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    豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗血清學(xué)效力檢驗(yàn)與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)相關(guān)性研究

    2018-04-16 02:11:42藏玉婷張春媛
    飼料博覽 2018年3期
    關(guān)鍵詞:二聯(lián)中和胃腸炎

    藏玉婷,張春媛

    ( 哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司研發(fā)中心,哈爾濱 150069)

    豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)是引起豬腹瀉的重要病原,主要引起兩周齡以內(nèi)仔豬發(fā)生以急性腹瀉、脫水及高死亡率為特征的豬傳染性胃腸炎(TGE),該病給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。我國(guó)從20世紀(jì)50年代起就有豬傳染性胃腸炎的報(bào)道,并且一直在我國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)時(shí)有發(fā)生,尤其是冬季和早春寒冷季節(jié)常呈地方性爆發(fā)流行,給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成極大的危害[2]。豬流行性腹瀉病毒可以引起豬流行腹瀉(PED),該病多在寒冷的冬季發(fā)生,臨床上主要以嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、脫水和高死亡率為特征[3]。

    早期預(yù)防對(duì)控制TGE和PED十分重要,使用疫苗預(yù)防接種有較大的實(shí)踐意義,我國(guó)于1973年首次出現(xiàn),1995年開(kāi)始使用豬流行腹瀉與豬傳染性胃腸炎二聯(lián)滅活疫苗和弱毒疫苗,其對(duì)該病的控制起到了積極的作用,但2010年10月以來(lái),豬流行性腹瀉在我國(guó)多個(gè)省爆發(fā)流行,并且表現(xiàn)出新的特征[4-6]。因此,本文分離了現(xiàn)地流行毒株制備豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(JL株+HN-1株),以明確該滅活疫苗中和抗體效價(jià)與靶動(dòng)物攻毒保護(hù)相關(guān)性為目的進(jìn)行了研究。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 疫苗

    豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(JL株+HN-1株),3批實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品,批號(hào)為201601、201602、201603,由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備。

    1.1.2 檢驗(yàn)用強(qiáng)毒

    豬傳染性胃腸炎病毒JL株,批號(hào)為TGEV-Q-201601,病毒含量107.50TCID50/0.2 mL;豬流行性腹瀉病HN-1株,批號(hào):PEDV-Q-201601,病毒含量107.38TCID50/mL,由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備、鑒定、保存。

    1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

    TGEV、PEDV中和抗體均≤1∶4母豬所產(chǎn)3~5日齡健康仔豬,購(gòu)自黑龍江省哈爾濱市郊某豬場(chǎng),品種為長(zhǎng)白。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 分組與免疫

    將3批疫苗分別經(jīng)頸部肌肉接種于3~5日齡的仔豬20頭·組-1,共免疫60頭,另設(shè)20頭作為對(duì)照,試驗(yàn)分組情況見(jiàn)表1。

    1.2.2 抗體檢測(cè)

    仔豬免疫后14及21 d,分別采集10頭·組-1免疫仔豬和10頭對(duì)照仔豬的血液,對(duì)每組的其中5頭仔豬血清中TGEV中和抗體進(jìn)行測(cè)定;每組的另5頭仔豬測(cè)定血清中PEDV中和抗體。

    1.2.3 免疫攻毒

    免疫后14 d,將測(cè)定TGEV中和抗體的仔豬分別口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒,每頭2.0 mL,將測(cè)定PEDV中和抗體的仔豬分別口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒,每頭2.0 mL;免疫后21 d,將測(cè)定TGEV中和抗體的仔豬分別口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒攻毒,每頭3.0 mL,將測(cè)定PEDV中和抗體的仔豬分別口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒,每頭3.0 mL;攻毒后連續(xù)14 d觀察臨床發(fā)病情況;以無(wú)臨床癥狀作為保護(hù),計(jì)算各組的保護(hù)率。

    2 試驗(yàn)結(jié)果

    2.1 仔豬免疫后TGEV中和抗體檢測(cè)與攻毒保護(hù)結(jié)果

    仔豬免疫后14、21 d,每組隨機(jī)選5頭仔豬分別采血,測(cè)定TGEV中和抗體,并口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒。

    由表2、表3可知,免疫后14 d至少4/5免疫豬產(chǎn)生了≥1∶32的TGEV中和抗體;免疫后21 d所有免疫仔豬的中和抗體效價(jià)都≥1∶32,而對(duì)照仔豬的中和抗體效價(jià)均≤1∶4。攻毒結(jié)果表明,當(dāng)TGEV中和抗體達(dá)到1∶32時(shí)可完全保護(hù)仔豬不發(fā)病。

    2.2 仔豬免疫后PEDV中和抗體檢測(cè)與攻毒保護(hù)結(jié)果

    仔豬免疫后14、21 d,每組隨機(jī)選5頭仔豬分別采血,測(cè)定PEDV中和抗體,并口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒。

    由表4、表5可知,免疫后14 d各仔豬均產(chǎn)生了低水平的PEDV中和抗體,只有少數(shù)仔豬的中和抗效價(jià)達(dá)到了1∶16;免疫后21 d所有免疫仔豬的中和抗體效價(jià)都≥1∶16,而對(duì)照組仔豬的中和抗體效價(jià)均≤1∶4。攻毒結(jié)果表明,當(dāng)PEDV中和抗體效價(jià)達(dá)到達(dá)到1∶16時(shí)完全保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊。

    表1 試驗(yàn)仔豬分組免疫攻毒情況

    表2 仔豬免疫后14 d TGEV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

    表3 仔豬免疫后21 d TGEV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

    續(xù)表

    表4 仔豬免疫后14 d PEDV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

    表5 仔豬免疫后21 d PEDV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

    3 結(jié) 論

    TGEV中和抗體水平與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)具有相關(guān)性,當(dāng)TGEV中和抗體水平≥1∶32時(shí),能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒的攻擊;達(dá)1∶22時(shí)可部分保護(hù)免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒攻擊。

    PEDV中和抗體水平與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)同樣具有相關(guān)性,當(dāng)PEDV中和抗體水平≥1∶16時(shí),能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊;達(dá)1∶13時(shí)可部分保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒攻擊。

    對(duì)于TGEV,免疫后14 d所有免疫仔豬均可檢測(cè)到TGEV中和抗體(1∶16~1∶40),但免疫組免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒的攻擊保護(hù)率>80%,免疫后21 d中和抗體效價(jià)明顯上升,所有免疫仔豬的TGEV中和抗體均≥1∶16(1∶32~1∶64),能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒的攻擊。而對(duì)于PEDV,免疫后14 d所有免疫仔豬均可檢測(cè)到PEDV中和抗體(1∶8~1∶16),但免疫組免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊保護(hù)率僅為40%,免疫后21 d中和抗體效價(jià)明顯上升,所有免疫仔豬的PEDV中和抗體均≥1∶16(1∶16~1∶32),能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] 殷震,劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)(第二版)[M].北京:科學(xué)出版社,1997.

    [2] 王憲文,畢英佐,于康震,等.豬傳染性胃腸炎病毒基因工程研究進(jìn)展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2004(2):2-4.

    [3] 楊春華,王強(qiáng),王毅,等.豬流行性腹瀉的診斷與科學(xué)防治[J]. 畜牧與飼料科學(xué),2009,30(7/8):34-36.

    [4] 錢永清,鄒勇.豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎病及其防制[J].國(guó)外畜牧學(xué)-豬與禽,2007,27(1):57-60.

    [5] 佟有恩,馬思奇,李偉杰,等.豬傳染性胃腸炎與豬流行性腹瀉二聯(lián)弱毒疫苗的研究[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),1999,21(6):406-410.

    [6] 施標(biāo),董世娟,朱于敏,等.中國(guó)豬流行性腹瀉病毒分子流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,46(20):4 362-4 369.

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