尿泛素-核糖體結(jié)合蛋白52、尿微量清蛋白、尿視黃醇結(jié)合蛋白聯(lián)檢在早期糖尿病腎損傷診斷中的價值

陸松松　康　蕊　李學茹　張　曼

(北京大學人民醫(yī)院檢驗科尿液細胞分子診斷北京市重點實驗室，北京　100044)

1北京世紀壇醫(yī)院檢驗科

糖尿病腎病是糖尿病較常見的并發(fā)癥，癥狀不顯著且起病較隱匿，極易造成漏診〔1〕。一般情況下，若患者不及時進行診斷，患者出現(xiàn)蛋白尿后，即使控制血糖，也極易造成腎功能受損加重，并可能誘發(fā)腎衰竭〔2〕。傳統(tǒng)腎活檢具有明顯的創(chuàng)傷性，尋找早期評估糖尿病腎損傷的敏感指標是現(xiàn)階段的主要追求〔3〕。本文旨在探討尿泛素-核糖體結(jié)合蛋白(UBA)-52、尿微量清蛋白(U-mAlb)、尿視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)在評估早期糖尿病腎損傷的價值。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2015年1月至2016年12月北京大學人民醫(yī)院收治的224例糖尿病患者及同期50名健康體檢老年人，年齡60～87〔平均(68.49±2.19)〕歲，男122例，女102例。所有患者依照臨床診斷結(jié)果分為3組，80例糖尿病腎損傷尿蛋白陽性組(A組)，年齡61～84〔平均(67.64±1.98)〕歲，男51例，女29例；肌酐清除率<80 ml/min，尿蛋白>150 mg/d。70例糖尿病腎損傷尿蛋白陰性組(B組)，年齡60～86〔平均(68.19±2.03)〕歲，男48例，女22例；肌酐清除率<80 ml/min，尿蛋白≤150 mg/d。74例糖尿病無損傷組(C組),年齡62～87〔平均(68.61±2.19)〕歲，男49例，女25例；肌酐清除率為80～120 ml/min，尿蛋白≤150 mg/d。對照組無糖尿病，年齡60～89〔平均(69.03±3.21)歲，男32例，女18例，肌酐清除率為80～120 ml/min，尿蛋白≤150 mg/d。4組一般資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。入組標準：(1)糖尿病病程≥5年；(2)血壓控制良好，舒張壓低于90 mmHg，收縮壓低于140 mmHg；(3)患者對本研究知情同意。排除標準：(1)患者存在惡性腫瘤；(2)系統(tǒng)性感染者；(3)慢性心力衰竭者；(4)除糖尿病因素外，其他因素誘發(fā)的繼發(fā)性或原發(fā)性腎臟疾病。

1.2方法采集患者晨尿5 ml，3 000 r/min離心10 min，收集上清置于-80℃冰箱保存。后集中采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測尿中UAB-52及RBP水平，UAB-52試劑盒(Elabscience，E-EL-H2371)購自上海恪敏生物科技有限公司，RBP試劑盒(bluegene，elisa kits)購自上海藍基生物科技有限公司，嚴格遵照試劑盒說明書進行操作。采用全自動生化分析儀檢測尿中U-mAlb水平，遵照儀器操作規(guī)程進行操作。

1.3陽性判斷標準參照文獻〔4〕設定陽性標準，UBA-52>3 μg/L為UBA-52陽性；U-mAlb>30 mg/L為U-mAlb陽性；RBP>3.0 mg/L為RBP陽性。

1.4統(tǒng)計學方法使用SPSS10.0軟件行t檢驗及χ2檢驗。

2　結(jié)　果

2.1各組3項指標檢測結(jié)果A組尿中UAB-52、U-mAlb、RBP水平顯著高于其余3組，B組均顯著高于C組及對照組(均P<0.05)，但C組與對照組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2各組3項指標陽性檢出率A組尿中UAB-52、U-mAlb、RBP陽性檢出率顯著高于其余3組，B組均顯著高于C組及對照組(均P<0.05)，但C組與對照組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

2.33項指標對早期糖尿病腎損傷的診斷價值單獨檢測尿中UAB-52、U-mAlb、RBP水平的標準誤顯著高于三指標聯(lián)合檢測，且三指標聯(lián)合檢測敏感性顯著高于單獨檢測一指標(均P<0.05)，見表3。

表1　各組3項指標檢測比較

與對照組比較:1)P<0.05；與C組比較:2)P<0.05；與B組比較:3)P<0.05；下表同

表2　各組3項指標陽性檢出率比較〔n(%)〕

表3　3項指標對早期糖尿病腎損傷的診斷價值

與聯(lián)合檢測相比:1)P<0.05；AUC：曲線下面積

3　討　論

糖尿病腎病是危險性最大的并發(fā)癥之一。有研究指出，腎小球濾過率增加是糖尿病腎病的主要臨床表現(xiàn)，若不及時干預當發(fā)展至Ⅲ期時，常導致尿中微量白蛋白水平升高，并導致體液潴留、蛋白尿、血壓升高，并最終誘發(fā)腎衰竭〔5，6〕。有學者指出，早期腎小球基底膜輕度增厚、腎小球肥大、腎臟系膜細胞輕度增生，進一步發(fā)展為系膜基質(zhì)增生及腎小球基底膜彌散性增厚，并可能表現(xiàn)為腎小球結(jié)節(jié)性硬化癥〔7，8〕。早期糖尿病腎病多無明顯癥狀，若在早期進行干預，可將病情控制在早期微量白蛋白尿期，甚至可能逆轉(zhuǎn)病情〔9〕。但當患者出現(xiàn)大量蛋白尿時，已出現(xiàn)不可逆轉(zhuǎn)性損傷，此時進行干預則療效有限〔10〕。在糖尿病腎病早期若可快速診斷，并進行干預具有極其重要的臨床意義。

UBA-52是重要的泛素分子游離前體，也是重要的水解蛋白，也是糖尿病腎病患者尿液中重要的特異性蛋白，且尿中UBA-52水平與血中血糖水平呈正相關〔11〕。有研究指出，腎臟纖維化多條信號通路中，UBA-52是重要的蛋白調(diào)節(jié)分子，若信號通路活化過度，則極易誘發(fā)腎臟纖維化〔12〕。有研究顯示，腎小管上皮細胞是UBA-52在腎臟中的主要聚集地，可特異性調(diào)節(jié)蛋白降解，并參與細胞內(nèi)信號蛋白、胞膜受體的泛素修飾、識別密切相關〔13〕。一般情況下，UBA-52在尿液中的含量極低，當腎小球受損時常導致尿液中UBA-52水平異常升高。本研究結(jié)果表明糖尿病腎損傷患者尿中UBA-52水平明顯升高，可能參與了糖尿病腎病的早期發(fā)生與發(fā)展，可通過檢測尿中UBA-52水平評估患者糖尿病腎病損傷程度，糖尿病腎病早期進行評估時，UBA-52具有較高的特異度。

正常情況下，U-mAlb在尿液中含量極低，但當腎臟受損時，患者腎小球可能出現(xiàn)電荷屏蔽及體積屏蔽受損，導致腎臟的U-mAlb排泄量顯著增高〔14〕。RBP是人體中重要的小分子蛋白，當血中甲狀腺轉(zhuǎn)運蛋白、視黃醇與RBP結(jié)合并形成復合體后，導致腎小球濾過難度加大。一般情況下，僅有微量RBP可從血中自由通過腎小球，導致尿中RBP含量極低。但當腎臟受損后，可明顯降低腎臟功能，使更多RBP通過腎小球，增高尿中RBP水平。有研究發(fā)現(xiàn)，相較于健康人群，糖尿病患者尿中RBP水平明顯偏高，且陽性率也顯著增加〔15〕。本研究結(jié)果提示，在診斷早期糖尿病腎損傷時具有較高的敏感性。聯(lián)合檢測尿中UBA52、U-mAlb及RBP水平，可從多角度評估腎功能受損情況，彌補單一評估指標的局限性，明顯提高診斷效能，具有較高的臨床應用價值。

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