溫和灸腎俞穴對衰老大鼠血清MDA及肝腎功能的影響

馬金丹，黃 艷，顧沐恩，方臻臻，馬 喆，趙 琛，殷之光*

（1.上海中醫(yī)藥大學，上海 201203；2.上海市針灸經絡研究所，上海 200030）

世界衛(wèi)生組織（WHO）明確強調：健康壽命比壽命更重要，最終目的是提高人口的健康壽命[1-3]。本課題組以往開展了有關針灸延緩衰老的臨床研究，結果顯示，艾灸可明顯改善老年人衰老相關癥狀，增強老年人外周血單個核細胞Bcl-2、PKC 表達[4]，并從衰老相關基因篩選、衰老信號傳導通路調控等方面研究艾灸抗衰老的調控機制[5]。但衰老的發(fā)生發(fā)展是機體功能狀態(tài)的時空漸變，隨時間的漸進性，衰老的進程由密變疏逐步弱化而衰退[6]。因此，現階段關于抗衰老的研究熱點已從方法與手段過渡到時序方案。本研究基于自然衰老大鼠模型，通過檢測大鼠血清MDA含量變化，觀察不同時序艾灸腎俞穴延緩衰老效應，并探索長期艾灸腎俞穴的安全性，為進一步闡明衰老的發(fā)病機制及不同時機艾灸延緩衰老的作用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 動物 選用12月齡，體質量（600±20）g，雄性清潔級SD大鼠40只（上海中醫(yī)藥大學動物實驗中心）；溫度22～27 ℃，相對濕度為50%～70%。所有大鼠自由飲水進食，進行適應性飼養(yǎng)，1周后如無不良反應，飲食飲水正常，則可納入正式實驗。

1.2 試劑與儀器 特制細艾條（南陽漢醫(yī)艾絨有限責任公司）。TBA試劑盒（南京建成生物研究所）；ELISA試劑盒（上海源葉生物有限公司）。

1.3 分組與治療

1.3.1 分組 40只大鼠隨機分為4組，分別為24月齡對照組、艾灸1組、艾灸2組、18月齡對照組，每組10只。

1.3.2 治療 18月齡對照組（n = 10）：飼養(yǎng)至18月齡，不進行治療。24月齡對照組（n = 10）：飼養(yǎng)至24月齡，不進行治療。艾灸1組（n = 10）：從大鼠12月齡開始艾灸腎俞穴（穴位定位參照李忠仁主編《實驗針灸學》，中國中醫(yī)藥出版社，2003），采用直徑5 mm小艾條點燃后在距離穴位2 cm處施灸，兩側腎俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至18月齡，再飼養(yǎng)至24月齡。艾灸2組（n = 10）：從大鼠18月齡開始艾灸腎俞穴，采用直徑5 mm小艾條點燃后在距離穴位2 cm處施灸，兩側腎俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至24月齡。

1.4 標本采集 18月齡對照組大鼠于飼養(yǎng)至18月齡時處死取材，其余4組均在24月齡時處死取材。實驗結束后，大鼠24 h禁食、不禁水。2%戊巴比妥鈉50 mg/kg行腹腔注射，待大鼠麻醉后，取腹主動脈血4～5 mL，離心制備血清待檢。

1.5 指標檢測 采用TBA方法檢測各組大鼠血清MDA含量變化。采用ELISA方法檢測各組大鼠血清丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）以及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量變化。

1.6 統計學方法 采用SPSS 13.0 統計軟件進行數據分析。計量資料數據服從正態(tài)分布，采用均數±標準差（）表示；不服從正態(tài)分布，則以中位數（四分位間距）M（Q）表示。數據方差齊時，采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差法（LSD）；方差不齊時采用Games-Howell比較組間差異。數據不符合正態(tài)分布，組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗，兩兩比較則采用Mann-Whitney U檢驗。檢驗水準為α = 0.05。

2 結果

2.1 最終納入實驗各組大鼠數量 18月齡對照組大鼠沒有出現死亡情況，24月齡對照組大鼠死亡2只、艾灸1組大鼠死亡2只，艾灸2組死亡2只，故最終納入實驗的為18月齡對照組（n = 10）、24月齡對照組（n = 8）、艾灸1組（n = 8）、艾灸2組（n = 8）。2.2 大鼠血清MDA含量的比較 見表1。

表1 大鼠血清MDA含量比較（） nmol/mL

表1 大鼠血清MDA含量比較（） nmol/mL

注：與18月齡對照組比較，## P＜0.01；與24月齡對照組比較，△△ P＜0.01

組 別 n MDA 18月齡對照組 10 2.09±0.85 24月齡對照組 8 4.36±0.55##艾灸1組 8 2.46±0.77△△艾灸2組 8 2.12±0.67△△

2.3 各組大鼠血清AST、ALT水平比較 見表2。

表2 各組大鼠血清ALT、AST水平比較 U/L

2.4 各組大鼠血清CRE、BUN水平比較 見表3。

表3 各組大鼠血清CRE、BUN水平比較（x±s）

3 討論

腎俞穴出自《靈樞·背腧》，別名少陰俞，與腎相應，屬足太陽膀胱經。腎俞穴是腎中精氣輸注的部位，中醫(yī)認為，通過刺激腎俞穴能夠益精補腎、培補腎元，又可以緩解腰肌勞損[7-8]。現代醫(yī)學研究[9-10]認為，刺激腎俞穴可以通過抗氧化、提高免疫力、改善神經內分泌等途徑達到延緩衰老的目的。

抗衰老治療已經廣泛并運用在人體衰老的進程中，研究[11-12]認為，對于不同時間艾灸干預的對衰老的干預效應不同，針灸在不同時間窗的介入對機體產生的生物學效應存在差異。本研究中，艾灸1組從大鼠12月齡開始艾灸，灸至18月齡，灸時半年，即從大鼠壯年期開始灸至初老期；艾灸2組從大鼠18月齡灸至24月齡，灸時也為半年，即從大鼠初老期灸至衰老期，比較艾灸介入時間的不同。結果顯示，衰老大鼠血清MDA水平升高，而2組艾灸組對MDA的影響效應相當，可以推測，對于氧化應激所致衰老，艾灸1組與艾灸2組的時間對其影響并無明顯差別。而對BUN的調節(jié)，艾灸2組的調節(jié)作用更明顯，這也可能與艾灸1組介入時間較早，其效應未能持續(xù)至24月齡有關。

MDA的水平高低可以直接反應出機體氧自由基水平，以及過氧化反應的強度和速率，是反映因過氧化導致機體組織和細胞損傷程度的重要指標[13]。因此MDA作為氧化應激系統的重要指標被廣泛研究[14]。本實驗結果顯示，衰老大鼠血清MDA水平隨著組織的衰老而逐漸升高，艾灸腎俞穴可以通過降低自然衰老大鼠腎血清MDA水平，產生抗衰老作用。本研究結果顯示，各組大鼠血清MDA的表達：與18月齡對照組比較，24月齡對照組大鼠血清MDA含量明顯升高，與24月齡對照組比較，艾灸1組、艾灸2組血清MDA水平均有明顯降低（P＜0.01），但不同介入時間比較，艾灸1組與艾灸2組并無統計學意義。

本研究結果表明，與18月齡對照組比較，24月齡對照組大鼠血清ALT、BUN含量明顯升高，而艾灸后艾灸1組、艾灸2組血清ALT及AST表達與24月齡對照組比較無差異，艾灸2組大鼠血清BUN水平降低。提示了本研究所采用的艾灸療程與劑量，對自然衰老大鼠肝功能無損害，并且對其腎功能有一定的改善作用。這也與祖國醫(yī)學理論中的“治未病”概念相符合[15]。

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