存放時間對代煎蒲公英湯劑質量的影響

李 青 王 慧 孫文靜 楊慧彤 石雪晶 楊麗萍

1.河南中醫(yī)藥大學中醫(yī)系，河南鄭州 450000；2.河南中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結合基礎學科，河南鄭州 450046

中藥湯劑是我國傳統(tǒng)醫(yī)學的精粹，至今也在疾病防治與治療方面占據重要地位。在調查中發(fā)現(xiàn)，代煎中藥已成為快節(jié)奏生活人群的主要選擇[1]。由于代煎中藥保存時間存在爭議且無明確的相關研究，故代煎湯劑保存時間對其藥效的影響值得探討。本研究以單味代煎蒲公英湯劑為實驗主體，以湯劑濃度[2]、pH值[3]、亞硝酸鹽[4-5]、抑菌作用[6]四項內容探究隨著存放時間的延長單味蒲公英湯劑的質量變化。

1　資料與方法

1.1　主要器材

紫外可見分光光度計1臺（北京普析通用儀器有限責任公司，TU-1810）；pH計（安萊立思，PH-400型）；電熱恒溫水浴鍋（北京長風儀器儀表公司，HH.SY21-Ni）；封閉式電夾板（上海雷韻，BGG-2.4）；低速離心機（北京醫(yī)用離心機廠，LD4-2型）；全機械加碼分析天平（萬分之一）（上海新航儀器廠，TG328A）；游標卡尺（上海臺海工量具有限公司，0～150mm）；生化培養(yǎng)箱（常州國華電器有限公司，250B）；手提壓力蒸汽滅菌器 （上海博訊實業(yè)有限公司，YXQ-SG46-280A 型）；麥氏比濁儀（北京亞歐德鵬科技有限公司，DP-MC1型）；麥氏比濁管（北京亞歐德鵬科技有限公司，18mm，6管/套）。

1.2　試劑

pH計標準緩沖液（浙江力辰儀器科技有限公司，pH4.00/500mL，pH6.86/500mL，pH9.18/500mL）；營養(yǎng)瓊脂平面培養(yǎng)基（北京陸橋技術有限公司，CM107型號/250g）；氯化鋇（國藥集團化學試劑有限公司，500g/瓶）；硫酸溶液（國藥集團化學試劑有限公司，500mL/瓶）；亞鐵氰化鉀（國藥集團化學試劑有限公司，500g/瓶）；乙酸鋅（國藥集團化學試劑有限公司，500g/瓶）；硼酸鈉（國藥集團化學試劑有限公司，500g/瓶）；對氨基苯磺酸（山東浩中化工科技有限公司，100g/瓶）；N-1萘基乙二胺（天津市永大化學試劑有限公司，10g/瓶）；亞硝酸鈉（國藥集團化學試劑有限公司，500g/瓶）；冰乙酸（國藥集團化學試劑有限公司，500mL/瓶）；鹽酸（國藥集團化學試劑有限公司，500mL/瓶）。

1.3　實驗方法

1.3.1湯劑制備 委托鄭州市高新開發(fā)區(qū)九州通大學城大藥房，機煎蒲公英全草600g，加水8000ml，機煎得濃度為0.1g/mL湯劑6000mL，取1600mL分別灌入容量為200mL的真空包裝保存共8袋，200mL/袋。將剩余4400mL湯劑煎制成濃度為2g/mL湯劑220mL，分別灌入容量為200mL的真空包裝保存共8袋，27.5mL/袋。

1.3.2不同存放時間湯劑濃度測定 采用分光光度計法測定湯劑濃度。記錄數據，觀察每日各組湯劑濃度變化。

1.3.3不同存放時間湯劑酸堿度測定 采用pH計法測定湯劑pH值。記錄數據，觀察每日各組湯劑酸堿度變化。

1.3.4不同存放時間湯劑亞硝酸鹽含量測定 用標準曲線法測定各組樣品吸光度值，計算亞硝酸鹽含量。記錄數據，觀察每日各組湯劑亞硝酸鹽含量變化。

1.3.5不同存放時間湯劑抑菌效果測定 采用抑菌圈大小評價法測定抑菌活性。記錄數據，觀察每日各組湯劑抑菌活性的變化。

1.4　統(tǒng)計學分析

采用統(tǒng)計學軟件SPSS20.0版對數據進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（x±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1　不同存放時間湯劑吸光度變化

代煎蒲公英湯劑濃度隨時間整體呈上升趨勢。與第0天組相比，各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。說明存放時間對代煎蒲公英湯劑濃度有影響。見表1。

表1　保存時間對代煎蒲公英湯劑吸光度的影響（x ± s，n=3）

2.2　不同存放時間湯劑酸堿度變化

代煎蒲公英湯劑酸堿度隨時間整體呈下降趨勢。與第0天組相比，除1天組外，各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。說明存放時間對代煎蒲公英湯劑酸堿度有影響。見表2。

表2　保存時間對代煎蒲公英湯劑pH值的影響（x ± s，n=3）

2.3　不同存放時間湯劑亞硝酸鹽含量變化

代煎蒲公英湯劑亞硝酸鹽含量整體隨時間呈上升趨勢。與第1天組相比，各組差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。說明存放時間對代煎蒲公英湯劑亞硝酸鹽含量的影響有限。見表3。

表3　保存時間對代煎蒲公英湯劑亞硝酸鹽含量的影響（x ± s，n=3）

2.4　不同存放時間湯劑抑菌效果變化

代煎蒲公英湯劑抑菌效果整體隨時間呈下降趨勢。與第0天組相比，除第1天組外，各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。說明存放時間對代煎蒲公英湯劑抑菌效果有影響。見表4。

表4　保存時間對代煎蒲公英湯劑體外抑菌療效的影響（x ± s，n=3）

3　討論

中藥湯劑是臨床常用的劑型之一。在調查中發(fā)現(xiàn)，代煎藥物[7]因其快捷深受歡迎，部分人群為節(jié)約時間甚至會一次代煎多付，自行保存5～7d。由于代煎中藥的保存時間存在爭議且無明確的相關研究，故代煎湯劑保存時間對其質量的影響值得探討。蒲公英是常用中藥之一，藥理特性等相關研究較為全面。為減少實驗變量，更好的探究存放時間對湯劑質量的影響，故選取療效確切的單味蒲公英作為實驗主體。

中藥湯劑質量檢測是一項很復雜的科學，國內尚無系統(tǒng)的現(xiàn)代科學儀器和先進的檢測手段對其質量進行檢測[8]。大眾?？繙珓舛?、氣味[9-10]、酸度等判斷中藥湯劑質量變化，且絕大多數中藥湯劑為水煎劑，現(xiàn)有研究表明水中含有微量亞硝酸鹽[4-5]，因此湯劑中亞硝酸鹽含量是否超標也關系到湯劑的質量。因此參考漢方浸膏制劑的部分實驗項目[11]、中國藥典[12]、食品安全國家標準中亞硝酸鹽與硝酸鹽[12-13]的測定。根據蒲公英殺菌的藥理作用[6、15]等，故選取藥物濃度、pH值、亞硝酸鹽含量、抑菌活性作為質量檢測指標。

傳統(tǒng)經驗上，常以湯劑的色澤濃度來判斷其質量，缺乏一定的科學性，分光光度計法是經典的測量有色物質含量的方法，本研究發(fā)現(xiàn)：蒲公英湯劑濃度隨藥物存放時間的延長呈上升趨勢。目前，pH計法是測定中藥酸堿度的常用測量方法，已有實驗[3]測定蒲公英提取物的pH值，表明蒲公英提取物的pH值為弱性且酸與其質量和療效有關，證明蒲公英pH值的測定對評判代煎蒲公英湯劑質量和療效有意義。本研究發(fā)現(xiàn)：蒲公英湯劑的pH值隨藥物存放時間的延長呈下降趨勢。眾所周知，過量的亞硝酸鹽和硝酸鹽攝入會對人體產生危害甚至致癌，而亞硝酸鹽和硝酸鹽廣泛存在于自然界的土壤、水域及植物中。故本實驗以此為基點，選取經典用于測定亞硝酸鹽含量的常規(guī)方法—鹽酸萘乙二胺法，測定湯劑中亞硝酸鹽含量。結果表明：亞硝酸鹽含量均隨藥物存放時間的延長呈上升趨勢，但亞硝酸鹽含量最大值0.0372g，均未超過0.2g的國家標準中毒量[16]。蒲公英具有明確的殺菌消毒的藥理作用，現(xiàn)有研究表明蒲公英水煎劑對金黃色葡萄球菌有抑菌、殺菌效果[17]。證明蒲公英具有體外抑菌作用，故采用測定抑菌圈大小進行蒲公英湯劑藥效測定。結果表明：抑菌圈直徑隨藥物存放時間的延長顯著減小。說明代煎蒲公英湯劑抑菌效果隨存放時間的延長呈下降趨勢。

綜上所述，存放時間對代煎蒲公英湯劑濃度、pH值、抑菌效果均有影響。對臨床常用的代煎藥除了嚴格控制煎藥流程外，還需要嚴格控制存放時間，一般不應超過3d。

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