酸奶對慢性腎功能衰竭輔助治療作用的研究

潘　蕾　高　飛　李樹森　錢文濤　彭　程　李洪亮母智深

（內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司，內(nèi)蒙古和林格爾　011500）

近年來，我國腎疾病的發(fā)病率呈明顯上升的趨勢，大部分腎病患者最后往往會發(fā)展為腎功能衰竭，腎功能衰竭的臨床表現(xiàn)復(fù)雜，治療困難，預(yù)后較差，死亡率極高，而且需要依賴透析或進(jìn)行腎臟移植。因此，在腎病發(fā)展初期至終末期之前，采取有效的措施延緩腎病患者病程進(jìn)展，具有重要的意義。

酸奶中含大量的活乳酸菌及有用的代謝產(chǎn)物，能促進(jìn)鈣、磷的吸收，水解部分蛋白質(zhì)和乳糖，具有很高的營養(yǎng)價值。酸奶由于乳酸菌的發(fā)酵作用，在營養(yǎng)成分得到改善的同時，也產(chǎn)生了一些生理活性物質(zhì)，對機體功能有顯著的調(diào)節(jié)作用，達(dá)到防病治病的效果。

據(jù)國外報道，有些地區(qū)從牛乳中提取某些活性成分用于各種炎癥的治療。為進(jìn)一步探索酸奶的營養(yǎng)功效，本試驗以酸奶為研究對象，通過建立慢性腎功能衰竭（CRF）大鼠病理模型，探討酸奶配合藥物對CRF病程的影響，為采用飲食療法緩解CRF病情的研究提供試驗依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1　試驗動物

Wistar大鼠，40只，雄性，體重200 g～220 g，無特定病原體（SPF）級，購于北京維通利華實驗動物有限公司，合格證號：SCXK（京）2006-0009；飼養(yǎng)條件：室溫24℃±2℃，相對濕度50%～60%，通風(fēng)良好，自由進(jìn)食飲水，飼料為全價顆粒。

1.1.2　主要藥物與試劑

酸奶，蒙牛冠益乳，蒙牛乳業(yè)有限公司；腺嘌呤，加拿大進(jìn)口，南京博爾迪生物科技有限公司銷售，產(chǎn)品批號AD0013；尿毒清顆粒，康巨藥業(yè)（內(nèi)蒙古） 有限責(zé)任公司，產(chǎn)品批號20100204；血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶 （SOD）、血清總蛋白（TP）、鈣 （Ca）、磷 （P）、尿蛋白 （UP） 和 24 h 尿量，均購于南京建成生物工程研究所，產(chǎn)品批號：20100914。

1.2　方法

1.2.1　動物分組、造模及給藥

將40只Wistar雄性大鼠適應(yīng)1周后，標(biāo)記稱重，隨機分為4組，即正常對照組、病理模型組、尿毒清治療組、酸奶配合藥物治療組，每組10只。正常對照組灌胃滅菌蒸餾水，灌胃劑量10 mL/kg·d。其余各組大鼠給予2%的腺嘌呤混懸液按200mg/kg·d劑量灌胃給藥，造模周期24 d，第1 d～12 d每天灌胃1次，第13 d～24 d隔日灌胃1次。造模結(jié)束后，正常對照組和病理模型組每天9點和15點分別灌胃15 mL/kg·d的生理鹽水；尿毒清藥物治療組和酸奶配合藥物治療組每天9點灌胃15 mL/kg·d的尿毒清顆粒，15點分別灌胃15 mL/kg·d的生理鹽水和15 mL/kg·d的酸奶。

1.2.2　試驗藥品的配制

腺嘌呤懸濁液：蒸餾水配制，質(zhì)量濃度為2%的混懸液。

尿毒清溶液：蒸餾水配制，質(zhì)量濃度為25%的溶液。

1.2.3　觀察指標(biāo)

觀察整個試驗期間大鼠的體重、神態(tài)、毛發(fā)及活動的變化情況。于造模期的第8天、第16天、第24天以及治療期的第7天、第14天、第21天、第28天，稱量體重，將大鼠置于代謝籠中留取24 h尿液，測定尿量和尿蛋白，造模期第24天及治療期第28天心臟采血留樣，治療第28天后，股動脈采血，斷頸處死。

1.2.4　檢測方法

Scr、BUN、TP、24 h尿蛋白、NO、SOD、Ca和P：依照試劑盒說明書檢測。

1.3　統(tǒng)計學(xué)處理

采用Spss for windows 16.00統(tǒng)計軟件處理，數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（X±S）”的形式表示，多組間比較采用方差分析，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果與分析

2.1　造模期間大鼠各項指標(biāo)

2.1.1　大鼠的一般生理狀況

造模期間，除正常對照組外，其他各組大鼠體重增長緩慢，同時出現(xiàn)多飲、多尿、毛發(fā)干枯、精神萎靡等現(xiàn)象。造模期間各組大鼠平均體重測定結(jié)果見表1。

由表1可以看出，在造模前，各組的大鼠體重均無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。造模的第16天，各模型組與正常對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05）；第24天，各模型組與正常對照組均有極顯著性（P＜0.01）。

表1　造模期間各組大鼠平均體重

2.1.2　大鼠的飲食和飲水情況

造模期大鼠的平均飲食量和飲水量分別見圖1和圖2。

圖1　各組大鼠飲食情況

圖2　各組大鼠飲水情況

由圖1和圖2可以看出，造模前，各組大鼠的飲食量和飲水量無顯著差異（P＞0.05），具有可比性。在造模過程中，正常對照組大鼠的飲食和飲水情況無明顯變化，各模型組大鼠的飲食量呈顯著下降趨勢，飲水量呈顯著上升趨勢。造模結(jié)束后，各模型組大鼠的飲食量和飲水量與正常對照組比較有極顯著性差 （P＜0.01）。

2.1.3　大鼠的24 h排尿液量

慢性腎功能衰竭大鼠模型制備前，各組大鼠24h排尿量無顯著差異（P＞0.05），具有可比性，具體情況見圖3。

圖3　各組大鼠24 h尿量

在整個造模過程中，正常對照組大鼠24 h排尿量無顯著變化（P＞0.05），造模結(jié)束后各模型組大鼠的24 h排尿量與正常對照組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與造模前模型組大鼠的24 h排尿量比較具有極顯著性差異（P＜0.01）。

2.1.4　血清Scr和BUN

造模前后，分別測定各組大鼠的血清Scr和BUN并進(jìn)行對比，以檢測造模成功與否，測定結(jié)果見表2。

如表2所示，經(jīng)過24天的灌胃后，各模型組大鼠與正常對照組相比較，血清Scr、BUN含量都有極顯著性差異（P＜0.01），且與造模前各模型組的血清Scr、BUN含量比較有極顯著性差異（P＜0.01），說明本試驗造模成功。

2.1.6小結(jié)

根據(jù)CRF的西醫(yī)臨床診斷及腎功能分期標(biāo)準(zhǔn)，參照中華內(nèi)科雜志編委會病專業(yè)組1993年擬定標(biāo)準(zhǔn)及第六版《內(nèi)科學(xué)》制定，按腎功能損害的程度，一般可分為4期，其中第二期(氮質(zhì)血癥償期)：血清肌酐 178 μmol/L～450 μmol/L，可有輕度貧血、多尿和夜尿。

表2　各組大鼠血清Scr、BUN含量

經(jīng)過24天的造模，可以看出各模型組大鼠的體重、飲食、飲水、尿液、血液指標(biāo)均與正常對照組存在極顯著性差異，在一定程度上說明本試驗造模成功。從大鼠的各項生理生化指標(biāo)的情況可以看出，本試驗所誘導(dǎo)的模型為氮質(zhì)血癥償期的CRF模型。

2.2　治療期大鼠的各項指標(biāo)

2.2.1　大鼠一般生理狀況

正常對照組：生長情況、飲食情況及二便情況均正常，反應(yīng)靈敏，毛色有光澤，耳廓和口唇眼鼻粘膜紅潤。

病理模型組：在飼養(yǎng)過程中出現(xiàn)體毛干枯發(fā)黃不齊，易脫落，拱背，蜷縮，精神萎靡，活動減少等現(xiàn)象。

尿毒清藥物對照組：在治療過程中體毛逐漸變得有光澤，且體毛脫離狀況明顯緩解，活動量增多，腳部浮腫現(xiàn)象消失，尾部體溫恢復(fù)。

酸奶+藥物組：外部表現(xiàn)和癥狀與尿毒清藥物對照組相似。

2.2.2　大鼠的體重

治療過程中，各組大鼠的體重均呈增長狀態(tài)，病理模型組大鼠的體重增長情況較其他各組緩慢。治療過程中各組大鼠平均體重如表3所示。

由表3可以看出，治療前，各治療組與正常對照組比較有極顯著性差異（P＜0.01），而各治療組之間無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。

經(jīng)過28天的治療后，酸奶+藥物組與正常對照組比較無顯著性差異（P＞0.05），與病理模型組比較具有極顯著性差異（P＜0.01）；與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

由上述分析結(jié)果可以看出，經(jīng)過28天的治療后酸奶+藥物組大鼠的體重與正常組比較已無顯著性差異，在一定程度上說明酸奶配合藥物進(jìn)行治療對CRF緩解效果比較明顯。

2.2.3　大鼠的飲食和飲水情況

治療前，各治療組大鼠的飲食量和飲水量與正常對照組具有極顯著性差異（P＜0.01），各治療組之間無顯著差異（P＞0.05），具有可比性。治療前后各組大鼠的飲食和飲水變化情況見圖4、圖5。

圖4　不同階段大鼠日進(jìn)食量的差別

圖5　不同階段大鼠日飲水量的差別

結(jié)合圖4和圖5可以看出，病理模型組大鼠飲食和飲水情況說明，雖然大鼠自身具有一定的自愈能力，但在整個試驗期間，大鼠的飲食和飲水情況無顯著變化，說明了本次CRF的造模是成功的。

經(jīng)過28天的治療后，酸奶配合藥物治療組的飲食量和飲水量與病理模型組比較具有顯著性差異（P＜0.05），與尿毒清藥物對照組比較具無顯著性差異（P＞0.05），與正常對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2.4　大鼠24 h排尿量

治療前，各治療組大鼠與正常對照組具有極顯著差異（P＜0.01），各治療組之間大鼠24 h排尿量無顯著差異（P＞0.05），具有可比性，具體情況見圖6。

表3　治療過程中各組大鼠平均體重

圖6　不同階段大鼠24 h排尿量的差別

經(jīng)過28天的治療后，酸奶配合藥物治療組與正常對照組比較無顯著性差異（P＞0.05），與病理模型組比較有極顯著性差異（P＜0.05），與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

臨床研究表明，如果腎濃縮功能損害，每天尿量對溶質(zhì)荷的適應(yīng)性就會受限。尿液的濃縮達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)時，則排尿量增加。從本研究的試驗數(shù)據(jù)可以看出，酸奶配合藥物治療對于CRF大鼠的緩解作用優(yōu)于單獨使用藥物治療。

2.2.5　大鼠的尿蛋白含量

治療前后，分別對各組大鼠的尿液進(jìn)行了尿蛋白的定量檢測，檢測結(jié)果見圖7。

圖7　各組大鼠的尿蛋白含量

由圖7可以看出，治療前各治療組大鼠的尿蛋白含量與正常對照組比較均有極顯著的增高趨勢，且各治療組之間的尿蛋白含量無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。

經(jīng)過28天治療后，酸奶+藥物組的尿蛋白含量與尿毒清藥物對照組比較均具有顯著性差異（P＜0.05），與病理模型組比較具有極顯著性差異（P＜0.01），與正常對照組比較具有顯著性差異（P＜0.05）。

國外的動物試驗表明，蛋白尿的程度和腎衰發(fā)展速率密切相關(guān)。美國一組臨床的前瞻性研究中也證實，蛋白尿的嚴(yán)重性對慢性腎衰的發(fā)生發(fā)展有預(yù)示價值。以上數(shù)據(jù)在一定程度上說明了酸奶配合藥物治療對于CRF大鼠的緩解作用優(yōu)于單獨使用藥物治療。

2.2.6　大鼠氮代謝產(chǎn)物情況

腎功能衰竭時，其排泄調(diào)節(jié)功能和內(nèi)分泌代謝功能均受損害。血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN），是檢測腎功能不全程度的重要標(biāo)準(zhǔn)，也是檢測排泄調(diào)節(jié)功能損害的指標(biāo)。

2.2.6.1　大鼠血清Scr含量

治療前，除正常對照組外，各組大鼠的血清Scr含量與病理模型組無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。各組大鼠的血清Scr含量結(jié)果見圖8。

圖8　各組大鼠的血清肌酐含量

由圖8可知，經(jīng)過28天的治療后，酸奶+藥物組與病理模型組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），與正常對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

2.2.6.2　大鼠血清BUN含量

治療前，除正常對照組外，各組大鼠的血清BUN含量與病理模型組無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。各組大鼠的血清BUN含量測定結(jié)果見圖9。

圖9　各組大鼠的血清尿素氮含量

見圖9可知，經(jīng)過28天的治療后，酸奶+藥物組與病理模型組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），與正常對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）兩者分別為含氮有機物和蛋白質(zhì)代謝的中末產(chǎn)物，因此血中肌酐、尿素氮在一定程度上可以反映腎小球濾過功能的損害程度，是反映慢性腎衰竭的進(jìn)展重要標(biāo)志之一。從上述數(shù)據(jù)可以看出，酸奶配合藥物治療對于CRF大鼠Scr、BUN水平調(diào)節(jié)優(yōu)于單獨使用藥物治療。

2.2.7　血清Ca和P

鈣、磷代謝與腎臟有密切關(guān)系，鈣、磷代謝紊亂是CRF常見的并發(fā)癥。腎功能減退時，腎小球的濾過率降低，磷排泄減少，從而引起高磷血癥和低鈣血癥。各組大鼠治療前后血清中Ca和P的含量變化情況分別見圖10和圖11。

圖10　各大鼠的血清Ca含量

由圖10和圖11可知，治療前，各治療組血清Ca、P含量與正常對照組具有極顯著差異（P＜0.01），各治療組之間無顯著差異（P＞0.05），具有可比性。

治療后，酸奶+藥物組與病理模型組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），與正常對照組比較有顯著性差異 （P＜0.05）。

圖11　各大鼠的血清P含量

慢性腎衰竭患者身體中往往鈣磷比例失調(diào)，而駝乳中鈣磷比例合適，對糾正這種失調(diào)有很大作用。本試驗中病理模型組血鈣較正常對照組顯著降低，血磷較正常組顯著升高。從試驗數(shù)據(jù)中可以看出，酸奶配合藥物治療對于改善CRF引起的鈣磷代謝紊亂的效果較好。

2.2.8　大鼠的SOD、TP、NO

各組大鼠的SOD、TP、NO測定結(jié)果見表4。

表4　各組大鼠SOD、TP、NO的情況

研究表明，慢性腎功能衰竭可以引起低蛋白血癥，并可能抑制蛋白的合成。檢測血液指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過28天的治療后，血清TP的檢測結(jié)果顯示，酸奶+藥物組與病理模型組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），與正常對照組比較有顯著性差異 （P＜0.05）。

NO可以通過對腎臟血流動力學(xué)和交感神經(jīng)活性的作用，參與腎臟血流動力學(xué)、交感神經(jīng)活性的調(diào)節(jié)以及腎素釋放的調(diào)節(jié)。但過低或過高的NO不僅對腎臟起不到保護(hù)作用，反而對腎臟具有破壞作用。本試驗研究結(jié)果表明，酸奶+藥物組與病理模型組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與尿毒清藥物對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），與正常對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

臨床研究發(fā)現(xiàn)，慢性腎功能衰竭時SOD活性顯著降低并與BUN、Scr呈明顯的負(fù)相關(guān)。CRF時機體抗氧化能力降低，氧自由基清除系統(tǒng)代謝失?；蛩ソ?，自由基得不到清除，從而使SOD活性降低。血液生化檢測結(jié)果顯示，酸奶+藥物組與病理模型組比較具有極顯著差異（P＜0.01），與尿毒清藥物對照組和正常對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

以上數(shù)據(jù)說明酸奶配合藥物治療對CRF大鼠血清TP、SOD、NO水平的調(diào)節(jié)優(yōu)于單獨使用藥物治療。

3　結(jié)論

通過動物試驗發(fā)現(xiàn)，酸奶配合藥物治療可緩解腎衰大鼠的一般情況，減緩蛋白尿。

酸奶配合藥物治療可降低大鼠血肌酐、尿素氮水平，保護(hù)腎功能。

酸奶配合藥物治療可調(diào)節(jié)電解質(zhì)。

酸奶配合藥物治療可調(diào)節(jié)大鼠血清TP、NO水平，提高SOD水平，加強對體內(nèi)自由基的清除作用。

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