PRKAα1基因多態(tài)性與東亞人群胃癌易感性研究的meta分析

楊美娟，張 　東，樊文靜，張 　敏，尤崇革*

（蘭州大學(xué)第二醫(yī)院檢驗科，甘肅　蘭州　730030）

據(jù)統(tǒng)計，2012年全球胃癌新發(fā)病例約95.1萬，占全球癌癥發(fā)病總數(shù)的6.8%，其中約70%的病例發(fā)生于發(fā)展中國家，而50%發(fā)生在東亞地區(qū)。據(jù)全球范圍調(diào)查結(jié)果顯示，東亞地區(qū)胃癌患者死亡率明顯高于西非地區(qū)[1]。而胃癌的發(fā)生是環(huán)境因素、遺傳因素等共同作用的結(jié)果。PRKAα1基因是腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK)的α1亞基[2]，該基因編碼的蛋白是所有真核生物代謝中樞的調(diào)節(jié)物質(zhì)之一，此蛋白有控制和調(diào)節(jié)機體物質(zhì)、能量代謝的作用[3]。相關(guān)研究表明被PRKAα1基因激活的AMPK與正常的細胞周期和凋亡、腫瘤細胞的生長增殖及侵襲轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[4-7]。

全基因組關(guān)聯(lián)分析顯示PRKAα1是胃癌患者的遺傳易感基因，但針對該位點基因在胃癌高發(fā)區(qū)(東亞)進行的相關(guān)性實驗研究結(jié)果并不完全一致，需綜合相關(guān)資料進行meta分析，以明確PRKAα1基因多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)性。

1　資料和方法

1.1　文獻檢索

以 “ PRKAα1” 、 “ gene polymorphism” 、“gastric cancer”、“stomach cancer”、“stomach neoplasms”等作為關(guān)鍵詞在英文數(shù)據(jù)庫PubMed、Web of Science中進行檢索，同時以“PRKAα1基因多態(tài)性”和“胃癌”等作為主題詞在中國知網(wǎng)、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫檢索。檢索年限至2017年10月。

1.2　文獻的選擇標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1文獻的納入標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)包括：①已公開發(fā)表涉及PRKAα1基因多態(tài)性與胃癌易感性關(guān)系研究的中英文文獻；②研究類型為病例-對照研究；③各文

獻能提供原始基因型頻率數(shù)據(jù)或者相對危險度(odds ratio，OR)等統(tǒng)計學(xué)綜合指標(biāo)。

1.2.2文獻的排除標(biāo)準(zhǔn) 排除標(biāo)準(zhǔn)包括：①病例報告、會議論文以及綜述類文章；②數(shù)據(jù)重復(fù)的文獻；③報道人群為非東亞人群；④文章中基因型分布不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。

1.2.3文獻的質(zhì)量評價 根據(jù)紐卡斯?fàn)?渥太華量表(Newcastle-Ottawa scale，NOS)對上述病例-對照研究進行質(zhì)量評估。NOS量表通過研究人群選擇(共4分)、組間可比性(共2分)和暴露因素或結(jié)局(共3分)這3個方面對納入文獻進行評分。評分在0～4分時歸為低質(zhì)量研究，5～9分歸為高質(zhì)量研究。

1.3　數(shù)據(jù)提取

由兩位研究者獨立提取數(shù)據(jù)，并對數(shù)據(jù)的信息判斷達成一致。本研究主要針對東亞胃癌群體的PRKAα1基因多態(tài)性進行分析。根據(jù)研究的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)提取數(shù)據(jù)，提取的數(shù)據(jù)內(nèi)容主要包括：作者、發(fā)表時間、研究樣本地區(qū)、種族、基因分型的方法、對照來源以及病例和對照組中各個基因型頻數(shù)。根據(jù)人群的種族差異將研究對象分為中國和韓國人群；如研究包含多種人群，即對不同人群的數(shù)據(jù)分別抽提分類后再進行分析。

1.4　統(tǒng)計學(xué)分析

采用STATA 12.0軟件進行meta分析。PRKAα1基因多態(tài)性與胃癌風(fēng)險的相關(guān)性通過計算比值比(odds ratio，OR)和95%可信區(qū)間(confidence interval，CI)來衡量，合并OR值采用Z檢驗評估。采用Q檢驗分析評估納入研究之間的異質(zhì)性：P≤0.10且I2≥50%時認為存在顯著異質(zhì)性，采用隨機效應(yīng)模型計算每項研究的合并效應(yīng)量OR值；P＞0.10且I2＜50%時認為不存在顯著異質(zhì)性，則采用固定效應(yīng)模型進行分析。根據(jù)Begg’s檢驗繪制漏斗圖，評估納入研究的發(fā)表偏倚。通過剔除單項研究的方法評估該研究對合并效應(yīng)量的影響，進行敏感性分析，以p＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　文獻檢索流程及納入文獻的基本特征

按照關(guān)鍵詞檢索，共有16篇報道初步納入分析。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，排除7篇報道文獻，其中2篇綜述類、3篇無法提供基因型數(shù)據(jù)的研究、1篇重復(fù)研究和1篇不符合Hardy-Weinberg定律。最終有9項研究符合要求，包含9 840例患者和10 402例健康對照。納入研究均為病例-對照研究，包括6項基于中國人群的研究和3項基于韓國人群的研究；其中有8項研究的對照人群來源于醫(yī)院和體檢中心，其余1項來源于社區(qū)志愿者。胃癌診斷主要依據(jù)組織病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。納入研究的基本特征見表1。

表1　納入研究的基本特征

2.2　Meta分析結(jié)果

2.2.1rs13361707C＞T多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)聯(lián)最終納入9項研究，其中8項研究與胃癌易感性相關(guān)，病例組9 840例，對照組10 402例，其多態(tài)性與東亞人群胃癌易感性無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。按國家進行亞組分析顯示，顯性模型的合并OR=0.687，95%CI(0.614～0.769)，P=0.000；隱性模型的合并OR=0.662，95%CI(0.594～0.737)，P=0.000；加性模型的合并OR=0.553，95%CI(0.484～0.632)， P=0.000； 共 顯 性 模 型 的 合 并OR=0.766，95%CI(0.682～0.859)，P=0.000；該結(jié)果顯示在4種模型下韓國人群患胃癌風(fēng)險降低。而該位點基因多態(tài)性與中國人群以及中國南北方人群易感性均無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，結(jié)果見表2，圖1。

2.2.2rs10074991G＞A多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)聯(lián)最初納入4項研究，其中1項研究無法獲得具體數(shù)據(jù)，最終納入3項研究。3項研究均與胃癌易感性相關(guān)，病例組1 381例，對組照1 380例。Meta分析結(jié)果顯示：顯性模型的合并OR=0.590，95%CI(0.490～0.700)，P=0.000；隱性模型的合并OR=0.637，95%CI(0.535～0.759)，P=0.000；加性模型的合并OR=0.478，95%CI(0.385～0.593)， P=0.000； 共 顯 性 模 型 的 合 并OR=0.651，95%CI(0.541～0.784)，P=0.000；該結(jié)果提示在4種模型下東亞人群患胃癌風(fēng)險降低。地域亞組分析顯示，顯性模型的合并OR=0.610，95%CI(0.510～0.730)，P=0.000；隱性模型的合并OR=0.638，95%CI(0.534～0.762)，P=0.000；加性模型的合并OR= 0.489，95%CI(0.392～0.609)， P=0.000共 顯 性 模 型 的 合 并OR=0.675，95%CI(0.558～0.816)，P=0.000；該結(jié)果提示在4種模型下韓國人群患胃癌風(fēng)險降低；除隱性模型外，中國人群患胃癌風(fēng)險降低。結(jié)果見表3，圖2。

表2　rs13361707C＞T基因多態(tài)性與胃癌易感性的meta分析結(jié)果

2.2.3rs154268T＞C多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)聯(lián)最終納入2項研究，且2項研究均與胃癌易感性相關(guān)，病例組1 323例，對照組1 321例。Meta分析結(jié)果顯示，顯性模型的合并OR=1.480，95%CI(1.270～1.730)，P=0.000； 加 性 模 型 的 合 并 OR=1.599， 95%CI(1.079～2.368)，P=0.019；共顯性模型的合并OR=1.469，95%CI(1.249～1.727)，P=0.000；該結(jié)果提示：除隱性模型外，韓國人群患胃癌風(fēng)險增加。結(jié)果見表4。

表3　rs10074991基因多態(tài)性與胃癌易感性的meta分析結(jié)果

圖2　rs10074991基因多態(tài)性顯性模型東亞地區(qū)(中國和韓國)亞組meta分析森林圖

2.2.4rs3805486T＞C多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)聯(lián)最終納入2項研究，只有1項研究與胃癌易感性相關(guān)，病例組1 320例，對照組1 318例。Meta分析結(jié)果顯示，顯性 模 型 的 合 并 OR=0.730， 95%CI(0.630～0.860)， P=0.000； 隱 性 模 型 的 合 并 OR=0.600， 95%CI(0.433～0.832)，P=0.002；加性模型的合并OR=0.770，95%CI(0.657～0.903)， P=0.001； 共 顯 性 模 型 的 合 并 OR=0.537，95%CI(0.385～0.749)，P=0.000；該結(jié)果提示在4種模型下韓國人群患胃癌風(fēng)險降低。結(jié)果見表4。

表4　rs154268、rs3805486、rs6882903基因多態(tài)性與胃癌易感性的meta分析結(jié)果(n=2)

2.2.5rs6882903C＞A多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)聯(lián)最終納入2項研究，且2項研究均與胃癌易感性相關(guān)，病例組1 322例，對照組1 321例。Meta分析結(jié)果顯示，顯 性 模 型 的 合 并 OR=1.340， 95%CI(1.14～1.58)， P=0.000； 加 性 模 型 的 合 并 OR=1.334， 95%CI(1.127～1.579)，P=0.001；該結(jié)果顯示，在顯性和加性模型下，韓國人群患胃癌風(fēng)險增加。結(jié)果見表4。

2.3　敏感性分析和發(fā)表偏倚分析

逐一剔除單項研究并計算各個位點在4種模型下單項研究對合并效應(yīng)量的影響，結(jié)果顯示該影響無明顯變化，OR值穩(wěn)定，提示本研究合并的結(jié)果基本可靠；對各位點的4種基因模型meta分析進行Begg’s檢驗和Egger’s檢驗，結(jié)果提示無發(fā)表偏倚存在(P＞0.05)；見表5、圖3和圖4。

表5　PRKAα1基因多態(tài)性4種模型發(fā)表偏倚分析結(jié)果

圖3　rs13361707位點顯性模型與胃癌易感相關(guān)性研究的發(fā)表偏倚Begg’s漏斗圖

3　討論

圖4　rs10074991位點顯性模型與胃癌易感相關(guān)性研究的發(fā)表偏倚Begg’s漏斗圖

PRKAα1基因位于5號染色體p13.1，全長38 817 bp，由10個外顯子和9個內(nèi)含子組成，該基因是AMPKα1亞基的編碼基因[2]。AMPK是由α、β和γ 3個亞基組成的異源三聚體復(fù)合物[15]，α亞基由α1和α2兩個基因編碼，α亞基起催化作用，β和γ亞基起調(diào)節(jié)作用。PRKAα1激活的AMPK與細胞周期、細胞凋亡、腫瘤細胞的生長增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[4-7]。rs13361707位 于 PRKAα1 基 因 的 第 1個 內(nèi) 含 子 上 ，rs10074991、rs154268、rs3805486、rs6882903位于該基因的其他內(nèi)含子中，而這5個位點對胃癌發(fā)病的影響機制尚待進一步研究，但研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子中的堿基變異會激活剪切位點從而影響剪切，可能導(dǎo)致疾病的發(fā)生；有些內(nèi)含子中間的堿基變異雖不影響剪切，也可能與疾病相關(guān)[16]，可能是某些內(nèi)含子中有編碼與相關(guān)疾病發(fā)生有關(guān)的蛋白質(zhì)的基因[17]。

rs13361707位點多態(tài)性與胃癌易感性的meta分析結(jié)果顯示，該位點多態(tài)性與東亞人群胃癌的易感性無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，結(jié)果存在顯著異質(zhì)性。亞組分析結(jié)果顯示，該位點多態(tài)性與中國人群胃癌的易感性也無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，且結(jié)果有異質(zhì)性。由Tian等[18]研究表明，rs13361707位點T基因頻率在不同地區(qū)、不同種族有所差異。可推測東亞、中國地區(qū)存在顯著的異質(zhì)性可能是不同種族、環(huán)境和飲食習(xí)慣導(dǎo)致不同的遺傳背景所致。而其多態(tài)性與韓國人群胃癌的易感性有明顯相關(guān)性，提示該位點攜帶T等位基因(TT/TC)可降低患胃癌風(fēng)險，結(jié)果無異質(zhì)性。rs10074991位點在4種模型下均與東亞人群胃癌的易感性有關(guān)，其攜帶A等位基因(AA/AG)可使患胃癌風(fēng)險降低。亞組分析結(jié)果顯示，在4種模型下韓國人群患胃癌風(fēng)險降低；除隱性模型外，其余3種模型下中國人群患胃癌風(fēng)險降低。且該位點在4種模型下分析結(jié)果均無異質(zhì)性。rs154268位點meta 分析結(jié)果顯示，除隱性模型外，韓國人群患胃癌風(fēng)險增加，提示CC基因型可增加韓國人群患胃癌的風(fēng)險且結(jié)果無異質(zhì)性。rs3805486位點meta分析結(jié)果顯示，在4種模型下韓國人群患胃癌風(fēng)險降低，提示該位點攜帶C等位基因可降低患胃癌風(fēng)險，且其在4種模型下結(jié)果均無異質(zhì)性。rs6882903位點meta分析結(jié)果顯示，在顯性和加性模型下韓國人群胃癌風(fēng)險增加，提示AA基因型可增加韓國人群患胃癌風(fēng)險，結(jié)果無異質(zhì)性。

PRKAα1 基因5個位點敏感性分析結(jié)果顯示，單項研究剔除后對總體(4種模型)分析結(jié)果無明顯影響，OR值穩(wěn)定，提示研究合并穩(wěn)定性好；rs13361707、rs10074991兩位點在4種基因模型下進行Begg’s檢驗和Egger’s檢驗，結(jié)果提示無發(fā)表偏倚存在，說明結(jié)論可靠。rs154268、rs3805486、rs6882903該3個位點的4種基因模型進行Begg’s檢驗結(jié)果提示無發(fā)表偏倚存在，說明結(jié)論可靠。這3個位點納入研究較少，故未做Egger’s檢驗(納入研究太少時，做漏斗圖無意義，檢驗效力不足)。

本meta分析還存在一定的局限性：①本meta分析納入的文獻較少，需要更多，更高質(zhì)量的研究去證實；②中國組異質(zhì)性顯著，須進一步分析異質(zhì)性來源；③研究人群僅為東亞人群，結(jié)果不一定適合其他人群；④對照組來源的納入標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，大多數(shù)來自醫(yī)院對照，由于研究數(shù)量的限制，未進行對照組來源的亞組分析；⑤大部分有關(guān)位點與胃癌的研究主要集中在東亞范圍內(nèi)的中國和韓國地區(qū)，未收集到日本地區(qū)關(guān)于該位點與胃癌的研究。雖然本研究納入9 840例患者和10 402例健康對照，樣本數(shù)據(jù)不夠多，但具有一定的參考價值，期待有更多相關(guān)的研究發(fā)表，以納入和更新meta分析結(jié)果。

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