老年胃癌患者血清腫瘤標(biāo)志物及細(xì)胞因子的表達(dá)及意義

胡　泓　龔　柳　孫季萍

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院下沙院區(qū)腫瘤內(nèi)科，浙江　杭州　310018)

胃癌是常見(jiàn)的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤，常見(jiàn)于老年人，具有較高的發(fā)病率和死亡率，早期癥狀較為隱匿或僅有輕微癥狀，當(dāng)出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)，病變已屬中晚期〔1,2〕。因此，早期及時(shí)有效診斷和治療具有重要意義。目前胃癌的診斷主要依據(jù)病理檢測(cè)、影像檢測(cè)及胃鏡活檢等方法，難度大，確診晚，并且費(fèi)用較高〔3〕。隨著近年來(lái)血清學(xué)、免疫學(xué)的不斷進(jìn)展，由于具有操作快捷、費(fèi)用低廉及痛苦小等特點(diǎn)，作為癌前病變及胃癌篩查的一種有效手段〔4〕。本研究探討老年胃癌患者血清腫瘤標(biāo)志物、外周T淋巴細(xì)胞亞群、Dickkopf(DKK)-1、淋巴細(xì)胞活化基因(LAG)-1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和血管生成素(Ang)-2的表達(dá)及意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院于2013年1月至2014年12月收治的老年胃癌患者41例作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)胃鏡下活組織病理檢查確診；②年齡≥70歲；③簽訂知情同意書(shū)；④經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核且批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤如肺癌、肝癌等；②精神疾病者；③合并肺、腎、肝等功能?chē)?yán)重異常者。觀察組男29例、女12例，年齡70～87〔平均(79.83±4.62)〕歲，臨床分期：Ⅰ期3例、Ⅱ期7例、Ⅲ期19例、Ⅳ期12例。另選同期健康體檢者40例作為對(duì)照組，男27例、女13例，年齡70～89〔平均(79.34±5.14)〕歲，兩組年齡、性別具有可比性。

1.2方法

1.2.1腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)包括糖類(lèi)抗原(CA)199、CA724、癌胚抗原(CEA)，所有研究對(duì)象于清晨空腹采集外周靜脈血6 ml，離心，分離血清標(biāo)本，置于-70℃下保存待測(cè)，離心條件：離心半徑15 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min、時(shí)間10 min。采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定CA199、CA724、CEA含量，儀器為美國(guó)雅培公司i2000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，試劑盒均來(lái)自上海博湖生物科技發(fā)展有限公司，操作嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)。

1.2.2外周T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)所有研究對(duì)象于清晨空腹采集外周靜脈血3 ml，將其放置于EDTA抗凝管中，且依次加入10 μl CD3+、CD4+、CD8+抗體，放置于室溫條件下避光孵育30 min，然后加入溶血素200 μl于每管中，于室溫條件下避光放置15 min，裂解紅細(xì)胞。觀察溶液澄清透明后，加入1 ml的預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)中，再放置于室溫條件下以15 cm為離心半徑、3 000 r/min為轉(zhuǎn)速、12 min為離心時(shí)間，分離血清，然后再滴加100 μl的1%多聚甲醛溶液中固定，測(cè)定外周血T淋巴細(xì)胞亞群，應(yīng)用美國(guó)BD公司的流式細(xì)胞儀及配套試劑。

1.2.3DKK-1和LAG-1檢測(cè)取1.2.1血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定DKK-1和LAG-1含量，儀器為日立7600型全自動(dòng)生化分析儀，試劑盒來(lái)自上海雙贏生物科技有限公司，操作嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.2.4VEGF和Ang-2檢測(cè)取1.2.1血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定VEGF和Ang-2含量，儀器為日立7600型全自動(dòng)生化分析儀，試劑盒來(lái)自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，操作嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS22.0軟件行χ2及t檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

2.1兩組血清腫瘤標(biāo)志物含量比較見(jiàn)表1。研究組血清CA199、CA724和CEA含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。

2.2兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較見(jiàn)表2。研究組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.3兩組血清DKK-1和LAG-1含量比較見(jiàn)表3。研究組血清DKK-1和LAG-1含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。

2.4兩組血清VEGF和Ang-2含量比較見(jiàn)表4。研究組血清VEGF和Ang-2含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。

表1　兩組血清腫瘤標(biāo)志物含量比較

表2　兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較

表3　兩組血清DKK-1和LAG-1含量比較

表4　兩組血清VEGF和Ang-2含量比較

3　討　論

胃癌發(fā)生、發(fā)展是多基因參與的一種漸進(jìn)性演變過(guò)程。早期胃癌主要經(jīng)手術(shù)切除治療后生存率高、病情轉(zhuǎn)歸理想，但對(duì)于中晚期胃癌患者手術(shù)切除率低、死亡率較高〔5〕。目前，早期胃癌診斷率較低，這與臨床上缺乏早期有效的篩查指標(biāo)相關(guān)。

腫瘤標(biāo)志物主要是由腫瘤細(xì)胞分泌或者機(jī)體對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)產(chǎn)生反應(yīng)而分泌的物質(zhì)。很多情況下，一種腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生多種腫瘤標(biāo)志物〔6，7〕。CA199是黏蛋白型的一種糖類(lèi)蛋白腫瘤標(biāo)志物，主要存在于胃腸組織中，目前已將其作為胃癌診斷為較可靠的一種腫瘤標(biāo)志物〔8〕。CA724是新型的一種腫瘤標(biāo)志物，主要是一種高分子糖蛋白，是目前用于胃癌診斷的最佳腫瘤標(biāo)志物，對(duì)胃癌具有較高的敏感性和特異性〔9〕。CEA較為復(fù)雜的一種含糖蛋白質(zhì)，其廣泛于內(nèi)胚葉起源的消化系統(tǒng)腫瘤中存在，對(duì)胃癌、大腸癌的療效判定具有重要意義〔10〕。近年研究顯示，胃癌患者血清CA199、CA724和CEA較健康體檢者明顯上升〔11〕。本研究表明，老年胃癌患者血清CA199、CA724和CEA含量異常升高，可作為胃癌診斷的輔助指標(biāo)。

目前，臨床證實(shí)胃癌發(fā)生、發(fā)展與免疫功能關(guān)系緊密，當(dāng)機(jī)體免疫功能失調(diào)能夠在一定程度上預(yù)測(cè)腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后。宿主對(duì)腫瘤組織存在自然抵抗作用，機(jī)體的免疫應(yīng)答可部分清除腫瘤細(xì)胞，而在抗腫瘤方面由T淋巴細(xì)胞階段的細(xì)胞免疫發(fā)揮重要作用〔12〕。在外周血T淋巴細(xì)胞中，CD3+、CD4+在免疫應(yīng)答中具有擴(kuò)大和促進(jìn)免疫反應(yīng)的正向作用，而其中CD8+具有抑制細(xì)胞免疫進(jìn)程的負(fù)向作用。而CD3+、CD4+、CD8+在正常機(jī)體內(nèi)保持著較為穩(wěn)定的一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡〔13〕。本研究表明，老年胃癌患者細(xì)胞免疫功能明顯下降。

DKK-1和LAG-1是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的惡性腫瘤篩查指標(biāo)，其中DKK-1主要對(duì)Wnt/β-catenin通路具有抑制作用，且參與癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)；而LAG-1主要對(duì)細(xì)胞的增殖和活化具有抑制作用，且可參與癌細(xì)胞的免疫逃逸過(guò)程〔14〕。DKK-1是Dickkopfs家族的一員，其一可與Wnt的LRP5/6結(jié)合后影響受體復(fù)合物的形成，從而阻礙Wnt信號(hào)通路；且可直接與膜受體結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移〔15〕。LAG-1是免疫球蛋白家族中的一種負(fù)性共刺激因子，與配合結(jié)合后可抑制T淋巴細(xì)胞的增殖、分化和成熟，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，通過(guò)檢測(cè)LAG-1能夠評(píng)估腫瘤的惡性程度〔16〕。本研究表明，老年胃癌患者血清DKK-1和LAG-1含量明顯升高。

VEGF具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖及誘導(dǎo)血管生成，促進(jìn)小靜脈和尾靜脈通透性增加等作用，其與腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和腫瘤血管形成密切相關(guān)。有研究顯示，胃癌患者血清VEGF含量明顯升高〔17〕。Ang家族是新型的一類(lèi)血管生成調(diào)節(jié)劑，其中Ang-2能與Tie-2受體結(jié)合后不能引起Tie-2磷酸化，從而阻斷血管形成信號(hào)，同時(shí)還能夠離斷血管周細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合，此外，Ang-2還能夠有效地刺激內(nèi)皮始祖細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步促使新生血管生成。目前，Ang-2在胃癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤細(xì)胞中檢測(cè)到Ang-2的生成〔18〕。本研究表明，老年胃癌患者血清VEGF和Ang-2含量明顯升高。

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