěn)定性、準確性，且操作方便，同時省時省力，減少污染，可作為一種快速的流感病毒檢測方法。

綜上所述，GICA與RT-PCR是流感病毒兩種常用的檢測方法，而GICA法操作更為方便，檢驗快速，且準確率較高，因而在流感病毒的檢測中具有更為廣闊的臨床應(yīng)用價值，對于及時發(fā)現(xiàn)變異毒株、掌握流感流行規(guī)律，快速準確地處置流感疫情有著重大的意義。

】

[1]王文碧.實時熒光RT-PCR法快速檢測流感病毒的效果分析[J].醫(yī)藥前沿，2015，16(21)：136-138.

[2]姚秀林.實時熒光RT-PCR與細胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測中的應(yīng)用效果觀察[J].中國醫(yī)藥指南，2016，18(4)：47-48.

[3]周雪花.實時熒光定量PCR在流感病毒核酸檢測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2014，26(28)：178-179.