豬瘟疫苗在豬場的免疫評(píng)估

翟志安，崔尚金

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100000）

通過對(duì)近10年來的調(diào)查，國內(nèi)豬場的豬瘟疫苗免疫覆蓋率可以說是100%，沒有發(fā)現(xiàn)哪個(gè)豬場不免疫豬瘟疫苗。但免疫程序卻有較大不同，次數(shù)不同，劑量不同，間隔時(shí)間不同，后備豬群：配種前免疫2～3次，1～4頭份/次；種豬群大概有2種免疫方式，l)全群免疫：每次1～4頭份不等，①全群普免，每年3～4次，每3～4月1次；②春秋普防，3～4月份，免疫2次，間隔3～4周；9～10月份，免疫2次，間隔3～4周；2)跟胎免疫：每次1～4頭份不等，①跟胎1次，產(chǎn)后2～4周；②跟胎2次，產(chǎn)后2～4周，間隔3～4周，第2次免疫。商品豬群，有些豬場仍然采取乳前免疫(超前免疫)l頭份；仔豬群首免時(shí)間，3～5周齡，1～2頭份；二免時(shí)間：7～9周齡，1～2頭份[1]。

在國內(nèi)豬場，豬瘟疫苗得以廣泛應(yīng)用，但免疫效果到底如何呢？許多中小型豬場基本是通過臨床是否發(fā)病來判斷疫苗效果；集團(tuán)化、大型豬場大都進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)予以判定。2017年第2季度對(duì)4個(gè)不同省份28個(gè)豬場的豬瘟抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同胎次組母豬豬瘟抗體水平不同(見表1)：4～7胎母豬抗體水平顯著低后備母豬和l～3胎母豬。所以說，母豬胎次對(duì)豬場豬瘟杭體合格率有重要影響，及時(shí)淘汰生產(chǎn)繁殖性能差的老齡母豬不僅有助于提高母豬場生產(chǎn)成績，也有助于提升豬群豬瘟抗體水平。

同樣的這28個(gè)豬場，其商品豬群不同周齡段的豬瘟抗體水平也有不同，如表2所示，3～4周齡、6～7周齡段的豬群豬瘟抗體水平偏低。在仔豬首免前的抗體，主要是母源抗體，可見母源抗體在3～4周齡豬群中已有相當(dāng)大的消失；6～7周齡的豬群豬瘟抗體有所下降，這部分豬群大都是首免1～2周后不等的豬群；10周齡豬群，是首免4～5周不等的豬群，也是加強(qiáng)免疫前后1周左右的豬群。12周齡豬群抗體陽性率最高。這些抗體是疫苗免疫產(chǎn)生還是由野毒感染刺激產(chǎn)生，該檢測(cè)技術(shù)沒有進(jìn)行區(qū)分?？傮w來看，商品豬群豬瘟抗體陽性率并不高。

在2016年對(duì)23省份457份血清樣品檢測(cè)(圖1，李曉成研究員資料)發(fā)現(xiàn)，保育豬群的抗體陽性率最低，其次是生長育肥豬群。

表1　不同胎次母豬抗體水平

表2　不同周齡段豬瘟抗體水平

圖1　2016年不同生長階段豬群抗體陽性率

母豬群的抗體陽性率與2017年的數(shù)據(jù)非常接近，差異較大的是哺乳仔豬群與上述3～4周齡豬群的抗體陽性率。總之，種豬群免疫率100%，陽性率80%以上；保育豬群陽性率較低，低于70%。仔豬群首免(斷奶前后)與加強(qiáng)免疫之間，大約有4～5周時(shí)間，抗體陽性率比較低，這是個(gè)普遍現(xiàn)象。

在這樣的免疫狀態(tài)下，某些豬場雖然豬群100%免疫，但仍有豬瘟發(fā)生的情形。說明這樣的免疫狀態(tài)是不安全的，是疫苗質(zhì)控方面，如抗原含量及批次生產(chǎn)的穩(wěn)定性，出現(xiàn)了什么問題？還是疫苗冷鏈管理(疫苗運(yùn)輸、貯存、稀釋、注射）出現(xiàn)了漏洞？或許，疫苗毒株保護(hù)力對(duì)現(xiàn)在豬場野毒保護(hù)力下降？免疫程序制定、修訂、實(shí)施的不夠合理、到位？群免疫密度沒有達(dá)到100%？免疫操作粗放？還是機(jī)體免疫應(yīng)答弱？豬群健康狀態(tài)(營養(yǎng)、毒素、應(yīng)激、其他疾病……)不佳？或者豬場生物安全措施管理疏忽？豬群流動(dòng)管理異常？目前，我們尚沒有一個(gè)很好的評(píng)估機(jī)制來全面評(píng)估這些問題。一旦出現(xiàn)問題，不容易正確全面地找出原因，很多時(shí)候就是采取一個(gè)模糊策略，問題解決了以后，也不知道采取的手段哪些是有效的；還有個(gè)問題，就是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的數(shù)據(jù)是一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，而不是一個(gè)連續(xù)的動(dòng)態(tài)的線，不能借助檢測(cè)數(shù)據(jù)等評(píng)估手段正確預(yù)警。

當(dāng)下我們所要做的，就是要制定適合豬群的合理免疫程序，發(fā)揮出現(xiàn)有疫苗的應(yīng)有效果。值得說明的是，免疫程序制定應(yīng)建立在科學(xué)檢測(cè)的基礎(chǔ)上，必須了解：1)豬瘟抗體消長規(guī)律；2)豬體排毒方式；3)豬群臨床癥狀；4)豬瘟疫苗起效時(shí)間和免疫保護(hù)時(shí)長以及其他疫苗對(duì)豬瘟疫苗的影響；5)存在的其他豬病免疫程序制定后，要對(duì)免疫實(shí)施后的各生產(chǎn)階段豬群進(jìn)行抗體、病原監(jiān)測(cè)，及生產(chǎn)成績?cè)u(píng)估，根據(jù)這些監(jiān)測(cè)、評(píng)估的數(shù)據(jù)，進(jìn)行分析，對(duì)免疫程序適時(shí)做出調(diào)整[1]；6)是否有其他免疫抑制病的干擾。

那么，如何科學(xué)地檢測(cè)豬瘟疫苗的免疫效果？下面就介紹一下不同試劑盒對(duì)豬瘟疫苗免疫效果檢測(cè)評(píng)價(jià)。

1　4種檢測(cè)方法評(píng)價(jià)疫苗免疫效果

如表3所示，67份豬瘟疫苗免疫血清樣品經(jīng)中和試驗(yàn)、IHA（間接血凝試驗(yàn)）、間接ELISA和阻斷ELISA檢測(cè)后，分別檢測(cè)出陽性樣品55份、48份、56份和59份，陽性率分別為82.09% ， 71.64%， 83.58% 和 88.06%，陽性率均大于我國農(nóng)業(yè)部要求的豬瘟群體免疫合格率70.0%的標(biāo)準(zhǔn)，所抽檢的豬群豬瘟疫苗免疫合格。

如表4所示，IHA、間接ELISA、阻斷ELISA與中和試驗(yàn)的總符合率分別為89.55%、92.53%和94.03%，符合率均較高。其中在陽性抗體的符合率方面，阻斷ELISA與中和試驗(yàn)的陽性抗體符合率達(dá)100%，而在陰性抗體的符合率方面，IHA與中和試驗(yàn)的陰性抗體符合率達(dá)100%。以IHA的符合率最低，敏感性最低，以阻斷ELISA的符合率最高，敏感性最強(qiáng)[2]。

2　3種檢測(cè)試劑盒與中和試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)

中和試驗(yàn)是《中國獸藥典》中法定的豬瘟抗體陰性豬篩選方法，可以認(rèn)為是豬瘟抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其準(zhǔn)確性無需置疑，但該方法需要用豬瘟活毒工作抗原和試驗(yàn)兔進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果易受試驗(yàn)豬個(gè)體差異、健康狀況和飼養(yǎng)環(huán)境等因素影響，且檢測(cè)周期長、工作量大及成本高。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，各種豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒不斷得到開發(fā)和推廣應(yīng)用，IHA、間接ELISA和阻斷ELISA 3種抗體檢測(cè)試劑盒與中和試驗(yàn)的符合率均在89%以上，3種抗體檢測(cè)試劑盒均具有良好的準(zhǔn)確性。IHA試劑盒檢測(cè)67份豬瘟疫苗免疫豬血清樣品的陽性率為71.64%，明顯低于中和試驗(yàn)、間接ELISA、阻斷ELISA方法的陽性率，IHA方法采用全病毒作為抗原，受抗原制備過程與病毒純化等方面的限制，導(dǎo)致了IHA方法敏感性較低，同時(shí)該方法還存在血清樣品需經(jīng)過滅活處理，檢測(cè)結(jié)果肉眼判讀、誤差大等缺陷，但該方法操作簡便、檢測(cè)反應(yīng)時(shí)間短且無需特殊儀器設(shè)備，特別適合基層實(shí)驗(yàn)室操作。ELISA采用基因工程重組蛋白作為抗原，其檢測(cè)的敏感性和特異性均大大提高，間接ELISA、阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)67份豬瘟疫苗免疫豬血清樣品的陽性率分別為83.58%和88.06%，阻斷ELISA的敏感性較間接ELISA更高，且ELISA方法具有微量、高通量等優(yōu)點(diǎn)，特別適合臨床大批量樣品的檢測(cè)，但ELISA方法尤其是阻斷ELISA方法操作較復(fù)雜，操作人員需要具有一定的獸醫(yī)技術(shù)水平，且需要酶標(biāo)儀等儀器設(shè)備，隨著我國基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的不斷建設(shè)與完善，ELISA檢測(cè)試劑盒將具有廣闊的發(fā)展空間和應(yīng)用前景。綜合來看，3種檢測(cè)試劑盒均具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，不同實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身試驗(yàn)條件合理選擇，或選擇2種檢測(cè)試劑盒聯(lián)合使用，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確與可靠。

表3　4種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果

表4　與中和試驗(yàn)的抗體陽性符合率

3　新型試劑盒診斷技術(shù)

王澤洲博士介紹了應(yīng)用鑭系元素做熒光標(biāo)記物建立一種既具有金標(biāo)層析技術(shù)簡單方便、快捷，又具有ELISA準(zhǔn)確、特異、敏感的豬瘟抗體鑭系免疫層析檢測(cè)試劑盒。鑭系熒光免疫層析方法(LFICA)是在時(shí)間分辨熒光免疫分析基礎(chǔ)上建立起來的一種超微量快速免疫檢測(cè)技術(shù)，它集合了酶標(biāo)記技術(shù)、放射標(biāo)記技術(shù)和同位素標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、無污染，且測(cè)定范圍寬，試劑盒壽命長，操作簡單和非放射性的優(yōu)點(diǎn)，越來越受到各科學(xué)領(lǐng)域科研工作者的關(guān)注。

Aruna Ambagala教授介紹了加拿大豬瘟的診斷和研究情況，詳細(xì)介紹了新開發(fā)出的一種快速檢測(cè)豬瘟的試劑盒，常溫保存、60 min出結(jié)果，在豬瘟感染后的2 d就可以檢測(cè)出、非常敏感，唯一的缺點(diǎn)是每次檢測(cè)的樣品數(shù)較少，只能檢測(cè)8個(gè)樣品[3]。

4　結(jié)語

豬瘟疫苗在我國養(yǎng)殖場已經(jīng)普免，但免疫程序和免疫效果各有不同，還存在許多弊端和隱形的問題需要解決，所以要及時(shí)診斷，科學(xué)選用疫苗[4]，制定科學(xué)合理的免疫程序，嚴(yán)格按照使用說明書正確使用疫苗，并利用先進(jìn)的試劑盒進(jìn)行免疫效果評(píng)估，不斷優(yōu)化免疫程序，不斷提高陽性抗體率和抗體維持保護(hù)時(shí)間。

[1] 朱連德.國內(nèi)豬場豬瘟免疫現(xiàn)狀及控制、凈化所面臨的主要挑戰(zhàn)[J].豬業(yè)科學(xué) ，2017，34(11)：54-55.

[2] 范振濤.3種豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒的比較與分析[J].中國動(dòng)物保健 ，2017，19(11)：15-17.

[3] 張金輝.2107豬瘟防控技術(shù)研討會(huì)精彩報(bào)告薈萃[J].豬業(yè)科學(xué) ，2017，34(11)：36-39.

[4] 胡圣林，張智瞳.豬瘟防控存在的問題及對(duì)策措施[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘 ，2017，33(11)：139-143.