伊曲康唑膠囊近紅外定性鑒別模型的建立

1.云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，云南　曲靖　655000；2.云南省曲靖市婦幼保健院，云南　曲靖　655000

近紅外光譜(Near Infrared Spectroscopy, NIR)介于可見光譜與中紅外光譜區(qū)間的電磁波，波數(shù)范圍約為12000～4000 cm-1。主要是由O-H、N-H、C-H、S-H等含氫基團(tuán)振動(dòng)光譜的倍頻及合頻吸收產(chǎn)生，譜帶寬，重疊較嚴(yán)重，而且吸收信號(hào)弱，信息解析復(fù)雜。由于該技術(shù)方便快捷，樣品無需進(jìn)行預(yù)處理，適用于在線分析及現(xiàn)場篩查等，在制藥過程控制、藥物分析、中藥分析及打擊假劣藥品中得到了廣泛的應(yīng)用。

伊曲康唑膠囊，商品名稱為斯皮仁諾，是系統(tǒng)性抗真菌藥，對(duì)常見的真菌, 如念珠菌和曲霉菌口服有效，也是目前國內(nèi)外臨床用于治療系統(tǒng)性真菌感染最重要的三唑類衍生物的抗真菌藥物，臨床用于皮膚科、婦科、眼科和系統(tǒng)性真菌感染，是治療“真菌感染”的良藥。由于該品種在全國的生產(chǎn)廠家較少，利潤空間較大，市場銷售價(jià)格較高。一些不法分子把目光盯在高附加值高科技含量的斯皮仁諾上，外包裝仿冒十分逼真，通過肉眼很難鑒別。近年以來，在市場上發(fā)現(xiàn)了多批次的假冒產(chǎn)品，筆者根據(jù)近年市場制假販假的特點(diǎn)，收集了該品種的近紅外光譜圖，根據(jù)正、偽品近紅外譜圖的不同對(duì)斯皮仁諾進(jìn)行初步篩選，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)，以提高陽性率的檢出。

1　儀器與材料

1.1儀器Matrix-F傅里葉變換車載近紅外光譜儀(含手持光纖探頭，布魯克公司的OPUS5.0光譜處理軟件，德國布魯克公司)；LC-20A型高效液相色譜儀(島津)；電子天平(梅特勒AE100)。

1.2材料伊曲康唑?qū)φ掌?規(guī)格：100 mg，含量為99.2%，批號(hào)：100631-201402，中國食品藥品檢定研究院)，乙腈為色譜純，其余所需試劑和試藥均為分析純。正品伊曲康唑膠囊(批號(hào)：170613161、170614162、170207070，西安楊森制藥有限公司)；偽品伊曲康唑膠囊(批號(hào)：160419389、170113171、160408510)由市食品藥品監(jiān)督管理局稽查支隊(duì)提供，經(jīng)協(xié)查函確認(rèn)為假藥。

2　方法與結(jié)果

2.1結(jié)果驗(yàn)證本品參照《中國藥典》(2015年版二部)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠(BDS 3μm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱)為填充劑；以乙腈-0.02 mol/L硫酸氫四丁基銨溶液(40∶60)為流動(dòng)相；檢測波長為225 nm，理論板數(shù)按伊曲康唑峰計(jì)算不低于3000，伊曲康唑峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合要求記錄色譜圖(如圖1所示)。

結(jié)果顯示，正品伊曲康唑膠囊(批號(hào)：170613161、170614162、170207070)，含量分別為101.5%、102.0%、102.3%，偽品伊曲康唑膠囊(批號(hào)：160419389、170113171、160408510)，含量均為0.0%，證明偽品中不含有效成分伊曲康唑，均判定為假藥。

2.2近紅外光譜采集測試條件：分辨率為8cm-1；樣品累積掃描次數(shù)為32 Scans；背景累積掃描次數(shù)為32 Scans；光譜范圍為12000～4000cm-1。每批次的6粒樣品測定6張光譜。測試方法為將光釬探頭頂住泡罩，隔鋁塑直接測定。環(huán)境條件為溫度20℃，濕度65%。

2.3光譜圖預(yù)處理方法的優(yōu)化及不同差異利用OPUS軟件所提供的光譜圖預(yù)處理方法，以閾值(D)、標(biāo)準(zhǔn)偏差(Sdev)和平均光譜距離(MD)為指標(biāo)，探索伊曲康唑膠囊模型參數(shù)經(jīng)不同預(yù)處理方法所產(chǎn)生的影響后，將原始光譜和不同預(yù)處理的光譜圖進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，該品牌藥品采用一階導(dǎo)數(shù)+矢量歸一化法(平滑點(diǎn)17)的預(yù)處理方法較為合理。閾值(D)、標(biāo)準(zhǔn)偏差(Sdev)和平均光譜距離(MD)均較小，正品、偽品的區(qū)分度較高，對(duì)樣品的預(yù)測結(jié)果較其他預(yù)處理方法所得結(jié)果較為準(zhǔn)確。

2.4定性模型的建立和驗(yàn)證根據(jù)正品、偽品譜圖的區(qū)別，通過不斷優(yōu)化譜段、分層處理、平滑點(diǎn)和因子選擇，采用Selectivity Report方式驗(yàn)證，選擇性S值是用來考慮模型好壞的一個(gè)重要指標(biāo)，要求最終模型的S均大于1。此模型驗(yàn)證結(jié)果為S大于1，閾值大于匹配度，均能將所有品種全部區(qū)分，建立品牌伊曲康唑膠囊近紅外光譜定性模型。本研究方法建立的模型參數(shù)為一階導(dǎo)數(shù)+矢量歸一化的預(yù)處理方法，平滑點(diǎn)數(shù)為17，特征譜段為7745～4425cm-1，光譜距離計(jì)算采用標(biāo)準(zhǔn)化法。

3　討論

3.1建模條件的評(píng)價(jià)通過OPUS5.0光譜數(shù)據(jù)分析軟件，樣品在特征譜段為7745～4425cm-1范圍內(nèi)，利用一階導(dǎo)數(shù)+矢量歸一化的預(yù)處理方法(平滑點(diǎn)數(shù)為17)進(jìn)行處理后，逐一比較分析正品和偽品參比光譜的匹配值，待測樣品光譜與參比光譜不匹配。

3.2原輔料的改變對(duì)譜圖的影響藥品的近紅外圖譜是原料和輔料的疊加圖譜，不管是原料改變還是輔料改變，近紅外圖譜都將發(fā)生改變，由于工藝改變或原輔料變化、物料配比造成的樣本差異，可反映在近紅外圖譜上。不同廠家生產(chǎn)的樣品，因其生產(chǎn)工藝、原輔料等方面的不同，均會(huì)造成近紅外光譜存在著較大的差異；而同一廠家生產(chǎn)的樣品，在其生產(chǎn)工藝較穩(wěn)定的前提下，則近紅外光譜具有明顯的同一性。

3.3模型的評(píng)價(jià)由于“一廠一品一規(guī)”的定性模型具有高專屬性和高靈敏度，同一品規(guī)的藥品，所建立的模型對(duì)所建模型的企業(yè)品種具有專屬性，若企業(yè)改變了生產(chǎn)工藝或原輔料，所建模型均會(huì)提示“不通過”，在打擊地下窩點(diǎn)的制假販假中起著關(guān)鍵作用，故筆者選取品牌廠家生產(chǎn)的品牌品種建立定性模型，能夠在很短時(shí)間內(nèi)發(fā)現(xiàn)其仿冒藥品或藥品質(zhì)量方面的顯著性差異，而對(duì)于如伊曲康唑顆粒、伊曲康唑分散片等相關(guān)的三氮唑類藥品沒有專屬性與適用性。

3.4模型的有效性根據(jù)正、偽品近紅外光譜存在的較大差異，利用近紅外光譜系統(tǒng)及OPUS數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)伊曲康唑膠囊進(jìn)行篩查，再對(duì)篩查為不合格的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，證明利用近紅外光譜系統(tǒng)快速鑒別伊曲康唑膠囊真?zhèn)蔚姆椒ㄇ袑?shí)可行。

綜上，通過對(duì)特定廠家的品牌藥品的正品掃描，確定其近紅外圖譜，通過比較同源藥品近紅外光譜特征譜段存在的差異，可以現(xiàn)場篩查發(fā)現(xiàn)可疑藥品，拓展了近紅外光譜藥品快速鑒別技術(shù)的應(yīng)用范圍，在基層藥品打假中發(fā)揮了重要作用。該定性模型鑒別方法直觀、操作簡單、快速有效、實(shí)用，可彌補(bǔ)近紅外模型的不足，為近紅外快速鑒別技術(shù)的推廣應(yīng)用提供新思路，將藥品的行政監(jiān)督和技術(shù)監(jiān)督有機(jī)融為一體，為執(zhí)法人員提供合理有效的技術(shù)支持，節(jié)約檢驗(yàn)成本，更好地保障人民群眾的用藥安全。

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