尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子-2、P53及Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

吳春平，劉艷彩，趙嶺嶺

（衡水市第四人民醫(yī)院病理科，河北 衡水 053000）

直腸癌是指從齒狀線至直乙結(jié)腸交界處之間的惡性腫瘤。根據(jù)我院病理科的調(diào)查統(tǒng)計，近十年來直腸癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢且患者的發(fā)病年齡趨于年輕化。對此病患者進(jìn)行手術(shù)治療難以徹底清除其病灶。因此，分析直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)成為進(jìn)行臨床研究的熱點(diǎn)。尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子-2（CDX-2）、腫瘤抑制因子P53和核蛋白Ki-67均是具有較高敏感性的腸上皮特異標(biāo)志物[1]。關(guān)于進(jìn)行CDX-2、P53和Ki-67的聯(lián)合檢測在評估直腸癌患者病情進(jìn)展及預(yù)后方面的臨床價值，目前臨床上的報道仍較少。本次研究主要探討CDX-2、P53及Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)及對直腸癌患者進(jìn)行CDX-2、P53及Ki-67聯(lián)合檢測的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本及來源

本研究中的標(biāo)本為2014年12月至2017年6月衡水市第四人民醫(yī)院病理科采集的70例直腸癌組織標(biāo)本（在對患者進(jìn)行手術(shù)時采集）及20例正常直腸粘膜組織（在對其進(jìn)行直腸鏡檢時采集）。在為患者采集這些標(biāo)本前，其均未進(jìn)行過相關(guān)的治療。在70例直腸癌組織標(biāo)本中，組織學(xué)分型為中-高分化型的標(biāo)本有43例，為低分化型的標(biāo)本有27例；其中相應(yīng)腫瘤的最長徑＜5 cm的標(biāo)本有21例，相應(yīng)腫瘤的最長徑≥5 cm的標(biāo)本有49 例；其中相應(yīng)腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本有44例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本有26例；其中相應(yīng)腫瘤的浸潤深度＜1/2肌層的標(biāo)本有22例，≥1/2肌層的標(biāo)本有48例；其中相應(yīng)腫瘤臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的標(biāo)本有22例，為Ⅲ+Ⅳ期的標(biāo)本有48例。

1.2 試劑及方法

本研究中所用的兔抗人CDX-2、P53及Ki-67單抗、羊封閉血清、ElivisionTM 試劑盒、DAB等材料均購自北京中杉金橋生物有限公司。將所有的組織標(biāo)本用10%的福爾馬林進(jìn)行固定，然后分別制成4張切片，對其中1張組織切片進(jìn)行蘇木-伊紅染色，將其余3張組織切片制成防脫載玻片。采用ElivisionTM plus二步法對組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，在進(jìn)行陰性對照時加入一抗（PBS）。分別檢測CDX-2、P53及Ki-67在本組直腸癌組織標(biāo)本和正常直腸組織標(biāo)本中表達(dá)的情況。由2名病理醫(yī)生在對本次研究不知情的前提下對檢測結(jié)果進(jìn)行計數(shù)，隨機(jī)選取5個高倍視野（400x）計算每100個細(xì)胞中CDX-2、P53及Ki-67表達(dá)呈陽性的細(xì)胞數(shù)，取其平均值作為檢測數(shù)值，CDX-2、P53、Ki-67表達(dá)呈陽性的細(xì)胞數(shù)若≤30%可判定其表達(dá)呈陰性，若＞30%可判定其表達(dá)呈陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用%表示，采用X2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CDX-2、P53及Ki-67在本組直腸癌組織及正常直腸粘膜組織中表達(dá)的情況

CDX-2、P53及Ki-67在正常直腸粘膜組織中表達(dá)的陽性率分別為80%(16/20)、0、0，在直腸癌組織中表達(dá)的陽性率分別為 32.85%(23/70)、77.1%（54/70）、65.7%（46/70）（詳見圖1、圖2、圖3）。與在正常直腸粘膜組織中表達(dá)的陽性率相比，CDX-2在直腸癌組織中表達(dá)的陽性率較低，P53及Ki-67在直腸癌組織中表達(dá)的陽性率較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（X2=15.25、38.57、26.88，P＜0.01）。

圖1經(jīng)免疫組化檢測CDX-2表達(dá)（SPχ200）

圖2經(jīng)免疫組化檢測P53表達(dá)（SPχ200）

圖3經(jīng)免疫組化檢測Ki-67表達(dá)（SPχ200）

2.2 CDX-2、P53及Ki-67在本組直腸癌組織中的表達(dá)與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系

CDX-2、P53及Ki-67在本組直腸癌組織中表達(dá)的陽性率與直腸癌患者腫瘤的大小無相關(guān)性（P＞0.05），與直腸癌患者的腫瘤組織是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及浸潤的深度均有相關(guān)性（P＜0.05）。P53在本組直腸癌組織中表達(dá)的陽性率與直腸癌患者腫瘤分化程度的高低無相關(guān)性（P＞0.05）。CDX-2及Ki-67在本組直腸癌組織中表達(dá)的陽性率與直腸癌患者腫瘤分化程度的高低有相關(guān)性（P＜0.05）。詳見表2。

表1 CDX-2、P53及Ki-67在直腸癌組織及正常直腸粘膜組織中表達(dá)的情況（n=90)

表2 CDX-2、P53及Ki-67在直腸癌組織中的表達(dá)與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

直腸癌患者在進(jìn)行手術(shù)治療時其腫瘤病灶難以被徹底切除，其病情在術(shù)后易復(fù)發(fā)，腫瘤組織侵襲重要器官是其主要的死亡原因[2]。CDX-2是胚胎發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子，在腸道上皮中呈高表達(dá)，在其他器官中均無表達(dá)[3]。研究發(fā)現(xiàn)，腸道上皮中缺失CDX-2會導(dǎo)致消化道畸形發(fā)育，出現(xiàn)多發(fā)息肉病變及鱗狀上皮化生，進(jìn)而可誘導(dǎo)細(xì)胞惡變和腫瘤的發(fā)生[4]。p53基因的缺失與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。一般認(rèn)為，p53的過表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后不良有關(guān)[5]。本次研究的結(jié)果顯示，CDX-2在直腸癌標(biāo)本中的表達(dá)率（32.85%）低于其在正常直腸粘膜中的表達(dá)率（80%），P53和Ki-67在直腸癌標(biāo)本中的表達(dá)率（77.1%）高于其在正常直腸粘膜中的表達(dá)率（65.7%）?？梢?，CDX-2的減少可促進(jìn)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化成腫瘤細(xì)胞[6]，CDX-2可能是抑癌基因。這一結(jié)論與以往的報道相符合[7]。

Ki-67在直腸癌組織中表達(dá)的高低與直腸癌的分化程度、TNM分期、浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后均密切相關(guān)[8]。研究發(fā)現(xiàn)，直腸癌與正常腸黏膜中Ki-67的表達(dá)具有明顯的差異。直腸癌的分化越差，其組織中Ki-67的強(qiáng)表達(dá)率就越高，其增殖活性也越高。進(jìn)行Ki-67檢測可以客觀地反映直腸癌的分化程度。人體內(nèi)P53和Ki-67與CDX-2的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)。人體內(nèi)CDX-2的表達(dá)缺少可促進(jìn)正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在腫瘤發(fā)生后P53的表達(dá)可增多，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖，使處于增殖期的腫瘤細(xì)胞明顯增多。

本次研究的結(jié)果證實，CDX-2、P53及Ki-67的表達(dá)在直腸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移中均可起到重要的作用。進(jìn)行CDX-2、P53及Ki-67的聯(lián)合檢測可為直腸癌的篩查、診斷、療效分析及制定個性化的治療方案提供重要的臨床依據(jù)。

[1]胡澤成，趙華.結(jié)直腸腫瘤標(biāo)志物 CDX-2的研究現(xiàn)狀[J].中國普通外科雜志，2008,17(4) ：391-393.

[2]李玉林，第六版病理學(xué)[M].北京，人民衛(wèi)生出版社,1979:103

[3]沈李偉，杜利力，翟愛民，等. CDX-2與腸源性腫瘤的研究進(jìn)展.Chinese Journal of Medcinial Guide[J].2010,12(2):244-245

[4]Qin, Yang，Hua min, Wang ，Hyun Y, Cho et al. Carcinoma of müllerian origin presenting as colorectal cancer: a clinicopa thologic study of 13 Cases.Annals of diagnostic pathology[J].2011，15(1)：8-12

[5]張志云，雷新益，吉祖進(jìn)，等 .凋亡相關(guān)基因 P53和 PDCD5 表達(dá)水平對結(jié)腸癌的分級和預(yù)后影響[J].中華普外科手術(shù)學(xué)雜志,2016,10(2):137-139

[6]Dang LH，Chcn F,Ymg C，et a1.CDΧ2 tumorigenic potcndal in the human colon cancer lines lovo and sw4S[J].Oncoge，2006,25(5)：2264-2272.

[7]張健，應(yīng)榮超，魏威，等.尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子-2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及與轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].中華內(nèi)分泌雜志[J].2014,8（6）:479-481

[8]Liu M , Lawson G , Delos M, et al. Predictive value of the frac tionof cancer cells imm unolabel ed for proliferating cell nu clear antigenor Ki-67 in biopsie s of hea d and ne ck carcin omas to identify lymphno demetas tasis : compariso n with cl inical and radio logic ex amiinations[J]. Head Neck[J], 2013,25(4) :280-288.