豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗血清學(xué)效力檢驗(yàn)與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)相關(guān)性研究

藏玉婷，張春媛

（ 哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司研發(fā)中心，哈爾濱 150069）

豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）是引起豬腹瀉的重要病原，主要引起兩周齡以內(nèi)仔豬發(fā)生以急性腹瀉、脫水及高死亡率為特征的豬傳染性胃腸炎（TGE），該病給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。我國(guó)從20世紀(jì)50年代起就有豬傳染性胃腸炎的報(bào)道，并且一直在我國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)時(shí)有發(fā)生，尤其是冬季和早春寒冷季節(jié)常呈地方性爆發(fā)流行，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成極大的危害[2]。豬流行性腹瀉病毒可以引起豬流行腹瀉（PED），該病多在寒冷的冬季發(fā)生，臨床上主要以嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、脫水和高死亡率為特征[3]。

早期預(yù)防對(duì)控制TGE和PED十分重要，使用疫苗預(yù)防接種有較大的實(shí)踐意義，我國(guó)于1973年首次出現(xiàn)，1995年開(kāi)始使用豬流行腹瀉與豬傳染性胃腸炎二聯(lián)滅活疫苗和弱毒疫苗，其對(duì)該病的控制起到了積極的作用，但2010年10月以來(lái)，豬流行性腹瀉在我國(guó)多個(gè)省爆發(fā)流行，并且表現(xiàn)出新的特征[4-6]。因此，本文分離了現(xiàn)地流行毒株制備豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+HN-1株），以明確該滅活疫苗中和抗體效價(jià)與靶動(dòng)物攻毒保護(hù)相關(guān)性為目的進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 疫苗

豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+HN-1株），3批實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，批號(hào)為201601、201602、201603，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備。

1.1.2 檢驗(yàn)用強(qiáng)毒

豬傳染性胃腸炎病毒JL株，批號(hào)為TGEV-Q-201601，病毒含量107.50TCID50/0.2 mL；豬流行性腹瀉病HN-1株，批號(hào)：PEDV-Q-201601，病毒含量107.38TCID50/mL，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備、鑒定、保存。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

TGEV、PEDV中和抗體均≤1∶4母豬所產(chǎn)3～5日齡健康仔豬，購(gòu)自黑龍江省哈爾濱市郊某豬場(chǎng)，品種為長(zhǎng)白。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分組與免疫

將3批疫苗分別經(jīng)頸部肌肉接種于3～5日齡的仔豬20頭·組-1，共免疫60頭，另設(shè)20頭作為對(duì)照，試驗(yàn)分組情況見(jiàn)表1。

1.2.2 抗體檢測(cè)

仔豬免疫后14及21 d，分別采集10頭·組-1免疫仔豬和10頭對(duì)照仔豬的血液，對(duì)每組的其中5頭仔豬血清中TGEV中和抗體進(jìn)行測(cè)定；每組的另5頭仔豬測(cè)定血清中PEDV中和抗體。

1.2.3 免疫攻毒

免疫后14 d，將測(cè)定TGEV中和抗體的仔豬分別口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒，每頭2.0 mL，將測(cè)定PEDV中和抗體的仔豬分別口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒，每頭2.0 mL；免疫后21 d，將測(cè)定TGEV中和抗體的仔豬分別口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒攻毒，每頭3.0 mL，將測(cè)定PEDV中和抗體的仔豬分別口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒，每頭3.0 mL；攻毒后連續(xù)14 d觀察臨床發(fā)病情況；以無(wú)臨床癥狀作為保護(hù)，計(jì)算各組的保護(hù)率。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 仔豬免疫后TGEV中和抗體檢測(cè)與攻毒保護(hù)結(jié)果

仔豬免疫后14、21 d，每組隨機(jī)選5頭仔豬分別采血，測(cè)定TGEV中和抗體，并口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒。

由表2、表3可知，免疫后14 d至少4/5免疫豬產(chǎn)生了≥1∶32的TGEV中和抗體；免疫后21 d所有免疫仔豬的中和抗體效價(jià)都≥1∶32，而對(duì)照仔豬的中和抗體效價(jià)均≤1∶4。攻毒結(jié)果表明，當(dāng)TGEV中和抗體達(dá)到1∶32時(shí)可完全保護(hù)仔豬不發(fā)病。

2.2 仔豬免疫后PEDV中和抗體檢測(cè)與攻毒保護(hù)結(jié)果

仔豬免疫后14、21 d，每組隨機(jī)選5頭仔豬分別采血，測(cè)定PEDV中和抗體，并口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒。

由表4、表5可知，免疫后14 d各仔豬均產(chǎn)生了低水平的PEDV中和抗體，只有少數(shù)仔豬的中和抗效價(jià)達(dá)到了1∶16；免疫后21 d所有免疫仔豬的中和抗體效價(jià)都≥1∶16，而對(duì)照組仔豬的中和抗體效價(jià)均≤1∶4。攻毒結(jié)果表明，當(dāng)PEDV中和抗體效價(jià)達(dá)到達(dá)到1∶16時(shí)完全保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊。

表1 試驗(yàn)仔豬分組免疫攻毒情況

表2 仔豬免疫后14 d TGEV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

表3 仔豬免疫后21 d TGEV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

續(xù)表

表4 仔豬免疫后14 d PEDV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

表5 仔豬免疫后21 d PEDV中和抗體與攻毒保護(hù)的相關(guān)性

3 結(jié) 論

TGEV中和抗體水平與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)具有相關(guān)性，當(dāng)TGEV中和抗體水平≥1∶32時(shí)，能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒的攻擊；達(dá)1∶22時(shí)可部分保護(hù)免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒攻擊。

PEDV中和抗體水平與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)同樣具有相關(guān)性，當(dāng)PEDV中和抗體水平≥1∶16時(shí)，能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊；達(dá)1∶13時(shí)可部分保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒攻擊。

對(duì)于TGEV，免疫后14 d所有免疫仔豬均可檢測(cè)到TGEV中和抗體（1∶16～1∶40），但免疫組免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒的攻擊保護(hù)率＞80%，免疫后21 d中和抗體效價(jià)明顯上升，所有免疫仔豬的TGEV中和抗體均≥1∶16（1∶32～1∶64），能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗TGEV強(qiáng)毒的攻擊。而對(duì)于PEDV，免疫后14 d所有免疫仔豬均可檢測(cè)到PEDV中和抗體（1∶8～1∶16），但免疫組免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊保護(hù)率僅為40%，免疫后21 d中和抗體效價(jià)明顯上升，所有免疫仔豬的PEDV中和抗體均≥1∶16（1∶16～1∶32），能完全保護(hù)免疫仔豬抵抗PEDV強(qiáng)毒的攻擊。

[參考文獻(xiàn)]

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