美洲大蠊粉對腹瀉小鼠治療的效果

王巧利，王俊剛，申 紅，張玉棟，閆文靜

(1.石河子大學農(nóng)學院，新疆石河子　832000；2.石河子大學動物科技學院，新疆石河子　832000)

0　引 言

【研究意義】美洲大蠊是世界性的衛(wèi)生害蟲，雖然能夠傳播多種疾病，但它也具有一定的藥用價值，因其體內(nèi)含有凝集素、抗菌肽、溶菌酶、脂肪酸等豐富的活性物質(zhì)，同時，富含蛋白質(zhì)、氨基酸、礦質(zhì)元素、微量元素，可見其具有較高的藥用和營養(yǎng)價值[1-7]?！厩叭搜芯窟M展】近年來，對美洲大蠊主要集中在藥用的研究，以其為原料研發(fā)出了相應的產(chǎn)品，如康復新，在治療腸潰瘍、肺結核、消化等疾病中取得了一定的療效[8-10]，其水提粗體物具有抗肝纖維化的藥效[11]。周瓊等通過灌胃其粉末發(fā)現(xiàn)其對腹瀉小鼠具有一定的療效，且能夠提高肉雞免疫與抗氧化能力[12-13]，治療雞白痢等[14]。這些都主要集中在美洲大蠊體內(nèi)活性物質(zhì)的提取及蟲體全粉藥用的研究?！颈狙芯壳腥朦c】由細菌感染所引起的腹瀉是威脅人類健康的主要疾病之一，主要治療藥物是抗生素，但隨著抗生素的大量使用，使得機體出現(xiàn)了許多耐藥性菌株，給治療該疾病造成了種種困難，而美洲大蠊在瘀血、腹脹、腹瀉等疾病具有一定的療效。研究小鼠飼料添加劑美洲大蠊粉對腹瀉小鼠腹瀉率、稀便率、體重、采食量、飲水量的影響。【擬解決的關鍵問題】按一定比列將美洲大蠊全粉末添加于小鼠飼料中，研究其對腹瀉小鼠的影響，為美洲大蠊粉藥用價值提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材 料

1.1.1美洲大蠊粉

將飼養(yǎng)于石河子大學農(nóng)學院生物防治實驗室的美洲大蠊低溫處死，用流動水洗掉其表面雜物，在35℃恒溫箱中烘干至恒重，粉碎備用。

1.1.2小鼠飼料

由石河子大學實驗動物中心提供。

1.1.3動物

明種小鼠，由石河子大學實驗動物中心提供。

1.1.4試劑

NaCl、蒸餾水、濾紙。

1.1.5儀器

電子天平(精確度為0.01 mg)、超重水系統(tǒng)。

1.2方 法

1.2.1試劑配制

將0.9 g的NaCl融于100 mL的盛有無菌水的燒杯中，置于4℃冰箱中備用。

1.2.2動物分組與處理

試驗于2016年7～11月于石河子大學農(nóng)學院生防實驗室進行。測試為期22 d,適應期7 d,建腹瀉模型5 d,治療期10 d。試驗選取健康昆明種小鼠，體重為(20±2) g，待其適應一周后，按體重相近隨機分組，空白組10只，模型組60只。模型組腹腔注射0.02 mL/g (3×108CFU)的大腸桿菌菌懸液，空白組注射等劑量無菌生理鹽水，建模成功后，將模型組再次分為模型對照組和治療組，治療組分別為高劑量治療組、中劑量治療組和低劑量治療組， 10只/組，5只/籠，飼喂含美洲大蠊粉劑量依次為8%、5%、2.5%的小鼠飼料[10-16]，而空白組、模型組對照組飼喂未添加美洲大蠊粉的同等量飼料，小鼠投喂飼料是55 g/籠/d，水是150 mL/籠/d ，連續(xù)10 d。

1.2.3測定指標

在1、3、5、7、9、11、13和15 d 的下午(16:00)觀察并記錄小鼠的腹瀉數(shù)、 2 h的稀便數(shù)、采食量、飲水量和體重，計算采食量、飲水量、腹瀉率、稀便率。

飲水量(mL) = 第1 d投放水總量(150 mL)-第2 d剩余量.

采食量(g)=第1 d投放飼料總量(55 g)-第2 d剩余量.

腹瀉率(%)=腹瀉動物數(shù)/動物總數(shù)×100%.

稀便率(%)=稀便數(shù)/排便總數(shù)×100%.

1.3數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0進行處理，采用One-Way ANOVA分析，采用多重比較LDS法 ，P<0.05為顯著水平。

2　結果與分析

2.1美洲大蠊粉對腹瀉小鼠體重的影響

在建模期間 (1～5 d )體重的變化，與空白組相比，在1 d，模型組無顯著差異(P>0.05)，在3～5 d，模型組差異顯著(P<0.05),在治療期(6～15 d)，即在小鼠飼料中添加不同劑量(高、中、低)的美洲大蠊粉，與模型組相比，在7 d，高、中、低劑量組無顯著差異(P>0.05)，空白對照組差異顯著(P<0.05)，在9 d,高、中、低和空白對照組無顯著差異(P>0.05)，在11 d，低劑量組無顯著差異(P>0.05)，高、中、空白組間差異顯著(P<0.05)，在13～15 d，中、低劑量組無顯著差異(P>0.05)，高劑量組、空白組差異顯著(P<0.05)。在11 d，高、中、空白組與低劑量組無顯著差異(P>0.05)。在13～15 d，高劑量組與低劑量組差異顯著(P<0.05)，與中劑量組無顯著差異(P>0.05)。表1

2.2美洲大蠊粉對腹瀉小鼠飲水量的影響

在建模期間 (1～5 d )飲水量的變化，與空白對照組相比，在1 d，無顯著差異(P>0.05)，3～5 d，差異顯著(P<0.05)；在治療期間 ( 6～15 d )飲水量的變化，與模型組相比，在7 d，高、中、低劑量組無顯著差異(P>0.05)，空白組差異顯著(P<0.05)，在9 d，高、中、空白組差異顯著(P<0.05)，低劑量組差異不顯著(P>0.05)，在11 d,高、中、低、空白組無顯著差異(P>0.05)，在13 d,空白組、中、低劑量組無顯著差異(P>0.05)，高劑量組差異顯著(P<0.05)，在15 d,中、低無顯著差異(P>0.05)，空白組與高劑量組差異顯著(P<0.05)。在9 d，中劑量組與低劑量組差異不顯著(P>0.05)。表2

表1不同劑量美洲大蠊粉下小鼠體重的變化
Table1The effects of Periplaneta americana powder to the body weight of diarrhea model mice

處理Treatments體重Bodyweight(g)1d3d5d7d9d11d13d15d空白組Blankgroup20 44±0 39a23 17±0 32a25 64±0 79a27 40±0 65a27 99±0 57a28 49±1 03a29 35±1 16a32 49±1 02a模型組Modelgroup20 76±0 56a20 34±0 75b20 65±0 60b21 28±0 61b20 87±0 59a22 64±0 67b24 51±0 79b26 33±0 74b高劑量組Highdosegroup20 30±0 52a20 14±0 66b20 26±0 65b21 12±0 79b22 93±0 68a25 97±0 42a29 46±0 61a31 33±0 62a中劑量組Mediumdosegroup20 37±0 34a20 78±0 56b20 75±0 48b22 31±0 61b22 58±0 86a23 46±0 68a26 94±0 55ab28 45±0 40b低劑量組lowdosegroup20 87±0 36a20 74±0 34b20 80±0 47b21 97±0 51b22 86±0 79a24 07±1 04ab25 90±1 00b27 08±0 73b

注：表中相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)，1～5 d,建立腹瀉模型期， 6～15 d,美洲大蠊粉治療期，下同

表2不同劑量美洲大蠊粉下小鼠飲水量的變化
Table2The effects of Periplaneta americana powder on water intake of diarrhea model mice

處理Treatments飲水量Waterintake(mL)1d3d5d7d9d11d13d15d空白組Blankgroup20 25±2 25a24 75±0 25a25 00±2 00a26 50±0 50a21 50±2 50a21 50±4 50a21 50±4 50ab22 50±1 50a模型組Modelgroup15 50±4 00a13 5±0 50b14 00±2 00b17 50±1 50bc12 00±1 00c13 00±1 00a13 00±1 00b12 00±1 00b高劑量組Highdosegroup12 75±0 25a12 00±1 00b13 75±1 25b22 50±2 50ab21 50±0 50a21 00±2 00a21 00±2 00a22 50±1 50a中劑量組Mediumdposegrou17 50±0 01a18 5±0 50ab14 75±1 25b20 50±2 50abc18 50±1 50ab19 00±2 00a19 00±2 00ab17 00±2 00b低劑量組lowdosegroup17 00±6 00a20 00±4 00b16 50±3 50b15 00±2 00c15 00±1 00bc17 50±3 50a17 50±3 50ab17 00±0 13b

2.3美洲大蠊粉對腹瀉小鼠采食量的影響

在建模期間 (1～5 d )采食量變化，與空白對照組相比，在1 d，無顯著差異 (P>0.05)，在3～5 d,差異顯著(P<0.05)。在治療期(6～15 d)采食量變化，與模型組相比，在7～9 d，無顯著差異(P>0.05)，在11 d，低劑量組無顯著差異(P>0.05)，空白組、高劑量組、中劑量組差異顯著(P<0.05)，在13 d，高、中、低劑量組差異顯著(P<0.05)，在15 d，高、中、低劑量組無顯著差異(P>0.05)，空白對照組差異顯著(P<0.05)。表3

表3不同劑量美洲大蠊粉下小鼠采食量的變化
Table3The effects of Periplaneta americana powder on feed intake of diarrhea model mice

處理Treatments采食量(g)1d3d5d7d9d11d13d15d空白組Blankgroup35 46±2 78a31 23±0 25a32 42±1 95a34 74±2 25a35 50±3 29a37 35±3 94a35 77±2 50a36 33±2 10a模型組Modelgroup22 18±1 36ab20 27±0 08d18 03±3 78b23 60±1 33a26 74±1 10a23 18±0 71b22 58±1 11b23 94±1 05b高劑量組Highdosegroup24 18±4 68ab21 51±0 04cd15 30±3 92b30 28±4 23a38 72±3 10a37 22±1 05a37 98±0 70a38 33±0 84b中劑量組Mediumdposegrou27 83±0 18ab23 55±1 48c17 28±0 81b31 35±5 65a34 85±6 38a34 90±5 48a33 41±4 87a34 76±5 03b低劑量組lowdosegroup26 10±3 69ab26 66±0 49d22 45±0 12b30 50±3 30a32 46±1 35a31 44±0 70ab33 40±0 57a33 57±1 11b

2.4美洲大蠊粉對腹瀉率和稀便率的影響

在建模期間(1～5 d)，與空白對照組相比，腹瀉率和稀便率增加，在治療期(6～15 d)，與模型組相比，各治療組腹瀉率和稀便率隨著時間的增加而逐漸的降低，即療效是高劑量組>中劑量組>低劑量組。表4，表5

表4不同劑量美洲大蠊粉下小鼠腹瀉率的變化
Table4The effects of Periplaneta americana powder on diarrhea rate of diarrhea model mice (%)

處理Treatments腹瀉率(%)1d3d5d7d9d11d13d15d空白組Blankgroup00000000模型組Modelgroup20 0060 0092 0090 0080 0080 0080 0080 00高劑量組Highdosegroup20 0073 0085 0060 0050 0030 0020 0020 00中劑量組Mediumdposegrou33 0060 0093 0070 0060 0050 0050 0040 00低劑量組lowdosegroup20 0020 0087 0080 0070 0060 0060 0050 00

表5不同劑量美洲大蠊粉下小鼠稀便率的變化
Table5The effects of Periplaneta americana powder on defecation rate of diarrhea model mice (%)

組別Treatments稀便率(%)1d3d5d7d9d11d13d15d空白組Blankgroup00000000模型組Modelgroup69 2351 7254 8462 548 1551 7256 6764 29高劑量組Highdosegroup46 6750 0057 1440 6340 7436 3629 1616 67中劑量組Highdosegroup40 0051 8559 2648 3944 8335 0030 0023 08低劑量組lowdosegroup40 0056 0057 6951 7250 0045 4538 0938 09

3　討 論

美洲大蠊粉中含有凝集素、抗菌肽、溶菌酶、脂肪酸、微量元素等豐富的天然活性物質(zhì)，使得美洲大蠊粉具有一藥多用的效果，擴大了其藥用范圍，如有提高免疫，降血脂等作用[17]。美洲大蠊粉無毒，飼用安全[18]。

美洲大蠊表皮中含有幾丁質(zhì)、油脂中的不飽和脂肪酸都具有抗菌的作用[18]，美洲大蠊醇提物制劑康復新液具有促進血管增生、組織修復作用[9-10,19]；心脈隆制劑對幼兔心肌缺血癥具有一定的保護作用[20]；醇提物油能抑制小鼠s180腫瘤增長，提高免疫[21]，可見其同一提取物含有多種藥效。研究發(fā)現(xiàn)將一定的比例的美洲大蠊粉添加到小鼠飼料中，其能提高腹瀉小鼠體重、飲水量和采食量，降低腹瀉小鼠的腹瀉率和稀便率，腹瀉小鼠體重、飲水量和采食量與時間呈正相關，腹瀉小鼠的腹瀉率和稀便率與時間呈負相關，且不同劑量組之間有差異，這與美洲大蠊體內(nèi)含有的藥效成分有關。在建立腹瀉模型期間，與空白對照組相比，采食量、飲水量和體重均無顯著差異(P>0.05)，表明腹瀉對小鼠的采食量、飲水量和體重沒有影響，在治療期間，不同劑量美洲大蠊粉能降低小鼠的腹瀉率和稀便率，其高劑量組和中劑量組抑制效果顯著，低劑量治療效果不顯著。這與周瓊[22]通過灌胃美洲大蠊粉發(fā)現(xiàn)其具有抗腹瀉的作用一致，且飼喂操作簡單、方便，對動物模型造成的傷害小，更有利于美洲大蠊粉抗腹瀉的研究。但兩者說明美洲大蠊粉都可提高機體抗應激能力，增加動物抗腹瀉能力。研究僅僅集中在美洲大蠊粉藥用的基礎研究，其含有的抗腹瀉活性成分及抗腹瀉的作用機理還有待進一步研究。

4　結 論

4.1腹瀉引起小鼠稀便率、腹瀉率的增加，采食量，飲水量、體重增長緩慢，并與時間成正比關系。

4.2鼠料中添加不同劑量的美洲大蠊粉，降低了小鼠的稀便率與腹瀉率，使采食量，飲水量、體重增長迅速，并與時間呈正效應關系。

參考文獻(References)

[1] Ghasemidehkordi, P., Doosti, A., Doosti, E., Noshadi, E., & Arshi, A. (2016). Antimicrobial susceptibility patterns of escherichia coli isolates from cockroaches in southwestern Iran.BulgarianJournalofVeterinaryMedicine, 19(1):63-71.

[2] 孫星衍.神農(nóng)本草經(jīng)[M]北京: 商務印書館,1955:90.

SUN Xing-yan.( 1955).ShenNong'sMateriaMedica[M]. Beijing: The Commercial Press: 90. (in Chinese)

[3] Kawasaki, K., Kubo, T., & Natori, S. (1993). A novel role of Periplanetale ctinasanopsonin to recognize 2-keto-3-deoxyocto nateresidues of bacterial lipopolysaccharides [J].CompBiochemPhysiolB, 106(3):675- 680.

[4] 胡少鵬,劉福祥,楊紅.美洲大蠊提取物體外抑制牙齦卟啉單胞菌的生長[J].國際口腔醫(yī)學雜志,2009, 36(5):506-508.

HU Shao-peng, LIU Fu-xiang, YANG Hong.(2009).Effects of Periplaneta americana Extracts on the Growth of Porphyromonas gingivalis in Vitro [J].JournalofInternationalStomatology, 36(5): 506-508. (in Chinese)

[5] Wharton, D. R. A. (1969). Lysozyme retention by cockroach periplaneta americana l[J].Science, 163(3863): 183-184.

[6] Jurenka, R. A., De, R. M., & Blomquist, G. J. (1987). De novo biosynthesis of polyunsaturated fatty acids in the cockroach periplaneta americana[J].ArchivesofBiochemistry&Biophysics, 255(1):184-193.

[7] 唐霞光,張春妹,劉嘉,等.美洲大蠊不同提取物清除自由基及抗脂質(zhì)過氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2016,37(13):83-85.

TANG Xia-guang, ZHANG Chun-mei, LIU Jia, et al. (2016). Research of the effect of Periplaneta Americana different extracts on scavenging free radical and anti-lipid perxidation [J].ScienceandTechnologyofFoodIndustry, 37(13): 83-85. (in Chinese)

[8] 劉玉媛.天然藥物康復新液的臨床應用[J].天津藥學，2006,18(3):55-56.

LIU Yu-yuan. (2006). Application of Natural Medicine Rejuvenating Liquid [J].TianjinPharmacy, 18(3): 55-56. (in Chinese)

[9] 王俊明,何學華,李宏清.康復新液保留灌腸治療26例潰瘍性結腸炎[J].西部醫(yī)學,2006,18(5):629.

WANG Jun-ming, HE Xue-hua, LI Hong-qing.( 2006). Treatment of 26 cases of ulcerative colitis with rehabilitation new liquid retention enema [J].MedicalJournalofWestChina, 18(5): 629. (in Chinese)

[10]高黎黎,王魯平,李光輝.康復新的臨床新用途[J].中國誤診學雜志,2006, 7(6):1 390-1 393.

GAO Li-li, WANG Lu-ping, LI Guang-hui. (2006). New clinical applications for rehabilitation [J].ChineseJournalofMisdiagnostics, 6(7): 1,390-1,393. (in Chinese)

[11]王艷榮,王利娜,張秋瓚,等.美洲大蠊提取物對實驗性肝纖維化大鼠的保護作用[J].天津醫(yī)藥,2013,15(12): 1 195-1 198.

WANG Yan-rong, WANG Li-na, ZHANG Qiu-zan, et al.( 2013). Protective effects of Periplaneta americana extract on experimental hepatic fibrosis rats [J].TianjinPharmaceutical, 15(12): 1,195-1,198. (in Chinese)

[12]周瓊,李忠榮,劉景,等. 美洲大蠊對肉雞免疫功能與抗氧化能力的影響[J].福建農(nóng)林大學學報(自然科學版),2009,38(2):175-180.

ZHOU Qiong, LI Zhong-rong, LIU Jing, et al. (2009). Effect of Periplaneta americana meal on immunity and antioxidation of broliers [J].JournalofFujianAgricultureandForestryUniversity(NaturalScienceEdition) , 38(2): 175-180. (in Chinese)

[13] Liu, L. P., & Jian-Ping, Y. U. (2008). Analysis and evaluation of nutritional of aspongopus chinensis dallas.FoodScience, 29(2):406-410.

[14]湯雁利,李罡,李啟艷. 康復新藥理作用的研究進展[J].西北藥學雜志,2014,29(1): 103-106.

TANG Yan-li, Li-gang, LI Qi-yan. (2014). Research advances in pharmacological action of Kangfuxin [J].NorthwestPharmaceuticalJournal, 29(1): 103-106. (in Chinese)

[15]李晨晨,熊永愛,譚承佳,等. 美洲大蠊對小鼠急性酒精性肝損傷的藥理作用研究[J]. 世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2014, 16 (4):758-761.

LI Chen-Chen, XIONG Yong-Ai, TAN Cheng-Jia. et al. ( 2014). Studies on pharmacological effects of Periplaneta americana on acute alcoholic liver injury in mice [J].WorldScienceandTechnology-ModernizationofTraditionalChineseMedicine, 16 (4): 758-761. (in Chinese)

[16]危紅萍,張麗宏,楊雯. 美洲大蠊90天飼喂大鼠結果分析[C]//.中國藥學大會暨第十四屆中國藥師周論文集, 2014.

DENG Hong-ping, ZHANG Li-hong, YANG Wen. (2014).Analysisoftheresultsofratcockroachfor90days[C]//. Proceedings of Chinese Pharmacy Congress and the 14th Chinese Pharmacists' Week.

[17]周瓊,吳珍泉,李忠榮,等. 美洲大蠊對低免疫力小鼠免疫功能的影響[J]. 福建農(nóng)林大學學報(自然科學版),2008,37(5):519-522.

ZHOU Qiong, WU Zhen-quan, LI Zhong-rong, et al.(2008). Effects of Periplaneta americana on immune function in mice with low immunity [J].JournalofFujianAgricultureandForestryUniversity(NaturalScienceEdition) , 37(5): 519-522. (in Chinese)

[18]李旸,王芳,張普照,等. 美洲大蠊化學成分研究[J]. 中藥材,2015,38(10):2 038-2 041.

LI Yang, WANG Fang, ZHANG Pu-zhao, et al.(2015). Chemical Constituents from Periplaneta americana [J].JournalofChineseMedicinalMaterials, 38(10): 2,038-2,041. (in Chinese)

[19]劉遠錦,陳明松,盧致意,等. 康復新液保留灌腸聯(lián)合口服美沙拉嗪治療潰瘍性結腸炎的效果觀察[J]. 中國當代醫(yī)藥,2015,22(2):85-87.

LIU Yuan-jin, CHEN Ming-song, LU Zhi-yi, at al. (2015). Effect observation of Kangfuxin solution for retention enema combined with oral administration of mesalazine in the treatment of ulcerative colitis [J].ChinaModernMedicine, 22(2): 85-87. (in Chinese)

[20]曹洪曉,鐘榮梅,吳星恒.心脈龍對幼兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].江西醫(yī)學院學報,2009,49(10):15-18.

CAO Hong-xiao, ZHONG Rong-mei, WU Xing-heng. (2009). The Protection of Xinmailong Against Reperfusion Injury in Immature Rabbits Myocardial Ischemia [J].ActaAcademiaeMedicinaeJiangxi, 49(10): 15-18. (in Chinese)

[21]程才芬,林文琴,黃厚聘.蟑螂油對人食管癌小鼠異種移植的抗癌作用[J].中草藥,1986,17(6):38.

CHENG Cai-fen, LIN Wen-qin, HUANG Hou-pin. (1986). Anticancer effects of cockroach oil on xenotransplantation of human esophageal carcinoma mice [J].ChineseTraditionalMedicine, 17(6): 38. (in Chinese)

[22]周瓊,吳珍泉,李忠榮,等.美洲大蠊粉對腹瀉小鼠腸道修復的影響[J]. 福建農(nóng)業(yè)學報,2008,23(2):125-131.

ZHOU Qiong, WU Zhen-quan, LI Zhong-rong, et al. (2008). The reparation effect of dried Periplaneta Americana L. meal on mice intestinal dysfunction from diarrhea in a model study [J].FujianJournalofAgriculturalSciences, 23(2): 125-131. (in Chinese)