膳食維生素B12添加與阿爾茨海默病的防治

黃亦依　馮　瀟　朱　炫　王歡歡　

(杭州師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，浙江　杭州　310036)

1浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院食品安全重點實驗室

阿爾茨海默病(AD)是一種神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為進行性認知功能障礙，記憶力降低并伴隨個性和行為改變，病變持續(xù)發(fā)展最終出現(xiàn)癡呆〔1〕。AD發(fā)病的最大影響因素是年齡，80歲以上人群患AD的概率高達20%以上〔1〕。20世紀以來，隨著社會醫(yī)療水平的不斷提高，人的壽命顯著延長，AD發(fā)病率也快速上升。AD已成為影響老年人身體健康、生活質(zhì)量最重要的疾病之一，預(yù)計到2050年，全球?qū)⒂谐^1億的AD患者〔2〕。維生素(VitB12)的缺乏與AD的發(fā)生關(guān)系密切，這與VitB12參與機體許多重要生理過程有關(guān)。VitB12在體內(nèi)作為輔酶參與多種生化過程，調(diào)節(jié)關(guān)鍵DNA或蛋白質(zhì)的甲基化水平，調(diào)控溶酶體正常功能，以及其本身也具有一定的抗炎抗氧化作用。膳食VitB12的添加作為新型AD防治的輔助方法當(dāng)前受到越來越多的關(guān)注，但膳食中VitB12的穩(wěn)定性及安全性尚未作深入研究。本文將對VitB12缺乏與AD發(fā)生的機制，以及膳食VitB12添加與AD防治隱患作如下綜述。

1　AD發(fā)病機制

AD的發(fā)生伴隨一系列神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀，其最基本的病理特征是淀粉樣沉淀和神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFTs)〔3〕。當(dāng)前研究認為，AD患者腦內(nèi)β淀粉樣肽(Aβ)的沉積是產(chǎn)生神經(jīng)損傷的主要原因〔1〕。Aβ數(shù)量的增多及二聚體、寡聚體、多聚體至淀粉樣沉淀的形成對神經(jīng)細胞造成損傷，激活神經(jīng)膠質(zhì)細胞。膠質(zhì)細胞的激活可通過模式識別受體(PRR)活性的上調(diào)活化細胞內(nèi)一系列炎癥相關(guān)信號通路，從而上調(diào)細胞因子、趨化因子等促炎因子的轉(zhuǎn)錄和翻譯。膠質(zhì)細胞釋放的大量炎癥因子，如腫瘤壞死因子(TNF)α等，可以使tau蛋白過度磷酸化形成細胞內(nèi)NFTs，從而造成更大范圍的神經(jīng)損傷。因此，神經(jīng)炎癥反應(yīng)的抑制作為AD治療的潛在靶點一直受到廣泛關(guān)注，但至今仍鮮有切實有效的相關(guān)治療藥物和方案〔4〕。Aβ是它的前體淀粉樣前體蛋白(APP)的剪切產(chǎn)物。APP可被β剪切酶(BACE)1和γ剪切酶(PS)1剪切，從而釋放Aβ〔5〕。目前雖然已經(jīng)有一些研究成功合成BACE1和PS1抑制劑，但臨床效果甚微或副反應(yīng)較大。當(dāng)前對于AD的治療主要依靠的仍然是膽堿能神經(jīng)功能相關(guān)的緩減癥狀的方法，而真正針對發(fā)病機制的靶點藥物仍乏善可陳。

2　維生素B12的缺乏與AD的發(fā)生

AD的發(fā)生常常伴隨VitB12的缺乏。許多報道發(fā)現(xiàn)血清VitB12及葉酸水平的降低與認知能力的損傷有密切關(guān)系〔6〕。更為準確的神經(jīng)生物學(xué)功能測試也顯示B族維生素的缺乏與癡呆的發(fā)生之間的聯(lián)系更為緊密〔7〕。早期研究認為這二者之間孰因孰果無定論，有可能二者互為因果，通常認為VitB12的缺乏往往伴隨著AD相關(guān)認知功能的喪失。對于單純性VitB12缺乏患者的研究發(fā)現(xiàn)，患者往往長期處在VitB12缺乏的狀態(tài)中〔8,9〕；進一步流行病研究發(fā)現(xiàn)，長期缺乏VitB12的膳食攝入可加劇AD和輕度認知障礙的發(fā)生率〔10,11〕。另外，還有研究表明長期補充VitB12可推遲家族型AD和散發(fā)型AD的發(fā)病〔12，13〕。因此，目前認為VitB12的補充是預(yù)防AD發(fā)生的有效方法之一，許多AD高發(fā)人群都會遵醫(yī)囑長期規(guī)律攝取VitB12以延緩疾病的發(fā)生。

更為重要的是，老年患者往往是VitB12缺乏癥的高危人群。老年人缺乏VitB12主要原因往往歸咎于腸道系統(tǒng)對于VitB12吸收的下降。有研究顯示，VitB12缺乏患者中，53%的患者消化吸收不良，33%患者處于長期惡性貧血，只有不到2%的患者是由于飲食問題引起VitB12的缺乏〔14〕。而且，通常老年患者胃炎的發(fā)病率高于正常值，胃酸分泌量減少，可進一步削弱VitB12的吸收。在非AD患者或輕度認知功能障礙的患者中，VitB12的缺乏也已被證實與患者認知功能的損傷相關(guān)〔15〕。因此，老年人不僅是VitB12缺乏的高危人群，也是AD發(fā)生的高危人群，這二者之間存在緊密的內(nèi)在聯(lián)系。

3　VitB12缺乏影響AD發(fā)生的可能機制

3.1VitB12的生化特性VitB12是一種水溶性維生素，它在機體許多生理功能中發(fā)揮著重要作用，如神經(jīng)功能、紅細胞的生成及DNA的合成等。VitB12又叫鈷胺素，是體內(nèi)唯一含金屬元素的維生素，以相鄰的4個吡咯環(huán)及1個鈷原子組成的咕啉環(huán)為基本結(jié)構(gòu)，化學(xué)分子式為C63H88CoN14O14P(圖1)。根據(jù)咕啉環(huán)軸向上方的配基(-R)不同，則會產(chǎn)生不同形式的鈷胺素類物質(zhì)，包括氰基鈷胺素(-CN)、羥基鈷胺素(-OH)、水鈷胺素(-H2O)、硝基鈷胺素(-NO)、甲基鈷胺素(-CH3)和脫氧腺苷鈷胺素(-5-dA)等〔16〕。VitB12是所有這些衍生物的統(tǒng)稱，其中氰基鈷胺素不是VitB12的天然存在形式，它是在工業(yè)提純時用氰化物取代天然鈷胺素而得到的產(chǎn)物，商品形式的VitB12多為氰基鈷胺素。VitB12參與的體內(nèi)具體生化過程包括：將同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼?，又可將甲基丙二酸轉(zhuǎn)變?yōu)殓牾］o酶A；將5-甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)變?yōu)樗臍淙~酸酯，這一過程在DNA的合成和紅細胞的生成中至關(guān)重要〔17〕。VitB12無法被人體自身合成，必須通過外源攝取動物蛋白或植物加工制品并經(jīng)體內(nèi)充分消化獲取。VitB12主要存在于肉類中，植物中的大豆及一些草藥也含有VitB12。胃酸可將食物中的VitB12游離，隨后與內(nèi)因子結(jié)合，并在結(jié)腸末端被人體吸收。

圖1　VitB12分子結(jié)構(gòu)示意圖

3.2VitB12作為輔酶參與機體代謝通常認為VitB12的缺乏與神經(jīng)損傷的關(guān)系存在兩種機制，這兩種機制都建立在VitB12作為輔酶參與體內(nèi)許多生化反應(yīng)的基礎(chǔ)上。VitB12作為輔酶參與體內(nèi)多項代謝反應(yīng)中，最為重要的就是同型半胱氨酸(Hcy)的代謝。Hcy是一種含硫氨基酸，它并不參與蛋白質(zhì)的合成，它只是甲硫氨酸(Methionine)代謝循環(huán)的中間產(chǎn)物〔18〕(圖2)。Hcy是S-腺苷半胱氨酸(SAH)的代謝產(chǎn)物。SAH的有效代謝需要一些輔助因子的參與，其中包括較低劑量的葉酸和VitB12，而Hcy失活轉(zhuǎn)化為S-腺苷甲硫氨酸(SAM)則需要較高劑量VitB12的幫助。因此，缺乏VitB12可阻礙Hcy的失活從而引起高半胱氨酸血癥(HHcy)的產(chǎn)生。

體內(nèi)半胱氨酸含量的升高引起的HHcy與許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如冠狀動脈疾病、外周血管疾病和腦卒中等〔19〕。除此之外，HHcy也被證實參與一些神經(jīng)退行性疾病如AD的發(fā)生〔20,21〕。流行病學(xué)統(tǒng)計結(jié)果顯示，AD患者血漿Hcy水平顯著上升〔22〕。關(guān)于血漿Hcy水平作為一項相對獨立的AD發(fā)病危險因素也在近期得到證實〔18，21〕，因此近年來血漿Hcy水平也成為AD發(fā)生的檢測指標之一〔23,24〕。研究顯示，VitB12的缺失可加速轉(zhuǎn)基因AD小鼠模型腦部Aβ的沉積〔25,26〕；由高SAH飼料喂飼或低葉酸飼料喂飼引起的HHcy可顯著上調(diào)小鼠體內(nèi)PS1和BACE1活性及Aβ的產(chǎn)量(圖2)〔27,28〕。

圖2　VitB12參與體內(nèi)甲硫氨酸代謝循環(huán)及其對AD相關(guān)APP剪切的影響

3.3VitB12參與甲基化修飾調(diào)節(jié)甲基化修飾是體內(nèi)許多酶系統(tǒng)激活和DNA轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵調(diào)節(jié)步驟，而由葉酸和VitB12共同參與Hcy轉(zhuǎn)化而來的SAM則是體內(nèi)最重要的甲基化來源〔29〕。有研究表明，血漿Hcy水平的升高和體內(nèi)甲基化代謝的失調(diào)有著密切關(guān)系。甲基化是DNA轉(zhuǎn)錄前修飾的重要方式之一，DNA的甲基化可引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達。通常情況下，在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基，從而引起DNA的失活。體內(nèi)甲基化代謝的異常會影響體內(nèi)多種正常生理功能，包括神經(jīng)細胞的正常功能、細胞的增殖增生和染色體雙螺旋的穩(wěn)定性等〔16〕。就AD相關(guān)PS1和BACE1而言，基因DNA的甲基化可有效控制其轉(zhuǎn)錄翻譯，從而調(diào)控神經(jīng)毒性Aβ的產(chǎn)生〔30〕。因此，VitB12引起DNA甲基化的效能將決定其對AD相關(guān)PS1、BACE1，甚至APP基因轉(zhuǎn)錄翻譯的控制。有研究表明，無活性VitB12衍生物可通過競爭血漿VitB12運載蛋白降低VitB12本身的活性，從而弱化各類基因的甲基化。同時，也不排除VitB12衍生物本身可直接下調(diào)AD相關(guān)基因甲基化，影響Aβ的產(chǎn)生及其神經(jīng)毒性作用〔22〕。

3.4VitB12的抗氧化作用在AD的發(fā)生過程中，過氧化反應(yīng)的發(fā)生及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、線粒體的過氧化損傷，以及由此引發(fā)的活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)的釋放，都會加劇神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活及炎癥反應(yīng)和神經(jīng)細胞進一步的損傷〔31〕。且有報道稱，小鼠缺少VitB12可以上調(diào)腦脊液TNFα和表皮生長因子(EGF)水平，增強神經(jīng)炎癥反應(yīng)，加劇神經(jīng)損傷〔32〕。因此，VitB12對AD的神經(jīng)保護作用除了通過相關(guān)基因蛋白表達直接調(diào)控Aβ的產(chǎn)生以外，還可以通過抵抗由Aβ神經(jīng)毒性引起的ER損傷，弱化細胞炎癥反應(yīng)而間接發(fā)揮其作用。有報道稱，VitB12可通過調(diào)節(jié)Sirtuin 1脫乙酰酶(SIRT1)活性及SIRT1下游一系列激酶的活化，調(diào)控細胞內(nèi)分子伴侶蛋白(chaperon protein)以抵抗ER損傷〔33〕。VitB12分子中以鈷元素為中心的卟啉環(huán)及5，6-二甲基苯并咪唑被認為是發(fā)揮該作用的重要結(jié)構(gòu)。不同VitB12類似物在卟啉和咪唑環(huán)上的修飾對其抗氧化作用和抑制神經(jīng)炎癥作用有何不同，對細胞內(nèi)ER、線粒體過氧化反應(yīng)的作用，及對由Aβ產(chǎn)生的神經(jīng)毒性作用或有害或有益，都還未見成熟研究。

3.5VitB12參與溶酶體功能調(diào)控VitB12的正常代謝需要溶酶體轉(zhuǎn)運體的參與。VitB12從腸道吸收進入血漿或組織間液后可與鈷胺素轉(zhuǎn)運蛋白(TC)結(jié)合隨循環(huán)系統(tǒng)運輸，與靶細胞膜上特定受體結(jié)合，以VitB12-TC復(fù)合物的形式被細胞攝取〔34〕。VitB12-TC進入細胞后TC部分可被溶酶體消化，繼而游離出VitB12，進一步參與各類細胞內(nèi)生化反應(yīng)。溶酶體內(nèi)含有超過50種水解酶，溶酶體腔內(nèi)的酸性pH對其發(fā)揮正常功能十分關(guān)鍵。對于VitB12而言，胞內(nèi)溶酶體的正常運作對VitB12在胞內(nèi)的釋放并轉(zhuǎn)運至線粒體這一過程至關(guān)重要，這一過程受到溶酶體膜上的兩種蛋白LMBD1和ABCD4對VitB12的調(diào)控〔35～37〕。各種VitB12衍生物在溶酶體中代謝過程的不同特點目前并沒有深入研究，VitB12各取代基對溶酶體膜蛋白LMBD1和ABCD4活性的不同影響也未有詳細報道。與此同時，AD相關(guān)Aβ在細胞內(nèi)外的蓄積也受到溶酶體代謝的調(diào)節(jié)：一方面AD發(fā)生過程中生成的部分Aβ可被溶酶體消化，從而緩解細胞內(nèi)Aβ載量及由此帶來的細胞毒性；另一方面，不斷增加的Aβ量也可加重溶酶體負擔(dān)，從而破壞膜蛋白LMBD1和ABCD4活性，影響Aβ的正常降解〔38〕。VitB12與Aβ的代謝均依賴于溶酶體這一特性決定了，VitB12的正常水平及VitB12衍生物不同取代基對于溶酶體膜蛋白活性的調(diào)控，都將影響細胞內(nèi)Aβ的產(chǎn)量及其導(dǎo)致的AD相關(guān)神經(jīng)損傷的癥狀。

4　膳食VitB12添加的風(fēng)險

早期對于VitB12缺乏的治療往往采用傳統(tǒng)的肌肉注射法〔17〕，而后又被口服片劑取代〔39〕。隨著社會醫(yī)療水平的進步及大眾對于健康養(yǎng)生的關(guān)注和重視，目前除人工合成VitB12片劑以外，許多人也選擇通過食用富含VitB12的食物來增加VitB12的攝取，如一些海鮮、肉類和大部分腌制食品等。研究顯示，VitB12的膳食添加可以有效改善患者血漿Hcy水平并部分改善或延緩患者認知功能的退化〔40〕。VitB12分別以腺基鈷胺素和甲基鈷胺素兩種形式參與了體內(nèi)各種代謝反應(yīng)〔41〕。人工合成的VitB12主要以較為穩(wěn)定的氰鈷胺為主，進入體內(nèi)后可被代謝為可被人體利用的腺鈷胺和甲鈷胺。食物中的VitB12的類型則要豐富得多，存在許多類型的VitB12衍生物或類似物，而這些類似物是否在體內(nèi)能轉(zhuǎn)變?yōu)槿梭w能利用的形式則未能證實。值得關(guān)注的是，一些VitB12的衍生物會造成某些酶系統(tǒng)的失活，從而對細胞的正常代謝產(chǎn)生負面效應(yīng)。研究人員在猴頭菇中檢測到了c-內(nèi)酰鈷胺素，并發(fā)現(xiàn)c-內(nèi)酰鈷胺素可以在體內(nèi)或體外與特定酶結(jié)合并使其喪失生理功能〔42,43〕。由此說明，各種VitB12類似物在體內(nèi)的作用不盡相同，一些衍生物在進入體內(nèi)后可代謝為腺基鈷胺素和甲基鈷胺素參與如Hcy的失活等生化反應(yīng)，而另一些則不具備此功能，以無效VitB12的形式存在體內(nèi)，妨礙VitB12的正常功能，甚至產(chǎn)生其他毒性作用。明確各種VitB12衍生物的生物活性及其對AD相關(guān)基因、蛋白表達、活化的影響，對Aβ產(chǎn)生的神經(jīng)毒性的調(diào)控作用，將有利于食品藥品生產(chǎn)中有效規(guī)避有害副產(chǎn)物產(chǎn)生，提高其有效成分的利用率。

綜上，VitB12作為人體多項代謝過程中重要的調(diào)控因子，它的缺乏將會引起機體多方面的損傷，神經(jīng)功能損傷及相關(guān)認知功能的障礙，從而引起的老年癡呆或AD相關(guān)癥狀得到了越來越多的關(guān)注。VitB12的缺乏可以調(diào)控機體內(nèi)多項生化反應(yīng)的輔酶活性，DNA轉(zhuǎn)錄的甲基化修飾，包括ER、線粒體、溶酶體等細胞器的正常功能，從而影響神經(jīng)細胞的活性和正常功能(圖3)。外源性補充VitB12被證實可有效降低AD相關(guān)神經(jīng)損傷的癥狀，但食品藥品中存在的不同VitB12衍生物進入體內(nèi)后多經(jīng)歷的化學(xué)反應(yīng)、代謝途徑及對機體各項機能所產(chǎn)生的可能影響都尚沒有深入系統(tǒng)的研究。明確VitB12各類衍生物對AD相關(guān)基因、蛋白的影響，將可以進一步提高VitB12膳食添加對AD防治的效果和效率。

圖3　VitB12參與機體多種代謝反應(yīng)與AD相關(guān)神經(jīng)損傷的關(guān)系示意圖

1Selkoe DJ.Alzheimer′s disease：genes，proteins，and therapy 〔J〕.Physiol Rev，2001；81(2)：741-66.

2Karran E，Mercken M，De Strooper B.The amyloid cascade hypothesis for Alzheimer′s disease：an appraisal for the development of therapeutics 〔J〕.Nat Rev Drug Discov，2011；10(9)：698-712.

3Serrano-Pozo A，F(xiàn)rosch MP，Masliah E，etal.Neuropathological alterations in Alzheimer disease 〔J〕.Cold Spring Harb Perspect Med，2011；1(1)：a006189.

4Patel NS，Paris D，Mathura V，etal.Inflammatory cytokine levels correlate with amyloid load in transgenic mouse models of Alzheimer′s disease 〔J〕.J Neuroinflammation，2005；2(1)：9.

5Hardy J，Selkoe DJ.The amyloid hypothesis of Alzheimer′s disease：progress and problems on the road to therapeutics 〔J〕.Science，2002；297(5580)：353-6.

6Faux NG，Ellis KA，Porter L，etal.Homocysteine，vitamin B12，and folic acid levels in Alzheimer′s disease，mild cognitive impairment，and healthy elderly：baseline characteristics in subjects of the Australian Imaging Biomarker Lifestyle study 〔J〕.J Alzheimers Dis，2011；27(4)：909-22.

7Chang N，Kim E，Kim KN，etal.Folate nutrition is related to neuropsychological functions in the elderly 〔J〕.Nutr Res Pract，2009；3(1)：43-8.

8Planells E，Sanchez C，Montellano MA，etal.Vitamins B6 and B12 and folate status in an adult Mediterranean population 〔J〕.Eur J Clin Nutr，2003；57(6)：777-85.

9Tucker KL，Qiao N，Scott T，etal.High homocysteine and low B vitamins predict cognitive decline in aging men：the Veterans Affairs Normative Aging Study 〔J〕.Am J ClinNutr，2005；82(3)：627-35.

10Mizrahi EH，Jacobsen DW，Debanne SM，etal.Plasma total homocysteine levels，dietary vitamin B6 and folate intake in AD and healthy aging 〔J〕.J Nutr Health Aging，2003；7(3)：160-5.

11Corrada MM，Kawas CH，Hallfrisch J，etal.Reduced risk of Alzheimer′s disease with high folate intake：the baltimore longitudinal study of aging 〔J〕.Alzheimers Dement，2005；1(1)：11-8.

12Chan A，Paskavitz J，Remington R，etal.Efficacy of a vitamin/nutriceutical formulation for early-stage Alzheimer′s disease：a 1-year，open-label pilot study with an 16-month caregiver extension 〔J〕.Am J Alzheimers Dis Other Demen，2008；23(6)：571-85.

13Flicker L，Martins RN，Thomas J，etal.B-vitamins reduce plasma levels of beta amyloid 〔J〕.Neurobiol Aging，2008；29(2)：303-5.

14Henoun LN，Noel E，Ben AM，etal.Cobalamin deficiency due to non-immune atrophic gastritis in elderly patients.A report of 25 cases 〔J〕.J Nutr Health Aging，2005；9(6)：462.

15Kwok T，Lee J，Ma RC，etal.A randomized placebo controlled trial of vitamin B12 supplementation to prevent cognitive decline in older diabetic people with borderline low serum vitamin B12 〔J〕.Clin Nutr，2016；S0261-5614(16)：31308-5.

16Grober U，Kisters K，Schmidt J.Neuroenhancement with vitamin B12-underestimated neurological significance 〔J〕.Nutrients，2013；5(12)：5031-45.

17Langan RC，Zawistoski KJ.Update on vitamin B12 deficiency 〔J〕.Am Fam Physician，2011；83(12)：1425-30.

18Oikonomidi A，Lewczuk P，Kornhuber J，etal.Homocysteine metabolism is associated with cerebrospinal fluid levels of soluble amyloid precursor protein and amyloid beta 〔J〕.J Neurochem，2016；139(2)：324-32.

19Boushey CJ，Beresford SA，Omenn GS，etal.A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease.Probable benefits of increasing folic acid intakes 〔J〕.JAMA，1995；274(13)：1049-57.

20Leblhuber F，Walli J，Artner-Dworzak E，etal.Hyperhomocysteinemia in dementia 〔J〕 J Neural Transm，2000；107(12)：1469-74.

21Seshadri S，Beiser A，Selhub J，etal.Plasma homocysteine as a risk factor for dementia and Alzheimer′s disease 〔J〕.N Engl J Med，2002；346(7)：476-83.

22McCaddon A，Hudson P，Abrahamsson L，etal.ageing and aberrant assimilation of vitamin B12 in Alzheimer′s disease 〔J〕.Dement Geriatr Cogn Disord，2001；12(2)：133-7.

23Morris MS.Homocysteine and Alzheimer′s disease 〔J〕.Lancet Neurol，2003；2(7)：425-8.

24Seshadri S.Elevated plasma homocysteine levels：risk factor or risk marker for the development of dementia and Alzheimer′s disease〔J〕?J Alzheimers Dis，2006；9(4)：393-8.

25Fuso A，Nicolia V，Cavallaro RA，etal.B-vitamin deprivation induces hyperhomocysteinemia and brain S-adenosylhomocysteine，depletes brain S-adenosylmethionine，and enhances PS1 and BACE expression and amyloid-beta deposition in mice 〔J〕.Mol Cell Neurosci，2008；37(4)：731-46.

26Zhuo JM，Pratico D.Acceleration of brain amyloidosis in an Alzheimer′s disease mouse model by a folate，vitamin B6 and B12-deficient diet 〔J〕.Exp Gerontol，2010；45(3)：195-201.

27Chan A，Tchantchou F，Rogers EJ，etal.Dietary deficiency increases presenilin expression，gamma-secretase activity，and Abeta levels：potentiation by ApoE genotype and alleviation by S-adenosyl methionine 〔J〕.J Neurochem，2009；110(3)：831-6.

28Hinterberger M，F(xiàn)ischer P.Folate and Alzheimer：when time matters 〔J〕.J Neural Transm，2013；120(1)：211-24.

29Duthie SJ.Folate and cancer：how DNA damage，repair and methylation impact on colon carcinogenesis 〔J〕.J Inherit Metab Dis，2011；34(1)：101-9.

30Fuso A，Cavallaro RA，Zampelli A，etal.gamma-Secretase is differentially modulated by alterations of homocysteine cycle in neuroblastoma and glioblastoma cells 〔J〕.J Alzheimers Dis，2007；11(3)：275-90.

31Wang X，Wang W，Li L，etal.Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in Alzheimer′s disease 〔J〕.Biochim Biophys Acta，2014；1842(8):1240-7.

32Miller JW.Vitamin B12 deficiency，tumor necrosis factor-alpha，and epidermal growth factor：a novel function for vitamin B12 〔J〕?Nutr Rev，2002；60(5 Pt 1)：142-4.

33Ghemrawi R，Pooya S，Lorentz S，etal.Decreased vitamin B12 availability induces ER stress through impaired SIRT1-deacetylation of HSF1 〔J〕.Cell Death Dis，2013；4：e553.

34Seetharam B，Yammani RR.Cobalamin transport proteins and their cell-surface receptors 〔J〕.Expert Rev Mol Med，2003；5(18)：1-18.

35Rosenblatt DS，Hosack A，Matiaszuk NV，etal.Defect in vitamin B12 release from lysosomes：newly described inborn error of vitamin B12 metabolism 〔J〕.Science，1985；228(4705)：1319-21.

36Coelho D，Kim JC，Miousse IR，etal.Mutations in ABCD4 cause a new inborn error of vitamin B12 metabolism 〔J〕.Nat Genet，2012；4(10)：1152-5.

37Rutsch F，Gailus S，Miousse IR，etal.Identification of a putative lysosomalcobalamin exporter altered in the cblF defect of vitamin B12 metabolism 〔J〕.Nat Genet，2009；41(2)：234-9.

38Zhao H，Li H，Ruberu K，etal.Impaired lysosomalcobalamin transport in Alzheimer′s disease 〔J〕.J Alzheimers Dis，2015；43(3)：1017-30.

39Toh BH，van Driel IR，Gleeson PA.Pernicious anemia 〔J〕.N Engl J Med，1997；337(20)：1441-8.

40Douaud G，Refsum H，de Jager CA，etal.Preventing Alzheimer′s disease-related gray matter atrophy by B-vitamin treatment 〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2013；110(23)：9523-8.

41Roth JR，Lawrence JG，Bobik TA.Cobalamin (coenzyme B12)：synthesis and biological significance 〔J〕.Annu Rev Microbiol，1996；50(1)：137-81.

42Stabler SP，Brass EP，Marcell PD，etal.Inhibition of cobalamin-dependent enzymes by cobalamin analogues in rats 〔J〕.J Clin Invest，1991；87(4)：1422-30.

43Teng F，Bito T，Takenaka S，etal.Vitamin B12〔c-lactone〕，a biologically inactive corrinoid compound，occurs in cultured and dried lion′s mane mushroom (Hericiumerinaceus) fruiting bodies 〔J〕.J Agric Food Chem，2014；62(7)：1726-32.