老年SCLC患者GSS基因遺傳變異與鉑類(lèi)藥物化療效果及預(yù)后的關(guān)系

楊　穎　王　健

(武漢市第一醫(yī)院腫瘤一科，湖北　武漢　430000)

小細(xì)胞肺癌(SCLC)屬于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，雖然僅占肺癌總數(shù)的20%，但其惡性程度高且多發(fā)于老年人群，給病情控制帶來(lái)了困難〔1〕?？ㄣK、順鉑與足葉乙甙聯(lián)合治療為一線(xiàn)化療方案，但療效存在明顯的個(gè)體差異性〔2〕。影響化療效果的分子機(jī)制包括DNA修復(fù)能力、細(xì)胞內(nèi)藥物濃度和解毒能力等〔3〕。谷胱甘肽可通過(guò)干擾DNA分子特異位點(diǎn)形成的共價(jià)結(jié)合物等途徑來(lái)使鉑類(lèi)藥物失效〔4〕；谷胱甘肽合成酶(GSS)基因可編碼合成酶蛋白，影響谷胱甘肽的生物合成〔5〕。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于GSS基因遺傳變異與SCLC化療效果關(guān)系的研究報(bào)道較少。本次研究旨在探討老年SCLC患者GSS基因4個(gè)標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)(htSNP)遺傳變異與鉑類(lèi)藥物化療效果及預(yù)后的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2008年1月至2013年10月在武漢市第一醫(yī)院確診，接受鉑類(lèi)藥物化療的老年小細(xì)胞肺癌患者451例。入選患者年齡≥60歲，在本院行首個(gè)療程化療，療程≥2個(gè)周期；未合并其他原發(fā)腫瘤，患者之間無(wú)直系親緣關(guān)系。其中男353例，女98例；年齡60～78歲，平均(68.36±5.09)歲；有吸煙史319例，無(wú)吸煙史132例；KPS評(píng)分≤80分215例，>80分236例；局限期217例，廣泛期234例。

1.2治療方案與療效評(píng)價(jià)入選患者均給予含鉑類(lèi)藥物化療，其中EP方案(順鉑+足葉乙甙)231例，CE方案(卡鉑+足葉乙甙)220例。130例接受單純化療，321例化療后接受輔助放療。2個(gè)周期治療結(jié)束后評(píng)價(jià)近期化療效果，依據(jù)Recist標(biāo)準(zhǔn)分為；完全緩解、部分緩解、病情穩(wěn)定、病情進(jìn)展。通過(guò)電話(huà)結(jié)合門(mén)診隨訪(fǎng)收集患者生存例數(shù)、死亡例數(shù)、總生存時(shí)間，隨訪(fǎng)截止到2016年10月5日，隨訪(fǎng)時(shí)間32～172個(gè)月。

1.3基因組DNA提取入選患者化療前抽取外周靜脈血4 ml，抗凝處理后置于-80℃冰箱中保存待測(cè)，使用QIAGEN DNA血液微型試劑盒(上海睿安生物科技有限公司)提取基因組DNA。分光光度法檢測(cè)獲取DNA的純度和濃度。

1.4htSNP位點(diǎn)篩選和基因分型通過(guò)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心的dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)和千人基因組(1000 genomes project)計(jì)劃數(shù)據(jù)庫(kù)篩選中國(guó)漢族且在本院接受鉑類(lèi)藥物化療的老年SCLC患者次要等位基因頻率(MAF)≥0.1，得到GSS基因的標(biāo)簽htSNP共4個(gè)位點(diǎn)：位于內(nèi)含子的rs3136185G>A、rs8376881G>A、rs3384795T>G，位于3′近基因區(qū)的rs836632T>C，MAF分別為0.21、0.33、0.34、0.52。通過(guò)Sequenom Mass Array SNP 基因型分析技術(shù)進(jìn)行基因分型。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，臨床參數(shù)及GSS基因遺傳變異與鉑類(lèi)化療效果的關(guān)系使用Logistic回歸模型進(jìn)行分析，GSS基因遺傳變異與患者預(yù)后的生存分析使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型，以雙側(cè)α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2　結(jié)　果

2.1臨床特征與化療效果的關(guān)系451例患者中化療有效327例，無(wú)效124例，有效率72.51%。單因素分析顯示，患者年齡、性別、吸煙史、化療方案與化療療效無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)，KPS評(píng)分、腫瘤分期與化療療效明顯相關(guān)(P<0.05)，其中KPS評(píng)分≤80分、>80分的化療有效率分別為66.51%(143/215)、77.97%(184/236)，腫瘤局限期、廣泛期的化療有效率分別為79.72%(173/217)、65.81%(154/234)。多因素分析顯示，KPS評(píng)分、腫瘤分期是化療效果的獨(dú)立影響因素，KPS評(píng)分>80分患者化療效果高于KPS評(píng)分≤80分患者(OR=0.75，95%CI為0.51～0.93)，廣泛期患者效果明顯低于局限性患者(OR=1.96，95%CI為1.48～2.88)。

2.2GSS基因遺傳變異與化療效果的關(guān)系位于GSS基因3′近基因區(qū)的rs836632位點(diǎn)與鉑類(lèi)藥物化療效果有關(guān)，攜帶C等位基因化療效果明顯低于攜帶T等位基因的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，化療無(wú)效的發(fā)生率增加1.39倍；而rs3136185、rs8376881、rs3384795 htSNP位點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　GSS基因htSNP位點(diǎn)影響鉑類(lèi)藥物化療效果的Logistic多因素分析(n)

AA為主要等位基因純合型，AB為雜合型，BB為次要等位基因純合型；a為存在缺失數(shù)據(jù)

2.3GSS基因htSNP位點(diǎn)對(duì)SCLC患者預(yù)后的影響攜帶rs8376881 GG、GA、AA基因型的生存時(shí)間分別(26.35±4.08)、(23.82±5.37)、(18.60±5.92)個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。攜帶A等位基因的SCLC患者總生存時(shí)間明顯短于G等位基因，死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加(HR=1.27，95%CI為1.13～1.44)，見(jiàn)表2。攜帶rs836632 TT、TC、CC基因型的生存時(shí)間分別(29.38±6.95)、(25.13±5.67)、(24.69±6.09)個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與攜帶C等位基因的SCLC患者總生存時(shí)間明顯短于T等位基因，死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加(HR=1.29，95%CI為1.16～1.42)。攜帶rs3136185、rs3384795 htSNP位點(diǎn)與SCLC患者化療后總生存時(shí)間之間無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表2，圖1，圖2。

2.4攜帶GSS基因rs8376881、rs836632不同風(fēng)險(xiǎn)等位基因?qū)︻A(yù)后的影響不攜帶rs8376881、rs836632位點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)等位基因的GG+TT基因型患者116例，死亡71例(61.21%)，生存時(shí)間(29.50±5.38)個(gè)月。攜帶1～2個(gè)風(fēng)險(xiǎn)等位基因患者240例，包括：GG+TC基因型98例、GA+TT基因型6例、GA+TC基因型121例、GG+CC基因型15例，死亡170例(70.83%)，生存時(shí)間(25.31±6.26)個(gè)月。攜帶3～4個(gè)分析等位基因患者66例，包括：GA+CC基因型40例、AA+TC基因型2例、AA+CC基因型24例，死亡51例(77.27%)，生存時(shí)間(21.65±3.92)個(gè)月。攜帶不同風(fēng)險(xiǎn)等位基因數(shù)量患者總生存時(shí)間之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)圖3。隨著攜帶風(fēng)險(xiǎn)等位基因數(shù)量增加，患者死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。

表2　GSS基因htSNP位點(diǎn)影響SCLC患者總生存時(shí)間的Cox多因素分析(n)

AA為主要等位基因純合型，AB為雜合型，BB為次要等位基因純合型；a為存在缺失數(shù)據(jù)

圖1　GSS基因rs8376881不同基因型SCLC患者生存曲線(xiàn)

圖2　GSS基因rs836632不同基因型SCLC患者生存曲線(xiàn)

圖3　攜帶GSS基因rs8376881、rs836632不同風(fēng)險(xiǎn)等位基因SCLC患者生存曲線(xiàn)

3　討　論

中晚期SCLC患者治療中化療是主要手段之一，以鉑類(lèi)藥物為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療方案始終是SCLC一線(xiàn)治療方案。DNA修復(fù)能力、腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度等均對(duì)鉑類(lèi)化療方案的效果有明顯影響，谷胱甘肽可通過(guò)抑制DNA結(jié)合物形成來(lái)誘導(dǎo)鉑類(lèi)藥物失效，還可參與外來(lái)物質(zhì)的膜運(yùn)輸，防止體內(nèi)細(xì)胞被氧自由基損傷等多種生物學(xué)功能，而GSS基因編碼的蛋白質(zhì)在谷胱甘肽生物合成第二步中發(fā)揮催化作用〔6〕。相關(guān)研究顯示，谷胱甘肽在非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、腎癌等多種惡性腫瘤中水平均上升且與非小細(xì)胞肺癌患者化療耐藥性存在相關(guān)性〔7〕。KPS評(píng)分>80分和局限性患者能夠取得更為理想的化療效果，延長(zhǎng)總生存時(shí)間。最新研究顯示，在北美洲白種人SCLC患者中，GSS基因內(nèi)含子區(qū)rs8376881與治療預(yù)后不良和死亡風(fēng)險(xiǎn)升高明顯相關(guān)，內(nèi)含子區(qū)rs3136185和rs3384795與治療預(yù)后改善和死亡風(fēng)險(xiǎn)降低明顯相關(guān)〔8〕。本次研究發(fā)現(xiàn)，rs836632(T>C)與老年SCLC患者鉑類(lèi)藥物化療效果和總生存時(shí)間均存在明顯相關(guān)性，rs8376881(G>C)僅與患者總生存時(shí)間相關(guān)，而rs3136185、rs3384795與患者化療效果和總生存時(shí)間無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。該結(jié)論與相關(guān)研究結(jié)果存在差異，可能與研究對(duì)象人種差異有關(guān)。rs836632位于GSS基因3′近基因區(qū)，能夠影響基因和miRNA的相互結(jié)合。rs8376881位于GSS基因內(nèi)含子區(qū)，能夠改變基因剪切和連接，以及轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，影響轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，改變GSS基因多種生物學(xué)功能，進(jìn)而影響谷胱甘肽的生物學(xué)功能，抑制DNA修復(fù)過(guò)程，降低鉑類(lèi)藥物化療效果，縮短老年SCLC患者的總生存時(shí)間。

1丁新民，馮華松，伏婷婷，等.局限期小細(xì)胞肺癌前兩周期EP方案化療有效性與預(yù)后〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2016；36(8)：1880-2.

2李誠(chéng)，蘭莉，楊超，等.哈爾濱市癌癥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估系統(tǒng)的構(gòu)建與應(yīng)用〔J〕.中國(guó)衛(wèi)生工程學(xué)，2016；15(4)：388-9.

3傅興寧.小細(xì)胞肺癌外周血和組織中耐藥基因表達(dá)的檢測(cè)〔D〕.青島：青島大學(xué)，2013.

4徐俊，丁香彧，郭楠等.小細(xì)胞肺癌患者血清胃泌素釋放肽前體和神經(jīng)元特異性烯醇化酶水平〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2015；35(5)：1281-2.

5吳翠翠，修冬瑩，張雪琦，等.肺癌患者血清P53抗體及肺癌組織P53表達(dá)對(duì)肺癌診斷價(jià)值的研究〔J〕.北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2014；15(4)：486-9.

6劉靜.TTF-1及CgA與小細(xì)胞肺癌PFS相關(guān)性分析〔D〕.大連：大連醫(yī)科大學(xué)，2015.

7李海洋，趙振山.肺癌患者放療前后外周血淋巴細(xì)胞亞群變化研究〔J〕.北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016；17(2)：213-6.

8Fiegl M，Pircher A，Waldthaler C，etal.Small steps of improvement in small-cell lung cancer(SCLC)within two decades：A comprehensive analysis of 484 patients〔J〕.Lung Cancer，2014；84(2)：168-74.