副溶血弧菌在不同鹽度和溫度下運(yùn)動(dòng)能力的比較

王艷芬

摘 要：將副溶血性弧菌接種于不同鹽度（0.5%、1.0%、2.0%和4.0%）的爬動(dòng)和泳動(dòng)平板上，37℃靜置培養(yǎng)后，通過(guò)比較菌苔的直徑大小判定鹽度對(duì)其運(yùn)動(dòng)能力的影響。當(dāng)判定出對(duì)其運(yùn)動(dòng)能力有顯著影響的鹽濃度后，在該鹽濃度下分別于37℃和26℃靜置培養(yǎng)，再次通過(guò)比較菌苔的直徑大小來(lái)判定溫度對(duì)其運(yùn)動(dòng)能力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽度只影響副溶血性弧菌的泳動(dòng)能力，且當(dāng)鹽度在0.5%-4.0%之間變化時(shí)，其泳動(dòng)能力與鹽度呈正相關(guān)；溫度對(duì)其爬動(dòng)和泳動(dòng)能力均具有顯著影響，在37℃時(shí)的運(yùn)動(dòng)能力明顯強(qiáng)于在26℃時(shí)。以上結(jié)果表明鹽度和溫度均能調(diào)節(jié)副溶血性弧菌的運(yùn)動(dòng)能力。

關(guān)鍵詞：副溶血性弧菌；不同鹽度；不同溫度；爬動(dòng)和泳動(dòng)能力

中圖分類(lèi)號(hào)：R378.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-2064（2018）04-0187-01

副溶血弧菌，又稱嗜鹽菌（VP），廣泛分布于高鹽環(huán)境中。我國(guó)華東地區(qū)沿岸的海水的副溶血性弧菌檢出率為47.5%～66.5%，海產(chǎn)魚(yú)蝦的平均帶菌率為45.6%～48.7%，夏季可高達(dá)90%以上。如果食用了被其污染的海產(chǎn)品，主要引起腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便等食物中毒癥狀，其發(fā)病急，傳播快。近年來(lái)，海產(chǎn)品備受廣大消費(fèi)者青睞，由此菌引起的食物中毒事件時(shí)有發(fā)生。此外，該菌也可由海水感染傷口而引起敗血癥，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[1-2]。因此本文擬通過(guò)研究不同鹽度和溫度對(duì)副溶血弧菌運(yùn)動(dòng)能力的影響，以便為人類(lèi)的健康做出貢獻(xiàn)。

副溶血弧菌能表達(dá)極鞭毛和側(cè)鞭毛兩種不同的鞭毛系統(tǒng)。兩者在形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理功能、免疫原性和基因構(gòu)成上具有本質(zhì)差異。極鞭毛是該菌的固有結(jié)構(gòu)，與其在液體環(huán)境下的泳動(dòng)能力直接相關(guān)，而側(cè)鞭毛是副溶血弧菌在黏稠的環(huán)境或固體表面生長(zhǎng)時(shí)才能形成的，與其群集行爬動(dòng)相關(guān)[3]。目前的研究表明副溶血弧菌的泳動(dòng)和爬動(dòng)是被緊密調(diào)控的。本文對(duì)鹽度和溫度對(duì)副溶血弧菌運(yùn)動(dòng)的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明二者對(duì)泳動(dòng)和爬動(dòng)能力均具有一定的調(diào)節(jié)作用。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 種子菌以及爬動(dòng)、泳動(dòng)平板的制備

取20μL甘油菌株接種到30ml的M肉湯培養(yǎng)基中，37℃、300r/min培養(yǎng)12h（至平臺(tái)期）。然后稀釋50倍于30ml新鮮的M肉湯培養(yǎng)基中，37℃、300r/min培養(yǎng)至D600為1.0（對(duì)數(shù)中期），作為種子菌備用。

（1）爬動(dòng)平板：2.5%的HI培養(yǎng)基、分別為0.5%、1.0%、2.0%和4.0%的Nacl以及2.0%的瓊脂粉。（2）泳動(dòng)平板：1%蛋白胨、分別為0.5%、1.0%、2.0%和4.0%的Nacl以及0.5%的瓊脂粉。

1.2 爬動(dòng)能力檢測(cè)

取2.0μL種子菌，點(diǎn)加在爬動(dòng)平板表面，每塊板3個(gè)重復(fù)，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)。37℃靜置培養(yǎng)36h，分別測(cè)量菌苔直徑大小。判定出對(duì)副溶血性弧菌的運(yùn)動(dòng)能力有顯著影響的鹽濃度后，將種子菌點(diǎn)加在該鹽濃度平板中與26℃靜置培養(yǎng)36h，分別測(cè)量菌苔直徑大小。

1.3 泳動(dòng)能力檢測(cè)

取1.5μL種子菌，與泳動(dòng)平板中穿刺培養(yǎng)，每塊板3個(gè)重復(fù)，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)。37℃靜置培養(yǎng)4.5h，分別測(cè)量菌苔直徑大小。判定出對(duì)副溶血性弧菌的運(yùn)動(dòng)能力有顯著影響的鹽濃度后，將種子菌點(diǎn)加在該鹽濃度平板中與26℃靜置培養(yǎng)4.5h，分別測(cè)量菌苔直徑大小。

1.4 數(shù)據(jù)處理方法

采用t體驗(yàn)分別比較不同鹽度和不同溫度條件下培養(yǎng)時(shí)的菌苔直徑。以P<0.01具有顯著性意義來(lái)判定鹽度和溫度是否影響副溶血性弧菌的運(yùn)動(dòng)能力。

2 結(jié)果

2.1 不同鹽度對(duì)副溶血性弧菌運(yùn)動(dòng)能力的影響

2.1.1 不同鹽度對(duì)副溶血性弧菌爬動(dòng)能力的影響

分別測(cè)定不同鹽濃度下菌苔直徑大下，經(jīng)t體驗(yàn)得知，不同的鹽濃度對(duì)副溶血性弧菌的集群行爬動(dòng)能力影響不夠顯著，視為無(wú)影響。

2.1.2 不同鹽度對(duì)副溶血性弧菌泳動(dòng)能力的影響

按上述方法判定不同鹽濃度對(duì)副溶血性弧菌泳動(dòng)能力的影響，得知：副溶血性弧菌在鹽濃度為2.0%時(shí)的泳動(dòng)能力明顯強(qiáng)于其在0.5%和1.0%鹽濃度時(shí)的泳動(dòng)能力；而在鹽濃度為1.0%時(shí)的泳動(dòng)能力也明顯強(qiáng)于鹽濃度為1.0%時(shí)。其在鹽濃度為4.0%時(shí)的泳動(dòng)能力與鹽濃度為2.0%時(shí)相比較沒(méi)有顯著性變化，但其在4.0%的鹽濃度時(shí)的泳動(dòng)能力要稍強(qiáng)于1.0%時(shí)，由此可以得出，當(dāng)鹽濃度在0.5%-4.0%之間時(shí)，副溶血性弧菌的泳動(dòng)能力與鹽濃度呈正比關(guān)系。

2.2 不同溫度對(duì)副溶血性弧菌運(yùn)動(dòng)能力的影響

將種子菌分別點(diǎn)加或穿刺接種與鹽濃度為2.0%的爬動(dòng)和泳動(dòng)平板中，分別于26℃靜置培養(yǎng)36h和37℃靜置培養(yǎng)4.5h，通過(guò)t體驗(yàn)判斷溫度對(duì)副溶血弧菌運(yùn)動(dòng)能力的影響，結(jié)果顯示，其在37℃時(shí)的運(yùn)動(dòng)能力（包括泳動(dòng)能力和爬動(dòng)能力）明顯強(qiáng)于26℃時(shí)，也就是說(shuō)，副溶血弧菌在溫度為37℃時(shí)具有更強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力。

3 討論

病原菌的鞭毛有利于其感染致病。副溶血性弧菌具有兩種形式的鞭毛，分別與其爬動(dòng)和泳動(dòng)能力緊密相關(guān)，而這兩種運(yùn)動(dòng)模式是受多種因素調(diào)控的，比如金屬離子等。本文通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，鹽度和溫度對(duì)副溶血性弧菌的兩種運(yùn)動(dòng)能力也具有調(diào)控作用。鹽度只對(duì)其泳動(dòng)能力具有顯著性影響，且當(dāng)鹽度在0.5%-4.0%變化時(shí)，泳動(dòng)能力與鹽度呈正相關(guān)；溫度對(duì)，副溶血弧菌的爬動(dòng)和泳動(dòng)能力均具有調(diào)控作用，而且其在溫度為37℃時(shí)運(yùn)動(dòng)能力明顯比其在26℃時(shí)更強(qiáng)。副溶血性弧菌從自然棲息地到感染人體的過(guò)程中，實(shí)際上經(jīng)歷了一個(gè)從高鹽到低鹽，從低溫到高溫的轉(zhuǎn)變。有文獻(xiàn)報(bào)道稱副溶血性弧菌能感應(yīng)這種環(huán)境信號(hào)的改變，并能夠進(jìn)行有效的自我調(diào)節(jié)，這是其能夠生存并致病的的關(guān)鍵因素。在鹽度比較低時(shí)，其泳動(dòng)能力減弱可能有利于副溶血性弧菌在小腸細(xì)胞表面形成生物膜，進(jìn)而增強(qiáng)該菌對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的抵抗能力；而其在37℃時(shí)的運(yùn)動(dòng)能力比26℃時(shí)明顯增添強(qiáng)似乎有利于菌體穿過(guò)小腸粘膜屏障并定植于小腸上皮細(xì)胞，從而增強(qiáng)其致病力。

參考文獻(xiàn)

[1]郭志燕，周明旭，段強(qiáng)德，等.細(xì)菌鞭毛的致病性及其免疫學(xué)應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)報(bào)，2014，（3）：251-260.

[2]Wang L， Ling Y， Jiang H， et al. AphA is required for biofilm formation， motility， and virulence in pandemic Vibrio parahaemo-lyticus[J].Int J Food Microbiol， 2013，（3）：245-251.

[3]Trimble MJ， McCarter LL. Bis-（3′-5′）-cyclic dimeric GMP-linked quorum sensing controls swarming in Vibrio parahaemolyti-cus[J].Proc Natl Acad Sci USA， 2011，（44）：18079-18084.