豬藍耳病抗體監(jiān)測及其規(guī)律的應(yīng)用

張成東　曲玖燕　彭先啟　郭海巖　崔松濤

（河南牧翔動物藥業(yè)有限公司，河南鄭州 450000）

日常監(jiān)測是預(yù)防和控制流行性疫病的重要基礎(chǔ)[1]，是養(yǎng)殖戶評估免疫程序合理性、選擇疫苗種類、掌握豬群健康狀態(tài)的重要手段。檢測數(shù)據(jù)可從側(cè)面反映豬場的管理水平高低。藍耳?。≒RRS）實驗室檢測方法主要包括抗原檢測和抗體檢測?？乖瓩z測包括聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）和實時熒光定量PCR（Real-time PCR）；抗體檢測包括免疫熒光試驗（IFA）、免疫過氧化物酶單層分析法（IPMA）、中和試驗（SVN）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。

由于藍耳病病毒（PRRSV）核衣殼蛋白（N蛋白）不能誘導(dǎo)產(chǎn)生病毒中和抗體，以N蛋白作為主要包被抗原的PRRSV抗體間接ELISA方法檢測結(jié)果，并不能反映機體的免疫狀態(tài)，故其不適合用于對疫苗免疫效果的評價[2]。盡管N蛋白抗體ELISA檢測結(jié)果不能真實反映豬的保護力，但是根據(jù)PRRS ELISA抗體S/P值的離散度結(jié)合多次抗體檢測，足以準確判斷豬群藍耳病的感染狀態(tài)及變化趨勢[3]。與其他檢測方法相比，ELISA檢測方法具有操作簡便、易于標準化、快速敏感等優(yōu)點，非常適合大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查和疫病監(jiān)測。

ELISA抗體檢測試劑盒作為市場上最早應(yīng)用的商品化檢測工具，是監(jiān)測PRRS的重要手段。目前，使用ELISA抗體檢測法追蹤并系統(tǒng)研究發(fā)病豬群在前驅(qū)期、明顯期及轉(zhuǎn)歸期等不同疾病發(fā)展階段PRRS抗體S/P值變化規(guī)律的文獻較少。為更全面揭示實際生產(chǎn)中PRRS的抗體變化規(guī)律，本研究跟蹤監(jiān)測了某規(guī)模化豬場藍耳病發(fā)病前驅(qū)期、明顯期及轉(zhuǎn)歸期的抗體S/P值。結(jié)合以上數(shù)據(jù)，筆者針對PRRSS/P值的變化規(guī)律與豬場生產(chǎn)成績的關(guān)系進行了探討研究，期望能夠為我國PRRS的監(jiān)測和防控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　血樣采集及處理

試驗地點：新鄉(xiāng)德豐養(yǎng)殖場，存欄600頭母豬。采血時間：分別于豬群發(fā)病的前驅(qū)期（2016年10月）、明顯期（2016年11月）和轉(zhuǎn)歸期（2017年3月）隨機選擇母豬并逐頭采集前腔靜脈血5m L，待全血凝固析出血清后，4000 r/m in離心10 m in，取血清置于1.5 m L EP管，4℃環(huán)境存放備用。

1.2　ELISA抗體檢測

RT-PCR法檢測PRRS發(fā)病初期母豬血清抗原，NSP2基因引物[4]F：5’-TGGGCGACAATGTCCCTAAC-3’，R：5’-GCTGAGTATTTTGGGCGTGTG-3’，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PRRS抗體檢測使用進口IDEXX試劑盒。PRRS抗體的有無（陽性/陰性）根據(jù)樣品的S/P值判定。如果S/P值＜0.4，樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陰性；如果S/P值≥0.4，樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陽性。

2　結(jié)果與分析

2.1　豬場首次血清PRRS抗原檢測結(jié)果

用RT-PCR的方法擴增NSP2基因，目的基因片段涵蓋變異株的基因缺失片段，用于區(qū)分經(jīng)典株和變異株[5]。經(jīng)典株擴增基因片段508 bp，變異株擴增基因片段418 bp。RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳顯示，24份血樣中（共25份血樣，其中1份數(shù)據(jù)丟失）共檢測出7份抗原陽性，陽性率29.2%，說明母豬群存在PRRSV野毒感染，且豬群中存在經(jīng)典株和變異株（見圖1），存在病毒血癥的豬群中，變異毒株所占比重較大（占87.5%）。該豬群免疫過經(jīng)典株疫苗，未免疫過高致病株疫苗，表明本次發(fā)病由PRRSV變異株引起，可能與豬場8月份引進的150頭后備母豬有關(guān)。

2.2　豬場連續(xù)3次血清PRRS抗體監(jiān)測結(jié)果

首次抗體檢測結(jié)果：母豬采樣25頭，S/P值介于0.29～3.22；第二次抗體檢測結(jié)果：母豬采樣16頭，S/P值介于0.18～4.01；第三次抗體檢測結(jié)果：母豬采樣28頭，S/P值介于0.45～2.39。從母豬群抗體檢測結(jié)果可以明顯看出，豬群發(fā)病前驅(qū)期、明顯期和轉(zhuǎn)歸期PRRS抗體S/P值先升高再下降；其中豬場PRRS穩(wěn)定以后，抗體S/P值低于2.5（見圖2）。

2.3　豬場連續(xù)3次血清PRRS抗體S/P值分布

圖1　RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

IDEXX PRRS抗體檢測S/P＜0.4，PRRS為陰性；S/P≥0.4，PRRS為陽性；當豬群S/P≥2.5的比例大于5%，離散度大于40%時，豬群藍耳病風險較高?？贵w檢測結(jié)果數(shù)值分布顯示（見表1），發(fā)病初期S/P值平均值為1.40，離散度為63.08%，S/P值≥2.5的比例為16%；發(fā)病高峰期S/P值平均值為1.91，離散度為63%，S/P值≥2.5的比例為31.25%；康復(fù)期S/P值平均值為0.84，離散度為45.82%，S/P值≥2.5的比例為0。由3次抗體檢測S/P值的分布可知，發(fā)病初期和高峰期PRRS S/P平均值會逐漸增大，且離散度較高；當96.1%的母豬群PRRS抗體S/P值介于0.4～2.0時，豬群恢復(fù)正常。

圖2　母豬連續(xù)3次PRRS抗體檢測結(jié)果

2.4　豬場生產(chǎn)情況

從2015年10月份到2016年2月份，豬場育肥豬群相對穩(wěn)定（月死淘率在0.7%以內(nèi)），母豬群和保育豬群一直很不穩(wěn)定。如表2所示，母豬分娩率從2015年10月份到2016年1月份一直低于豬場的正常生產(chǎn)水平，2月份以后分娩率指標恢復(fù)正常；保育豬從2015年10月份到2016年1月份死淘率居高不下，一直遭受副豬嗜血桿菌和腦炎性鏈球菌的困擾，嚴重時仔豬在哺乳期間就出現(xiàn)整窩發(fā)熱、喘氣的現(xiàn)象，直至3月份以后生產(chǎn)恢復(fù)正常。

3　討論

3.1　PRRSV ELISA抗體消長規(guī)律

由于豬場之間是否免疫PRRS疫苗及接種疫苗毒株情況不一，且PRRSV ELISA檢測的抗體是非保護性中和抗體，故在通過抗體檢測數(shù)據(jù)判斷豬場PRRS感染狀態(tài)時，不能僅僅依靠單次檢測結(jié)果[6]（并非S/P值越高越穩(wěn)定），而要結(jié)合抗體檢測結(jié)果、豬場的疫苗免疫情況和各階段豬群的生產(chǎn)情況。判斷一個豬場PRRS的變化趨勢，需要定期監(jiān)測抗體，并綜合分析。

通過發(fā)病前驅(qū)期、明顯期、轉(zhuǎn)歸期3次抗體S/P值的變化可知，在豬場PRRS由穩(wěn)定到不穩(wěn)定的過程中，抗體S/P平均值會逐漸增大，且抗體離散度較大[7]；而在豬場PRRS由不穩(wěn)定到穩(wěn)定的過程中，抗體S/P平均值會逐漸變小，且抗體離散度較小。結(jié)合豬場的實際生產(chǎn)情況，當絕大多數(shù)（96.2%）豬群S/P值介于0.4～2.0時，且離散度低于45%時，母豬分娩率達到85%以上，保育豬成活率達到96%以上，豬群藍耳病處于陽性穩(wěn)定狀態(tài)。

表1　母豬連續(xù)3次抗體水平檢測結(jié)果分析

表2　豬場2015年10月至2016年3月母豬分娩率和保育豬成活率

3.2　PRRS抗體監(jiān)測及其規(guī)律的應(yīng)用

在中國普遍“藍”的大環(huán)境下[8-10]，中小規(guī)模養(yǎng)殖場應(yīng)該努力做到PRRS陽性穩(wěn)定狀態(tài)。定期檢測各階段豬群的PRRS抗體，有助于掌握PRRS在各階段豬群的循環(huán)情況，監(jiān)控整個豬場PRRS的變化趨勢，便于及時做出決策（淘汰、藥物控制或者疫苗免疫）。及時淘汰S/P值高于2.5且生產(chǎn)成績很差的母豬及8胎以上的母豬，保持合理的種豬胎次結(jié)構(gòu)；在引進后備種豬時，了解后備豬群的PRRS感染狀態(tài)，做好疫苗馴化或者淘汰母豬馴化[11]，有助于種豬群維持PRRS陽性穩(wěn)定狀態(tài)。對于保育和育肥豬群PRRS階段性發(fā)病問題，可以在豬群發(fā)病前1個月做經(jīng)典株弱毒苗的免疫，有利于維持豬群PRRS陽性穩(wěn)定，減少損失；對于PRRS陽性豬群，減少應(yīng)激，定期投喂大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[12-14]，有助于維持豬群良好的生產(chǎn)狀態(tài)。

[1]楊漢春.中國養(yǎng)豬行業(yè)主要疫病監(jiān)測預(yù)防 [J].獸醫(yī)導(dǎo)刊,2016(21)：19-20.

[2]Nelson EA,Christopher-Hennings J,Benfield DA.Serum imm une responses to the p roteins of porcine rep roductive and resp iratory synd rome(PRRS)virus[J].Journal o f Veterinary Diagnostic Investigation,1994,6(4)：410-415.

[3]周慶華.規(guī)模豬場豬繁殖與呼吸障礙綜合征血清學(xué)抗體監(jiān)測研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[4]LiB,Fang L,Guo X,et al.Ep idem iology and evolutionary charac teristicso f theporc inerep roductiveandresp iratory synd rom e virus in China between 2006 and 2010[J].Journal of ClinicalMicrobio logy,2011,49(9)：3175.

[5]Fang Y,Kim D Y,Ropp S,et a l.Heterogeneity in Nsp2 of European-like porcine rep roductive and resp iratory synd rome viruses iso lated in the United States[J].Virus Research,2004,100(2)：229-235.

[6]康樺華.規(guī)?；N豬場豬藍耳病和豬瘟抗體變化規(guī)律研究及在健康流程管理中的應(yīng)用[D].廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué),2016.

[7]吳靜波,黃健強,南文金,等.粵北地區(qū)規(guī)?；i場藍耳病抗體水平及其與病毒血癥關(guān)系的初步研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,43(8)：143-150.

[8]侯麗麗,趙鐵柱,遇秀玲,等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)學(xué)報,2009,29(6)：677-682.

[9]郭振華,陳鑫鑫,李睿,等.中國豬繁殖與呼吸綜合征病毒流行歷史及現(xiàn)狀[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2018,49(1)：1-9.

[10]安同慶.我國類NADC30豬藍耳病的流行現(xiàn)狀 [J].中國豬業(yè),2017,12(11)：24-25.

[11]Laura Batista.后備豬馴化在豬藍耳病防控中的作用[J].曲向陽,譯.豬業(yè)科學(xué),2017,34(4)：34-35.

[12]曲向陽,李喜煥,姚火春.替米考星防控藍耳病及相關(guān)細菌性肺炎的研究進展[J].養(yǎng)豬,2012(2)：84-87.

[13]王玉,付寶明,常靖,等.替米考星對豬藍耳病防控的研究進展[J].中國豬業(yè),2017,12(10)：53-55.

[14]朱利俊,張錦國,田繼承,等.替米考星對初產(chǎn)母豬藍耳病的效果觀察[J].畜牧獸醫(yī)科學(xué)(電子版),2017(9)：4-5.