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    加米霉素注射液治療牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)的田間試驗

    2018-04-18 02:21:40王紅霄
    中國獸醫(yī)雜志 2018年1期
    關鍵詞:精神狀態(tài)氏桿菌病牛

    鄧 菲 , 孫 進 , 王紅霄

    (1.沈陽藥科大學藥學院 , 遼寧 沈陽 117004 ; 2.華北制藥集團動物保健品有限責任公司 , 河北 石家莊 050041)

    加米霉素(Gamithromycin)是一種新型的半合成大環(huán)內酯類動物專用抗生素,由法國梅里亞公司研發(fā),通過抑制細菌RNA依賴性蛋白合成而起抑菌和殺菌作用,對溶血曼氏菌、多殺性巴氏桿菌、睡眠嗜血桿菌等引起牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)的病原菌有很強的抗菌活性,對支原體、馬鏈球菌、馬紅球菌、胸膜肺炎放線菌等的抗菌活性也較強。2007年9月歐盟批準加米霉素注射液(Zactran)上市,主要用于治療非泌乳牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)[1~3]。加米霉素具有單次給藥、吸收迅速、生物利用度高、低殘留、安全高效等優(yōu)點,在養(yǎng)殖動物呼吸系統(tǒng)感染性疾病防治中具有廣闊的應用前景。按照農(nóng)業(yè)部1247號公告要求,華北制藥集團動物保健品有限責任公司于2016年4月至2016年10月對該公司生產(chǎn)的加米霉素注射液開展了治療牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)的Ⅲ期臨床試驗[4]。

    1 試驗時間和地點

    本試驗實施時間為2016年4月至2016年10月,試驗病例來自于四川省廣安市某牛場。

    2 材料與方法

    2.1 試驗藥物 加米霉素注射液,華北制藥集團動物保健品有限責任公司提供,自主研發(fā)。對照藥:加米霉素注射液(ZACTRAN?),梅里亞有限公司生產(chǎn)。

    2.2 病例選擇與分組

    2.2.1 病例入選標準 對自然發(fā)病牛先進行全面的臨床檢查,測量體溫(直腸溫度),按標準對其精神狀態(tài)和呼吸癥狀進行評分。

    病牛入選試驗標準:(1)自然發(fā)病牛;(2)至少15日齡,品種、性別、體重不限;(3)表現(xiàn)出典型的牛呼吸道疾病(BRD)癥狀,同時滿足:精神沉郁評分≥1;呼吸癥狀評分≥1,直腸溫度≥40.0 ℃;(4)采集病牛鼻拭子,可檢出引起B(yǎng)RD的病原菌(多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、睡眠嗜組織菌等)。

    2.2.2 病例剔除標準 (1)患有非BRD相關疾病、受傷、過度虛弱;(2)試驗開始前6個月內接種過BRD菌苗,或在試驗前30日內接受過抗菌藥治療;產(chǎn)奶供人食用或試驗后90日內將產(chǎn)奶供人食用的牛,或預計在2個月內分娩可能生產(chǎn)人用乳品的懷孕母牛。

    2.2.3 病例分組與給藥 篩選出60例符合要求的BRD病牛。根據(jù)牛耳號,將病牛隨機分配到2個組,每組30頭病牛,要求兩組病牛的發(fā)病嚴重程度基本一致。試驗分組與給藥信息見表1。

    表1 試驗分組與給藥

    注:在試驗0 d對病牛進行稱重,計算劑量并給藥

    2.3 試驗周期 所有病牛的試驗周期均為14 d。即從給藥0 d至給藥后14 d,每日對病牛進行檢查。

    2.4 試驗病例淘汰 給藥后至第1天觀察前,病牛出現(xiàn)死亡,需退出本試驗,但不判為治療無效;判定為治療無效的病牛,需從本試驗中淘汰,并及時給予其他藥物治療;試驗病牛出現(xiàn)與BRD無關的不良狀況(如受傷等)時,由試驗負責人或主治獸醫(yī)決定是否從本研究中淘汰。

    2.5 觀察指標

    2.5.1 臨床檢查 精神狀態(tài)與呼吸癥狀:從給藥0 d至給藥14 d,每天觀察病牛,按標準對其精神狀態(tài)、呼吸癥狀進行評分。體溫:從給藥0 d至給藥后14 d,每天在相同時間測量病牛的體溫(直腸溫度)。體重:在試驗0 d,測量病牛體重,并根據(jù)病牛體重計算其給藥劑量。注射部位反應:從給藥0 d至給藥后14 d,每天觀察病牛注射部位反應。

    2.5.2 微生物學檢查 在給藥前(給藥0 d),采集9頭病牛鼻拭子,送實驗室進行BRD相關病原菌(多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、睡眠嗜血桿菌等)分離鑒定。在試驗過程中,若有病牛死亡,需對尸體進行剖檢,同時采集肺組織進行BRD相關病原菌分離鑒定。在試驗過程中,若病牛因BRD治療無效需淘汰,在淘汰當天需采集該病牛鼻拭子進行BRD相關病原菌分離鑒定[5]。

    2.5.3 病理剖檢 試驗過程中所有死亡的病牛均要進行病理剖檢,對病變組織進行拍照;同時采集肺組織進行BRD相關病原菌分離鑒定。

    2.6 療效判定標準

    2.6.1 無效 (1)從給藥2 d至給藥后14 d,病牛連續(xù)2日:精神沉郁評分≥1,且呼吸癥狀評分≥1,且直腸溫度≥40 ℃,判定為治療無效;(2)從給藥2 d至給藥后14 d,病牛由于BRD病情嚴重,需從試驗中退出并給予其他藥物治療;或由于BRD死亡,判定為治療無效。

    2.6.2 有效 從給藥2 d至給藥后14 d,病牛未被判定為治療無效,但精神、呼吸、直腸溫度三項指標未完全恢復正常,判定為治療有效。

    2.6.3 治愈 從給藥2 d至給藥后14 d,病牛精神、呼吸、直腸溫度均恢復正常,且連續(xù)7 d未出現(xiàn)病情反復,判定為治愈。

    2.7 不良反應 從給藥0 d至給藥后14 d,每日對病牛進行觀察,對病牛出現(xiàn)的不良反應進行評估,并記錄。

    3 結果與分析

    3.1 試驗病牛入選與分組 按試驗病牛入選標準,從上述70余頭BRD病牛中遴選60頭開展試驗。根據(jù)病牛耳號,將它們隨機分配到受試藥物組(Ⅰ組)和對照藥物組(Ⅱ組),每組30頭。病牛的年齡和體重統(tǒng)計結果見表2。平均年齡為8月齡,平均體重為198 kg,兩組病牛的年齡與體重比較差異均不顯著(P>0.05)。

    3.2 試驗病牛臨床表現(xiàn) 觀察所有病牛在給藥0 d(給藥前)至給藥14 d的臨床表現(xiàn),測量其體溫(直腸溫度),按標準對其精神狀態(tài)、呼吸癥狀進行評分。

    表2 試驗病牛年齡與體重統(tǒng)計結果

    注:組間數(shù)據(jù)比較,具相同大寫字母表示差異不顯著(P>0.05)、具不同大寫字母表示差異顯著(P≤0.05)

    3.2.1 試驗病牛體溫測量結果 從給藥0 d至給藥14 d,每日在相同時間點測量病牛體溫(直腸溫度)。統(tǒng)計結果見中插彩版圖1。結果可見,給藥前(給藥0 d)所有病牛均存在發(fā)熱癥狀,體溫(直腸溫度)均在40℃以上。

    統(tǒng)計分析病牛的體溫情況,組內比較發(fā)現(xiàn):無論受試藥物組(Ⅰ組)還是對照藥物組(Ⅱ組),給藥1 d至給藥14 d的體溫均顯著降低于給藥0 d(給藥前)的體溫(P≤0.05);組間比較發(fā)現(xiàn):給藥前(給藥0 d)兩組病牛的體溫無顯著差異(P>0.05),給藥1 d至給藥后14 d,兩組病牛的體溫同樣無顯著差異(P>0.05)。

    3.2.2 試驗病牛精神狀態(tài)評分結果 從給藥0 d至給藥后14 d,每日觀察病牛的精神狀態(tài)。統(tǒng)計結果見中插彩版圖2。

    結果顯示,兩組病牛在給藥0 d(給藥前)均有明顯的精神沉郁表現(xiàn)。受試藥物組(Ⅰ組)精神狀態(tài)1分的病牛比例為53.3%(16/30),精神狀態(tài)2分的病牛比例為46.7%(14/30);對照藥物組(Ⅱ組)精神狀態(tài)1分的病牛比例為56.7%(17/30),精神狀態(tài)2分的病牛比例為43.3%(13/30)。

    統(tǒng)計分析病牛的精神狀態(tài)評分,組內比較發(fā)現(xiàn):無論受試藥物組(Ⅰ組)還是對照藥物組(Ⅱ組),給藥1 d至給藥后14 d的精神狀態(tài)評分均顯著降低于給藥0 d(給藥前)的精神狀態(tài)評分(P≤0.05);組間比較發(fā)現(xiàn):給藥前(給藥0 d)兩組病牛的精神狀態(tài)評分無明顯差異(P>0.05),給藥1 d至給藥后14 d,兩組病牛的精神狀態(tài)評分也無明顯差異(P>0.05)。

    3.2.3 試驗病牛呼吸癥狀評分結果 從給藥0 d至給藥后14 d,每日觀察病牛的呼吸癥狀。統(tǒng)計結果見中插彩版圖3。

    上述結果顯示,給BRD病牛單次皮下注射推薦劑量的受試藥物(華北制藥生產(chǎn)的加米霉素注射液)和對照藥物(梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液),均可快速有效地改善病牛的發(fā)熱癥狀,使其體溫恢復正常;同樣也可快速有效地改善病牛呼吸急促、咳嗽、流鼻液等呼吸困難癥狀;病牛的精神狀態(tài)也能得到快速恢復。兩藥比較,它們對BRD病牛臨床癥狀的改善效果基本相當。

    3.3 注射部位反應 從給藥0 d至給藥后14 d,每天觀察病牛皮下注射部位(肩前部)的反應情況。結果可見,所有病牛的皮下注射部位均未出現(xiàn)堅實、水腫、疼痛等刺激反應。

    3.4 試驗病牛鼻拭子微生物學檢查結果

    3.4.1 試驗病牛給藥前鼻拭子病原菌檢測結果 數(shù)據(jù)可見,5頭病牛檢出了多殺巴氏桿菌(5/9,55.6%);3頭病牛檢出了溶血曼氏桿菌(3/9,33.3%);2頭病牛檢出了牛支原體(2/9,22.2%);3頭病牛檢出了肺炎鏈球菌(3/9,33.3%)。另外,還從一些病牛鼻拭子分離出了金黃色葡萄球菌(2/9,22.2%)、大腸桿菌(4/9,44.4%)、肺炎克雷伯菌(2/9,22.2%)、芽孢桿菌(1/9,11.1%)等,沒有檢出睡眠嗜血桿菌(0/9,0%)。

    表3 給藥前(給藥0天)部分試驗病牛鼻拭子病原菌檢出結果統(tǒng)計

    注:給藥前采集了9頭試驗病牛鼻拭子做病原菌檢測

    3.4.2 治療無效試驗病牛鼻拭子病原菌檢測結果 試驗中(給藥1 d至給藥后14 d),Ⅰ組、Ⅱ組各有3頭病牛被淘汰,均判定為治療無效。

    表4 給藥后治療無效病牛鼻拭子病原菌分離鑒定結果統(tǒng)計

    注:Ⅰ組和Ⅱ組各有3頭病牛被淘汰,判定為治療無效

    數(shù)據(jù)顯示,Ⅰ 組和Ⅱ 組治療無效病牛鼻拭子中均未檢出多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、牛支原體、肺炎克雷伯菌,也未檢出睡眠嗜血桿菌。但卻分離出了肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、芽孢桿菌等。

    上述結果顯示,給BRD病牛單次皮下注射推薦劑量的受試藥物(華北制藥生產(chǎn)的加米霉素注射液)和對照藥物(梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液),對牛呼吸道感染的多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、牛支原體等病原菌有很好的清除作用;而對大腸桿菌等不敏感菌的清除作用有限。

    3.5 試驗病牛死亡及剖檢情況 從用藥0 d至用藥后14 d,未出現(xiàn)試驗病牛死亡情況,存活率為100%。因此未對試驗病牛實施剖檢。

    3.6 受試藥和對照藥療效比較 給藥0 d至給藥后14 d期間,綜合考察各病牛的體溫、精神狀態(tài)、呼吸癥狀等臨床表現(xiàn),按標準分別判定各試驗病牛給予受試藥物和對照藥物后的療效。統(tǒng)計兩組病牛的治愈率、有效率和無效率,結果見表5。

    表5 兩組試驗病牛的治療結果統(tǒng)計 (n=30)

    數(shù)據(jù)顯示,給BRD病牛單次皮下注射推薦劑量的受試藥物(華北制藥生產(chǎn)的加米霉素注射液)和對照藥物(梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液),均具有良好的治療效果。受試藥和對照藥對BRD的療效相當,治愈率和有效率均達到90%。

    3.7 不良反應 從給藥第0天至給藥后第14天,每天觀察試驗病牛的不良反應發(fā)生情況。結果所有試驗病牛均未出現(xiàn)BRD癥狀之外的異常表現(xiàn)和體征(如呼吸急劇加快,心跳明顯升高,可視黏膜水腫等過敏反應體征;嘔吐、腹瀉等病癥);更未出現(xiàn)死亡情況。

    4 結論

    4.1 華北制藥集團動物保健品有限責任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液對牛呼吸道疾病(BRD)有良好治療效果。按推薦劑量(6 mg/kg體重)給BRD病牛單次皮下注射,給藥1 d后即可顯著改善病牛發(fā)熱、精神沉郁,呼吸困難等癥狀(P≤0.05),給藥4~5 d后病牛即可恢復正常,治療有效率可達90%,與梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液療效相當(P>0.05)。

    4.2 加米霉素可有效清除牛呼吸道內BRD相關主要病原菌。按推薦劑量(6 mg/kg體重)給BRD病牛單次皮下注射華北制藥集團動物保健品有限責任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液,牛呼吸道感染的多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、牛支原體等病原菌都能得到有效清除,與梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液作用效果相當。但加米霉素對牛呼吸道感染的大腸桿菌等不敏感菌的清除作用有限。

    4.3 加米霉素注射液用于牛的BRD治療較安全。按推薦劑量(6 mg/kg體重)給BRD病牛單次皮下注射華北制藥集團動物保健品有限責任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液,注射部位未出現(xiàn)堅實、水腫、疼痛等刺激反應,也未觀察到BRD癥狀之外的異常表現(xiàn)和體征,更未出現(xiàn)用藥病牛死亡情況。

    4.4 華北制藥集團動物保健品有限責任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液用于治療牛呼吸道疾病(BRD)安全有效,臨床中可推廣應用。

    參考文獻:

    [1] Clinical and Laboratory Standards Institute. Approved standard.9th edition. CLSIM07-A9. Clinical and Laboratory Standards Institute guidelines[J].Wayne.PA (2012)[S].

    [2] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Scientific_Discussion/veterinary/000129/WC500068716[J].pdf.EMA. 2008. The European Agency for the Evaluation ofMedicinal Products.Zactran:EPAR-Scientific Discussion[EB /OL].

    [3] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Maximum_Residue_Limits_-_Report/2015/02/WC500183124[J].pdf. EMA.2014. European public MRL assessment report (EPMAR): Gamithromycin (porcine)[EB /OL].

    [4] 農(nóng)業(yè)部.公告第1247號. 抗菌藥物Ⅱ、Ⅲ期臨床藥效評價試驗指導原則:2016:33-39.

    [5] 中國科學院微生物研究所.《伯杰細菌鑒定手冊》翻譯組.伯杰細菌鑒定手冊[M].北京:科學出版社,1984.

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