眾談各類疫苗的免疫方案及免疫效果評(píng)估

本刊編輯/薛惠莉

疫苗免疫已經(jīng)成為豬場(chǎng)疾病防控的重要手段之一，關(guān)于疫苗的選擇、免疫程序的制定以及免疫效果的評(píng)估常常困擾著廣大養(yǎng)豬同仁，借助本次主題，我們邀請(qǐng)到了北京中科基金技術(shù)有限公司總經(jīng)理朱連德博士、新疆天康生物股份有限公司制藥事業(yè)部全國(guó)市場(chǎng)部總經(jīng)理周緒斌博士、環(huán)山集團(tuán)養(yǎng)豬事業(yè)部健康管理部總經(jīng)理曲向陽(yáng)博士、廣東省農(nóng)科院動(dòng)物衛(wèi)生研究所蔡汝健老師就相關(guān)問題進(jìn)行探討。

圖1　北京中科基金技術(shù)有限公司總經(jīng)理朱連德博士

圖2　新疆天康生物股份有限公司制藥事業(yè)部全國(guó)市場(chǎng)部總經(jīng)理周緒斌博士

圖3　環(huán)山集團(tuán)養(yǎng)豬事業(yè)部健康管理部總經(jīng)理曲向陽(yáng)博士

圖4　廣東省農(nóng)科院動(dòng)物衛(wèi)生研究所蔡汝健老師

本刊：“預(yù)防為主、防治結(jié)合”的理念已經(jīng)深入養(yǎng)豬生產(chǎn)者的心中，在國(guó)家和企業(yè)的推廣下，疫苗免疫工作已成為國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)日常工作內(nèi)容的“標(biāo)配”，那么關(guān)于疫苗的選擇及免疫程序的制定是基于什么樣的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)呢？

朱連德博士：1）判定區(qū)域內(nèi)或本豬場(chǎng)內(nèi)有沒有疾病病原的存在？有沒有疾病流行的風(fēng)險(xiǎn)？如果有，就應(yīng)該免疫預(yù)防；

2）選擇疫苗。疫苗應(yīng)安全、有效、使用方便及性價(jià)比高；

3）了解豬群疾病感染狀態(tài)。豬場(chǎng)生產(chǎn)模式、豬群流動(dòng)、生物安全措施等；

4）確定免疫目的。免疫控制，還是免疫凈化；

5）制定免疫程序。根據(jù)以下6點(diǎn)：①豬群感染節(jié)點(diǎn)——發(fā)病時(shí)間和疾病潛伏期，感染發(fā)病率；②免疫途徑；③疫苗免疫后起效時(shí)間；④疫苗免疫保護(hù)期；⑤疫苗與其他疫苗的干擾；⑥其他疾病對(duì)疫苗免疫的影響，制定個(gè)性化免疫程序；

6）臨床和實(shí)驗(yàn)室評(píng)估免疫效果，以校正免疫程序。

周緒斌博士：疾病防控確實(shí)應(yīng)遵循“預(yù)防為主、防治結(jié)合”，但豬病的預(yù)防最重要的第一關(guān)還是生物安全。疫苗免疫是豬病防控的重要手段和環(huán)節(jié)，免疫的方案和免疫程序的制定沒有普天下統(tǒng)一的模式，但有一些原則要遵循。包括：

1）了解地區(qū)流行的疾病類型。比如存在豬口蹄疫威脅，是O型還是A型，還是二者兼有？從而決定使用疫苗的種類；

2）政府的要求。有些疾病屬?gòu)?qiáng)制免疫內(nèi)容；

3）生物安全的水平。比如生物安全條件很高，地理位置優(yōu)越，離周邊村莊和農(nóng)場(chǎng)5 km之外，有空氣過(guò)濾裝置，不受空氣傳播性疾病的威脅，則豬藍(lán)耳病疫苗可以考慮不用注射；

4）養(yǎng)殖模式。是從分娩-育肥一條龍的模式，還是分娩-斷奶的多點(diǎn)式生產(chǎn)？如果是多點(diǎn)式生產(chǎn)，則豬藍(lán)耳病，豬偽狂犬病的危害要低很多，仔豬免疫的疫苗種類和頻率都要低。而一條龍的豬場(chǎng)則對(duì)豬藍(lán)耳病，豬偽狂犬病要加強(qiáng)免疫；

5）豬群健康狀況。從而確定免疫疫苗的種類和頻率；

6）母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，這對(duì)于豬瘟弱毒苗，豬偽狂犬病弱毒苗，豬口蹄疫疫苗都十分重要；

7）疫苗本身的免疫原性和疫苗的生產(chǎn)工藝。比如豬細(xì)小病毒疫苗，免疫原性非常好，甚至是終生免疫，而比如病毒性腹瀉疫苗，本身的免疫原性存在疑惑，并且有效保護(hù)持續(xù)的時(shí)間比較有限，就需要多次免疫。

曲向陽(yáng)博士：完整的免疫程序需要涵蓋疫苗種類、疫苗品牌、接種途徑、免疫時(shí)機(jī)、免疫次數(shù)、免疫劑量等幾個(gè)要素。同時(shí)應(yīng)做好免疫后的效果監(jiān)控。

1）疫苗種類：主要取決于豬群所面臨的疾病風(fēng)險(xiǎn)種類及商品化疫苗的效果、可獲得性、經(jīng)濟(jì)性等要素。如：圓環(huán)病毒普遍存在，商品化疫苗公認(rèn)效果較好，但價(jià)格相對(duì)較高或價(jià)差大且評(píng)價(jià)周期較長(zhǎng)，故科學(xué)、客觀的疫苗效果評(píng)價(jià)方案尤為關(guān)鍵。豬流感在冬春季節(jié)威脅較大，會(huì)造成母豬流產(chǎn)與育肥豬高熱、嚴(yán)重呼吸道問題，但商品化疫苗國(guó)內(nèi)剛上市，效果有待驗(yàn)證，經(jīng)濟(jì)性尚未評(píng)估，故此類在制定程序時(shí)，需要重點(diǎn)根據(jù)疫苗效果判斷免疫必要性；

2）疫苗品牌：目前主流豬用疫苗的備選產(chǎn)品過(guò)多，給臨床獸醫(yī)決策帶來(lái)很多困擾，急需建立一套客觀、科學(xué)的疫苗品質(zhì)評(píng)價(jià)方案或第三方機(jī)構(gòu)；

3）接種途徑：不同的疫苗有不同的接種途徑要求，如有的可噴鼻，有的必須注射，在免疫程序中需要明確；

4）免疫時(shí)機(jī)：對(duì)母豬群而言，有些疫苗主要保護(hù)母豬群，如：豬瘟、口蹄疫、豬偽狂犬病等，此類疫苗以群體免疫為主，每年2～4次，以取得母豬群免疫狀態(tài)的均一化，但可能會(huì)導(dǎo)致不同月份母源抗體持續(xù)期不同，可能影響到仔豬疫苗免疫時(shí)機(jī)的制定（如：口蹄疫、豬瘟等）。有些疫苗接種以保護(hù)仔豬為目的，如：大腸桿菌疫苗、PED疫苗等，此類疫苗應(yīng)在臨分娩前免疫。對(duì)于保育、育肥群而言，多數(shù)疫苗接種時(shí)需要考慮母源抗體干擾與免疫后保護(hù)持續(xù)期，如：母源抗體對(duì)豬瘟、口蹄疫等免疫應(yīng)答影響比較嚴(yán)重，需根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，重點(diǎn)考慮母源抗體的消減規(guī)律。母源抗體對(duì)支原體與圓環(huán)病毒疫苗的影響較小，需考慮臨床自然感染的時(shí)間點(diǎn)，免疫后保護(hù)產(chǎn)生所需要時(shí)間及免疫保護(hù)的維持期等因素；

5）免疫次數(shù)：與疫苗保護(hù)持續(xù)期有關(guān)，為了覆蓋到臨上市肥豬的免疫保護(hù)，保育育肥豬的免疫項(xiàng)目，如：豬瘟、豬偽狂犬病、豬口蹄疫、支原體、豬圓環(huán)病毒病等，通常都加強(qiáng)免疫一次。但研究一針型疫苗對(duì)降低勞動(dòng)量、減少豬群應(yīng)激與免疫成本的意義很大；

6）免疫劑量：疫苗免疫與治療注射給藥不同，注射給藥劑量與體重成正比，但疫苗免疫的抗原量與體重之間是正相關(guān)，而非成正比，接種疫苗抗原的目的是啟動(dòng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，而非是抗原量越多越好。對(duì)于品質(zhì)合格的疫苗而言，免疫時(shí)嚴(yán)格依照說(shuō)明書推薦劑量，1頭份/豬即可。

朱連德博士：1）豬藍(lán)耳病疫苗選擇應(yīng)以安全性、效果、性價(jià)比和便利原則進(jìn)行。目前，一般選擇弱毒疫苗而不是滅活疫苗。在生產(chǎn)上不要太注重毒株基因相似性，也沒有太大必要做毒株同源性高低的測(cè)序分析；

2）疫苗效果評(píng)估，以臨床上控制癥狀表現(xiàn)為基本要素衡量，實(shí)驗(yàn)室條件下，可以了解豬群病毒血癥時(shí)間、豬群排毒時(shí)間（如口腔液檢測(cè)病原）是否縮短，豬場(chǎng)內(nèi)豬藍(lán)耳病毒株基因類型是否減少；

3）免疫程序一定要根據(jù)豬群感染狀態(tài)、豬群流動(dòng)及周邊情況等制定，仔豬免疫時(shí)要考慮母源抗體的影響以及下游豬群發(fā)病時(shí)間，種豬群要根據(jù)感染狀態(tài)和疫苗保護(hù)期確定免疫次數(shù)。通常，仔豬在2周齡或以上免疫，母豬群3～4次/年普免（安全性高的疫苗），后備豬群在配種前間隔3～4周免疫2次。①仔豬在何日齡免疫，可以由下游豬群發(fā)病時(shí)間來(lái)定，如在8周齡表現(xiàn)出臨床癥狀，那么通常是6周齡感染，疫苗起效時(shí)間是2周，欲達(dá)到好的保護(hù)的時(shí)間大概4周，通過(guò)倒推法，可以算出仔豬群應(yīng)該在2～4周齡免疫。那具體哪一周呢？發(fā)病率越高越要早免疫：如8周齡豬群發(fā)病率在3%左右，可以4周齡免疫；若8周齡豬群發(fā)病率在5%左右，可以3周齡免疫；10%以上發(fā)病率，則要在2周齡免疫。當(dāng)然，上述3種情況，都可以在2周齡免疫，可以根據(jù)豬場(chǎng)其他疫苗免疫和生產(chǎn)安排而適當(dāng)予以調(diào)整；但不能1周齡或更早，以免母源抗體干擾。②母豬群是普免還是跟胎免疫，要根據(jù)疫苗安全性和母豬群對(duì)疫苗的敏感程度而定。安全性高的疫苗，母豬沒有不良反應(yīng)，也不影響胎兒發(fā)育，可以普免；若疫苗安全性不高，母豬應(yīng)用后容易產(chǎn)弱仔，可以考慮跟胎免疫，如妊娠6～8周，分娩1周后。對(duì)于一個(gè)豬場(chǎng)開始使用安全性高的疫苗，也可以跟胎免疫半年后，改為普免。不管普免還是跟胎免疫，同一棟舍內(nèi)的豬群，要同時(shí)免疫（小于1周內(nèi)完成）；

4）免疫劑量，應(yīng)該按廠家推薦劑量免疫。不要以為弱毒疫苗可在動(dòng)物體內(nèi)繁殖，而隨意減量。在一個(gè)豬藍(lán)耳病穩(wěn)定不活躍的豬場(chǎng)，減量也許在短時(shí)間內(nèi)沒有差異，但在感染壓力較大的豬場(chǎng)，疫苗接種也許就不起作用了；

5）弱毒疫苗和滅活疫苗是否可以配合應(yīng)用，按目前已有研究文獻(xiàn)所知，本人認(rèn)為沒有意義。因?yàn)槠胀缁钜呙缁緵]有免疫保護(hù)作用。當(dāng)然，有的陽(yáng)性豬場(chǎng)也這樣用了，但似乎還沒有一貫良好的證據(jù)予以推廣。在一個(gè)陰性豬場(chǎng)，可否應(yīng)用滅活疫苗，防止野毒感染帶來(lái)暴發(fā)式發(fā)病，減少損失，也是值得進(jìn)一步觀察研究的；

6）同一個(gè)豬群/豬場(chǎng)，應(yīng)該用同一個(gè)毒株的疫苗。一個(gè)豬場(chǎng)，不管是疫苗毒株，還是野毒毒株，多樣性增加，豬場(chǎng)會(huì)生產(chǎn)成績(jī)低下或發(fā)病幾率增加。不應(yīng)該母豬群用一個(gè)毒株的疫苗（如經(jīng)典毒株），仔豬群用另一個(gè)毒株的疫苗（如高致病性毒株）；也不應(yīng)該一個(gè)時(shí)期全場(chǎng)用經(jīng)典毒株疫苗，一個(gè)時(shí)期用高致病性毒株疫苗。經(jīng)常更換不同毒株不同廠家的疫苗，豬場(chǎng)的豬藍(lán)耳病總是難以控制，生產(chǎn)也難以恢復(fù)；

7）引進(jìn)后備種豬的疫苗毒株與本場(chǎng)使用疫苗毒株不同，應(yīng)該在隔離馴化后備豬群期間，免疫兩次本場(chǎng)使用的疫苗，間隔3～4周，第二次免疫至少4周后混群，最好是在第一胎后混群。

周緒斌博士：豬藍(lán)耳病疫苗確實(shí)存在比較大的爭(zhēng)議和混亂。這一方面是這個(gè)病毒本身的致病機(jī)理和免疫劑量到目前為止科學(xué)家們還未研究清楚，第二是PRRSV本身的變異性也非常大，第三，中國(guó)的豬藍(lán)耳病疫苗市場(chǎng)也非常復(fù)雜，疫苗毒株種類繁多，生產(chǎn)疫苗的廠家也比較多，質(zhì)量也參差不齊，導(dǎo)致對(duì)疫苗的選擇存在困惑。

綜上所述，我國(guó)社會(huì)發(fā)展日新月異，在這種情況下電力施工成本的控制方法也需要通過(guò)不斷改進(jìn)來(lái)適應(yīng)輸變電工程的變化。在輸變電工程施工成本的管理和控制工作中，我們要吸取專業(yè)人員的建議，并在施工過(guò)程中對(duì)施工成本進(jìn)行及時(shí)清算和核對(duì)，以免發(fā)生收支不平衡的狀況，管理人員和財(cái)務(wù)人員還應(yīng)該努力改變傳統(tǒng)的成本管理理念，建立健全成本管理體系，擴(kuò)大成本控制系統(tǒng)的受力面，使更多的工作人員共同參與到成本控制工作中，最重實(shí)現(xiàn)對(duì)輸變電工程施工成本的更好控制。

1）至于免疫的劑量，按照疫苗的研發(fā)過(guò)程和規(guī)程的要求，所有的試驗(yàn)規(guī)程應(yīng)該就是1頭份，之所以要減量或加量，一是因?yàn)橛行┮呙缟a(chǎn)過(guò)程中可能抗原含量不足，二是有些疫苗本身的殘余毒力還比較強(qiáng)，所以我們要關(guān)注豬藍(lán)耳病弱毒疫苗的安全性，如果1頭份疫苗注射健康懷孕母豬或健康仔豬出現(xiàn)繁殖障礙或生長(zhǎng)不良，這是疫苗本身的安全性存疑，而不應(yīng)簡(jiǎn)單地通過(guò)劑量的改變來(lái)解決，而精確的劑量確認(rèn)需要通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)，測(cè)定TCID50（半數(shù)感染量）來(lái)確認(rèn)；

2）仔豬的接種時(shí)間，是要綜合考慮飼養(yǎng)模式，比如單點(diǎn)式一條龍還是多點(diǎn)式生產(chǎn)，以及母源抗體的持續(xù)時(shí)間和滴度，還需要考慮育肥豬的可能感染時(shí)間，因?yàn)樨i藍(lán)耳病疫苗通常需要在免疫4～6周中和抗體才會(huì)達(dá)到較高水平，因此需要在感染前4～6周免疫；

3）按照大量的研究結(jié)果，豬藍(lán)耳病滅活苗效果非常有限，但這是由于滅活疫苗本身的抗原含量的原因還是由于生產(chǎn)工藝的原因仍需要進(jìn)一步研究，對(duì)豬藍(lán)耳病的滅活苗還需要在毒株篩選和生產(chǎn)工藝以及佐劑技術(shù)方面進(jìn)行深入的研究，豬藍(lán)耳病活疫苗有效性已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室和臨床上得到了廣泛的證明。活疫苗能否普免，取決于疫苗毒本身的安全性，比如TJM-F92毒株安全性就相對(duì)有保證，另外，也取決于我們應(yīng)用的目標(biāo)，面對(duì)種豬群的感染和發(fā)病，利用安全的弱毒苗進(jìn)行全群接種也是有效的選擇之一；

4）對(duì)于豬藍(lán)耳病弱毒苗的應(yīng)用，原則上我們應(yīng)該堅(jiān)持一個(gè)豬場(chǎng)使用一種豬藍(lán)耳病弱毒苗，即讓豬群接觸到的毒株種類最小化，使豬群的免疫力達(dá)到最大化。豬藍(lán)耳病弱毒疫苗的應(yīng)用不是一個(gè)單純的技術(shù)問題，更是一個(gè)現(xiàn)實(shí)的經(jīng)濟(jì)問題，即對(duì)于豬藍(lán)耳病陽(yáng)性場(chǎng)，注射疫苗與不注射疫苗的經(jīng)濟(jì)效益如何？只要注射疫苗能降低感染壓力，減輕臨床癥狀，提高健康水平，降低發(fā)病損失，降低料重比，是否應(yīng)用疫苗的決策就比較容易做出；

5）對(duì)于引種，種豬疫苗和自己本場(chǎng)不同的情況，引種應(yīng)該進(jìn)行充分的隔離與馴化，因?yàn)樨i藍(lán)耳病病毒無(wú)論是野毒還是疫苗毒的感染都不是終生的，我們可以選擇合適的疫苗以達(dá)到豬場(chǎng)疫苗毒株的統(tǒng)一性；

6）豬高致性藍(lán)耳病弱毒苗和經(jīng)典疫苗的效果評(píng)估都是類似的，其他疫苗也是一樣，攻毒試驗(yàn)始終是評(píng)價(jià)疫苗效果的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”，事實(shí)證明，我們并不能通過(guò)序列測(cè)定和比對(duì)來(lái)預(yù)測(cè)疫苗的效果，也不能通過(guò)抗體檢測(cè)來(lái)評(píng)估疫苗的效果。評(píng)估豬藍(lán)耳病弱毒疫苗包括最重要的3個(gè)方面，即安全性、攻毒保護(hù)效果以及疫苗毒的病毒血癥時(shí)間長(zhǎng)短。

曲向陽(yáng)博士：目前我國(guó)已經(jīng)批準(zhǔn)上市的商品化PRRSV疫苗有10個(gè)品種，其中7個(gè)減毒活疫苗（包括CH-1R、Ingelvac MLV、R98等3種美洲型經(jīng)典株及JXA1-R、HuN4-F112、TJM-F92、GDr180等4類高致病性毒株），3個(gè)滅活疫苗（CH-1a與SD1兩種經(jīng)典毒株、JXA1高致病性毒株）。2015年又批準(zhǔn)上市了PRRS V與豬瘟二聯(lián)活苗（TJM-F92株+C株）。隨著減毒活疫苗的使用，臨床流行毒株也日趨復(fù)雜，從1996年的CH-1a、BJ-4，到2006年以Nsp2缺失30個(gè)氨基酸為特征的HP-PRRSV，以及2014年以來(lái)流行的NADC30-like等，不同流行株或疫苗株之間的基因重組讓毒株變異加快，給臨床疫苗選擇帶來(lái)很多困擾。

PRRSV減毒活疫苗(MLV)選擇需重點(diǎn)考慮安全性，不合格的PRRSV MLV疫苗對(duì)母豬發(fā)情、胚胎著床及后期流產(chǎn)、斷奶仔豬致病力都有顯著的影響。

如何判斷疫苗株與臨床分離株之間的交叉保護(hù)性，目前國(guó)際上尚未形成統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。國(guó)內(nèi)一些專家推薦的以O(shè)RF5的同源性作為疫苗交叉保護(hù)力評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)，在臨床上并未得到驗(yàn)證。不建議同一豬群中使用不同毒株的PRRSV疫苗，這會(huì)導(dǎo)致PRRSV遺傳演化日趨復(fù)雜。

通常認(rèn)為PRRSV MLV疫苗可能誘導(dǎo)更好的免疫應(yīng)答與免疫保護(hù)，特別對(duì)PRRSV陰性群，滅活疫苗免疫應(yīng)答差。通常認(rèn)為：PRRSV MLV疫苗對(duì)于后備母豬馴化與母豬群形成統(tǒng)一、均一的免疫力水平具有較好的效果，免疫母豬群一旦感染PRRSV野毒后，流產(chǎn)等繁殖障礙臨床損失較小，且可以更快地恢復(fù)正常生產(chǎn)水平，但對(duì)于哺乳仔豬的免疫時(shí)機(jī)與經(jīng)濟(jì)性具有較大的爭(zhēng)議。對(duì)于已經(jīng)感染PRRSV野毒的哺乳仔豬免疫PRRSV MLV疫苗沒有臨床價(jià)值。

PRRSV MLV疫苗免疫后的效果評(píng)估是個(gè)挑戰(zhàn)。因?yàn)楫?dāng)前廣泛使用的ELISA試劑盒所測(cè)定的抗體并非是中和性抗體，其數(shù)值高低與保護(hù)性之間并沒有直接聯(lián)系，可作為臨床PRRSV感染的輔助性判斷。而且對(duì)于臨床PRRSV穩(wěn)定的母豬群，反復(fù)接種PRRSV MLV后，抗體S/P值會(huì)逐漸下降，甚至部分母豬抗體轉(zhuǎn)陰。

后備母豬引種是導(dǎo)致PRRSV入侵豬場(chǎng)的重要途徑，因?yàn)槲覈?guó)目前豬藍(lán)耳病陰性豬供應(yīng)少，多數(shù)種豬群都已自然感染或接種PRRSV MLV疫苗，導(dǎo)致后備母豬PRRSV感染狀態(tài)評(píng)價(jià)難度增大。如何識(shí)別免疫PRRSV MLV后備母豬的PRRSV感染狀態(tài)是行業(yè)面臨的一大困擾，ORF5測(cè)序會(huì)有一定的幫助，但病毒血癥陰性的后備母豬并不意味著未攜帶PRRSV野毒。

本刊：圓環(huán)病毒疫苗不同毒株是否有交叉保護(hù)，目前PCV3，PCV2a,PCV2b是否和目前疫苗匹配，保護(hù)力如何，如何評(píng)估圓環(huán)病毒疫苗效果，抗體高低，離散度，豬病料抗原檢測(cè)？精液唾液帶毒情況，肺淋巴結(jié)PCR，血液病毒載毒量如何評(píng)估，原核細(xì)胞和真核細(xì)胞表達(dá)的圓環(huán)病毒CAP蛋白疫苗，全病毒疫苗如何進(jìn)行評(píng)估，如何進(jìn)行檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)效果的評(píng)估。試劑盒目前是否可靠？

朱連德博士：目前的豬圓環(huán)病毒疫苗有全病毒滅活疫苗、桿狀病毒表達(dá)和大腸桿菌表達(dá)的亞單位疫苗，抗原多為PCV2b，對(duì)PCV2a和PCV2b有很好的保護(hù)作用；其Cap蛋白與新近發(fā)現(xiàn)的PCV3毒株的Cap蛋白分子結(jié)構(gòu)差異較大，有限的文獻(xiàn)和臨床檢測(cè)數(shù)據(jù)表明現(xiàn)有疫苗對(duì)PCV3感染發(fā)病的交叉保護(hù)力不足。

評(píng)估豬圓環(huán)病毒疫苗的手段主要是看豬只生產(chǎn)成績(jī)和臨床癥狀表現(xiàn)，其次是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)免疫后病毒載量，病毒血癥時(shí)間；唾液檢測(cè)病原也是可以嘗試的；在陽(yáng)性豬場(chǎng)通過(guò)檢測(cè)抗體評(píng)估免疫效果不足以說(shuō)明問題。當(dāng)然，在實(shí)驗(yàn)室條件下，可以免疫后攻毒，檢測(cè)病毒血癥和熒光定量檢測(cè)淋巴結(jié)帶毒量。

過(guò)去認(rèn)為大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)沒有桿狀病毒真核表達(dá)系統(tǒng)更容易讓Cap蛋白組裝出病毒樣粒子，但隨著可溶性蛋白表達(dá)、高純度Cap蛋白提取、病毒樣顆粒（VLP）組裝技術(shù)的進(jìn)步，原核表達(dá)系統(tǒng)跟真核表達(dá)系統(tǒng)在病毒樣粒子生成上已經(jīng)沒有多少差異了。不管是亞單位疫苗還是全病毒疫苗，只要抗原含量足夠，純度達(dá)標(biāo)，批次穩(wěn)定，都是可以選擇應(yīng)用的。

檢測(cè)抗體的ELISA試劑盒，可以用來(lái)了解PCV2感染情況；用其檢驗(yàn)疫苗免疫保護(hù)效果，有不確定性和局限性，需要更多的摸索和經(jīng)驗(yàn)積累。目前市面上出現(xiàn)PCV2抗原定量和定性膠體金測(cè)試卡，可以幫助遴選疫苗。

周緒斌博士：應(yīng)該說(shuō)所有豬圓環(huán)病毒毒株疫苗都有交叉保護(hù)作用，但近幾年出現(xiàn)的PCV3確實(shí)是一個(gè)新的挑戰(zhàn)，其危害程度、致病機(jī)理、免疫機(jī)理都值得高度關(guān)注?？贵w檢測(cè)在圓環(huán)病毒疫苗的效果評(píng)估中的作用非常有限，疫苗效果評(píng)估在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中體現(xiàn)的是降低病毒血癥，降低病毒載量以及通過(guò)淋巴組織的切片和免疫組化的檢測(cè)方法，降低對(duì)免疫細(xì)胞的損傷，而從臨床上疫苗效果最終還是要體現(xiàn)在生產(chǎn)性能的改善，特別是豬只成活率，日增重和料重比。全病毒與基因工程圓環(huán)病毒疫苗的評(píng)估方法應(yīng)一致。

本刊：豬病毒性腹瀉疫苗目前很多客戶不認(rèn)同，認(rèn)為效果不好，原因在哪里？現(xiàn)有情況下，如何發(fā)揮疫苗最大效果，減少豬場(chǎng)損失，目前疫苗種類、毒株、免疫途徑很多爭(zhēng)議，如何評(píng)估疫苗效果？試劑盒檢測(cè)是否可靠？滅活疫苗和活疫苗如何配合使用？返飼效果和風(fēng)險(xiǎn)，目前很多豬場(chǎng)返飼和疫苗相配合使用，如何減少風(fēng)險(xiǎn)和增強(qiáng)免疫效果？

周緒斌博士：豬病毒性腹瀉的疫苗豬場(chǎng)不認(rèn)同，一方面與疾病本身的特性相關(guān)，另外也與疫苗的生產(chǎn)工藝相關(guān)，當(dāng)然也與豬場(chǎng)管理相關(guān)。由于豬病毒性腹瀉的免疫主要還是依靠黏膜免疫，IgA在免疫過(guò)程中起主要作用，而滅活疫苗注射免疫所產(chǎn)生的循環(huán)抗體作用是有限的，第二是病毒本身的培養(yǎng)有一定困難，抗原含量對(duì)免疫起關(guān)鍵作用，第三就是豬場(chǎng)的生物安全很重要，因?yàn)椴《拘愿篂a的免疫持續(xù)期是非常短暫的，要防止外源病毒的傳入。所以目前返飼仍是控制PED的重要手段，單純依賴疫苗很難完全防控病毒性腹瀉。返飼也應(yīng)注意病料的選擇，應(yīng)該選用急性發(fā)病期的病毒或人工攻毒發(fā)病的病料，監(jiān)測(cè)病毒的含量并確保無(wú)外源病毒污染，正確處理病毒以及保證返飼的效果。定期監(jiān)測(cè)母豬的PEDV抗體對(duì)保證母豬群的免疫效力和免疫效果有一定的指導(dǎo)作用。

本刊：簡(jiǎn)單介紹一下豬偽狂犬病疫苗目前的毒株、差異性和交叉保護(hù)性，gE和gB抗體，PCR抗原檢測(cè)，如何評(píng)估豬場(chǎng)乳豬、保育豬、肥豬感染野毒，疫苗免疫程序的設(shè)計(jì)和哪些因素有關(guān)，如何評(píng)估免疫效果？

朱連德博士：1）毒株變異，毒力增強(qiáng)，這在業(yè)內(nèi)已經(jīng)形成共識(shí)。無(wú)論進(jìn)口疫苗還是國(guó)產(chǎn)疫苗，毒株類型較多，多數(shù)廠家抗原是Bartha株，新毒株疫苗也有廠家已經(jīng)注冊(cè)。目前對(duì)Bartha株等已經(jīng)存在的毒株疫苗對(duì)現(xiàn)在流行毒株交叉保護(hù)的看法不一。實(shí)踐證明，現(xiàn)有疫苗仍有交叉保護(hù)作用，但保護(hù)力似乎卻有減弱。因此，可以通過(guò)調(diào)整免疫程序，加強(qiáng)生物安全措施，并用凈化豬偽狂犬病的手段予以減少其對(duì)生產(chǎn)的影響。

2）免疫效果主要通過(guò)是否控制了臨床發(fā)病予以評(píng)估；其次，檢測(cè)病毒血癥持續(xù)時(shí)間，是否體外排毒。長(zhǎng)期免疫的效果要檢測(cè)gE抗體，看其陽(yáng)性率下降情況。

3）可以通過(guò)檢測(cè)gE抗體和檢測(cè)病原，了解各個(gè)階段豬群感染和帶毒情況及臨床觀察發(fā)病情況，并以此制定或調(diào)整免疫程序。斷奶前后已有臨床發(fā)病，其他仔豬一定在出生當(dāng)天，最遲不晚于3日齡，滴鼻免疫；母豬加強(qiáng)免疫。疫苗免疫程序設(shè)計(jì)與豬群感染情況、疫苗特點(diǎn)、免疫途徑、免疫劑量和豬群其他疾病干擾有關(guān)，當(dāng)然也與豬群流動(dòng)、飼養(yǎng)管理、生物安全措施等有關(guān)。

周緒斌博士：豬偽狂犬病的流行目前出現(xiàn)了新的變化，2012年之后出現(xiàn)了毒力變強(qiáng)的變異毒株。目前的疫苗毒株主要以傳統(tǒng)的Bartha-k61毒株為主，疫苗對(duì)變異毒株有一定的交叉保護(hù)作用，但不能提供完全保護(hù)，免疫方案要保證毒株的匹配性，以及母豬和仔豬都有較強(qiáng)的主動(dòng)免疫保護(hù)作用，因此，母豬通常一年需要3～4次普免，仔豬如果存在早期感染風(fēng)險(xiǎn)則需要進(jìn)行滴鼻免疫，并在育肥早期和中期加強(qiáng)免疫，免疫效果的評(píng)估主要是基于gE野毒抗體的監(jiān)測(cè)，保證免疫后gE不轉(zhuǎn)陽(yáng)或gE的陽(yáng)性率逐漸下降，gB抗體監(jiān)測(cè)對(duì)于免疫效果評(píng)估的作用非常有限，如果采用gE缺失的疫苗，各種豬群的感染都可以用gE-ELISA來(lái)評(píng)估是否有野毒感染，但要注意，70～100日齡前生長(zhǎng)豬的gE-ELISA陽(yáng)性可能來(lái)自母源抗體，因此需要輔助的PCR抗原檢測(cè)方法。

蔡汝健老師：疫苗效力通常通過(guò)疫苗的保護(hù)率指標(biāo)來(lái)衡量。疫苗保護(hù)率的計(jì)算公式通常可表示為：VE(%)=[1-(ARV／ARC)]×100%。其中VE是指疫苗保護(hù)效力，ARC和ARV分別是對(duì)照組和疫苗組的終點(diǎn)事件發(fā)生率。只要疫苗可以提供某種程度的保護(hù)，那么疫苗組的終點(diǎn)事件發(fā)生率一定會(huì)低于對(duì)照組，疫苗組和對(duì)照組的相對(duì)危險(xiǎn)度小于1，使得最終VE的范圍在0～100之間，VE值越高則說(shuō)明保護(hù)效果越好，則疫苗的效力越高。

研究制定疫苗效力評(píng)估的臨床試驗(yàn)方案時(shí)，臨床試驗(yàn)終點(diǎn)的選擇和判定最為重要。選擇什么樣的終點(diǎn)，是感染還是發(fā)?。吭谝呙缢槍?duì)的病原體感染后并不一定導(dǎo)致發(fā)病的情況下（隱性感染），這個(gè)選擇就顯得尤為重要。所以我通常采用兩者相結(jié)合的方案對(duì)疫苗效力進(jìn)行評(píng)估，通過(guò)以上理論結(jié)合豬偽狂犬病毒疫苗的試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行探討。

1）在豬偽狂犬病毒疫苗的效力評(píng)價(jià)試驗(yàn)中，以偽狂犬病毒所致的疾病（出現(xiàn)的臨床癥狀）為主要判斷終點(diǎn)。豬場(chǎng)接種豬偽狂犬疫苗后，仍然出現(xiàn)偽狂犬病毒所致的臨床癥狀：仔豬表現(xiàn)為發(fā)熱、嘔吐、呼吸因難、間歇性痙攣等癥狀， 病死率很高；母豬發(fā)生流產(chǎn)及產(chǎn)木乃伊胎、死胎等臨床癥狀，通過(guò)疫苗保護(hù)率的計(jì)算公式最后得出疫苗的保護(hù)效力；

2）成年豬感染該病毒后不發(fā)病而呈隱性感染， 造成長(zhǎng)期帶毒、排毒， 成為極危險(xiǎn)的傳染源，所以我們?cè)诎l(fā)病為判斷終點(diǎn)結(jié)合病毒感染為終點(diǎn)，以便全面評(píng)估豬偽狂犬疫苗的效力。即在觀察期內(nèi)，所有出現(xiàn)任何可疑臨床癥狀或沒有出現(xiàn)任何臨床癥狀時(shí)采樣送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)病毒分離、特異性核酸PCR診斷或豬偽狂犬病毒野毒（gE）抗體試劑盒檢測(cè)來(lái)判斷疫苗的效力。當(dāng)前豬場(chǎng)偽狂犬病毒感染規(guī)律主要表現(xiàn)為10～14周齡豬群偽狂犬病毒野毒感染，導(dǎo)致偽狂犬病毒野毒（gE）抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)，所以我曾提出可以以中大豬偽狂犬病毒野毒（gE）抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率來(lái)評(píng)價(jià)豬偽狂犬疫苗的效力，轉(zhuǎn)陽(yáng)率越高說(shuō)明疫苗免疫效果不佳，轉(zhuǎn)陽(yáng)率為0說(shuō)明疫苗免疫效果很好，能夠阻斷豬偽狂犬病毒的感染。

唐利：根據(jù)各種最新的研究報(bào)告顯示，臨床感染的某些偽狂犬病毒存在毒力增強(qiáng)的現(xiàn)象以及部分疫苗交叉保護(hù)不好的情況。但從我自己控制豬偽狂犬病以及多次成功實(shí)施豬偽狂犬病凈化的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，暴發(fā)豬偽狂犬病時(shí)使用豬偽狂犬滅活疫苗作為補(bǔ)充緊急免疫方案，清走肥豬群，以及嚴(yán)格消毒空欄和減少針頭傳播等措施很有效，具體實(shí)施流程要根據(jù)每個(gè)豬場(chǎng)的具體情況而定。一般來(lái)說(shuō)，兩點(diǎn)式飼養(yǎng)，補(bǔ)充陰性后備，確保公豬陰性，強(qiáng)化免疫，嚴(yán)格批次生產(chǎn)以及嚴(yán)格的生物安全等措施依然是控制豬偽狂犬病以及保持豬偽狂犬病陰性的幾個(gè)關(guān)鍵的管理措施。

本刊：豬瘟疫苗對(duì)母豬是否需要普免或者跟胎免疫？疫苗毒是否會(huì)有胎盤感染？能否介紹一下豬瘟的免疫程序設(shè)計(jì)及免疫效果的評(píng)估？

朱連德博士：1）普免或跟胎免疫，主要是根據(jù)豬群管理和生產(chǎn)安排來(lái)確定。目前，商品疫苗不存在安全問題，不會(huì)通過(guò)胎盤感染胎兒；

2）免疫程序制定主要依賴抗體檢測(cè)，因?yàn)閲?guó)內(nèi)臨床發(fā)病較少見。通過(guò)抗體包括母源抗體消長(zhǎng)情況確定免疫時(shí)間和免疫間隔；

3）免疫效果評(píng)估，主要是通過(guò)ELISA試劑盒檢測(cè)了解抗體合格率?？乖瓩z測(cè)也可作為一個(gè)補(bǔ)充。

周緒斌博士：豬瘟疫苗包括活疫苗和即將上市的E2基因工程亞單位滅活疫苗?；钜呙缢枚局隇橥没醵綜株，C株是非常安全有效的弱毒苗，C株生產(chǎn)出的疫苗包括脾淋苗、牛睪丸細(xì)胞苗以及ST傳代細(xì)胞苗?；钜呙缑庖吣肛i是否會(huì)有胎盤感染也沒有定論，取決于母豬本身的狀態(tài)，免疫狀態(tài)低下的母豬有可能存在垂直傳播。基因工程亞單位滅活苗免疫母豬不存在垂直感染。豬瘟免疫程序的制定核心的要點(diǎn)是防止母源抗體的干擾，因?yàn)槿醵久缡苣冈纯贵w干擾是很多豬場(chǎng)豬瘟免疫失敗的重要原因，豬瘟的抗體監(jiān)測(cè)有很多的商業(yè)化ELISA試劑盒可供選擇，但這些試劑盒大多數(shù)不能區(qū)別野毒抗體和疫苗抗體。對(duì)于無(wú)豬瘟野毒感染的豬場(chǎng)，應(yīng)確保豬瘟抗體陽(yáng)性率高于90%，阻斷率高于85%。

本刊：檢測(cè)單位、實(shí)驗(yàn)室、科研工作人員如何從現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)情況和疫苗免疫情況來(lái)分析疫苗免疫程序和免疫方案是否合理？如何評(píng)估免疫合格和有效？

朱連德博士：1）采樣科學(xué)合理，檢測(cè)方法正確；

2）依據(jù)正確的檢測(cè)結(jié)果，了解現(xiàn)場(chǎng)生產(chǎn)和臨床情況，生物安全措施實(shí)施情況，甚至免疫操作細(xì)節(jié)；

3）熟悉所用疫苗的質(zhì)量、性能、理化特點(diǎn)及可能影響疫苗效果發(fā)揮的其他疾病或營(yíng)養(yǎng)因素。

周緒斌博士：檢測(cè)單位和實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)需要非常專業(yè)化的水平，準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室操作以及對(duì)檢測(cè)結(jié)果的正確解讀，絕不能簡(jiǎn)單地從檢測(cè)結(jié)果來(lái)評(píng)估疫苗免疫效果，也同樣需要正確的采樣方法，并了解所使用疫苗的種類，綜合血清學(xué)的監(jiān)測(cè)方法和抗原的分子生物學(xué)和病理學(xué)的診斷方法。不同的疾病，不同的疫苗都有特定的診斷和評(píng)價(jià)方法，并需要將實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與現(xiàn)場(chǎng)的生產(chǎn)結(jié)合起來(lái)進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)，如果只是通過(guò)實(shí)驗(yàn)室來(lái)評(píng)估免疫程序，免疫方案，疫苗效果那就是紙上談兵。

本刊：您認(rèn)為目前有效的評(píng)估疫苗免疫方案免疫效果的方法有哪些？

朱連德博士：1）臨床癥狀；

2）生產(chǎn)成績(jī)；

3）抗體消長(zhǎng)；

4）病毒血癥，或唾液、鼻分泌物、排泄物、咽喉拭子等檢測(cè)病原；

5）組織采樣進(jìn)行病理觀察，抗原檢測(cè)。

周緒斌博士：評(píng)估免疫方案和免疫效果包括血清學(xué)方法，檢測(cè)抗體的變化情況，了解野毒感染的變化情況，了解抗原檢出率和豬群帶毒率的變化，最重要的是了解豬群生長(zhǎng)性能。