微量元素配施對甜菊生長和甜菊糖苷含量的影響

楊永恒，徐曉洋，孫玉明，張永俠，包亞英，原海燕，黃蘇珍，佟海英

（江蘇省中國科學(xué)院植物研究所，江蘇 南京 210014）

甜菊（Stevia rebaudiana Bertoni）又稱甜葉菊，是原產(chǎn)南美洲的菊科多年生草本植物。因其植物體（主要是葉片）所含甜菊糖苷（Steviol glycosides）具有高甜度（甜度約為蔗糖的250～450倍）、低熱量（化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定幾乎不參與機(jī)體代謝，熱量僅為蔗糖的1/300）等特性[1]，以及預(yù)防和輔助治療肥胖癥[2]、糖尿病[3]、高血壓[4]、高血糖[5]，以及消炎、抗氧化、抗菌、抗癌、增強(qiáng)免疫力[6-7]等藥用價(jià)值而備受關(guān)注，近年來已被作為天然零卡路里甜味劑廣泛應(yīng)用于食品、飲料、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域。

鋅、硼、錳、鉬是常見的微量元素肥料，在植物生長發(fā)育過程中起重要作用。鋅參與葉綠素的合成，促進(jìn)光合作用，能改善植物品質(zhì)；硼能促進(jìn)根系吸收養(yǎng)分，促進(jìn)開花結(jié)實(shí)；錳是許多酶的活化劑，直接參與光合作用，影響氮、磷代謝；鉬參與碳、氮素代謝，缺鉬使植株光合能力下降[8]。王曉菁等[9]對枸杞（Lycium barbarum）進(jìn)行葉面噴施硫酸鋅試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，隨鋅肥噴施濃度的增加，枸杞有效成分及微量元素含量均顯著提高，鋅肥過量時則呈下降趨勢，認(rèn)為最適濃度為Zn 0.05%。胡華鋒等[10]研究發(fā)現(xiàn)適當(dāng)配施微肥能顯著提高紫花苜蓿產(chǎn)草量和粗蛋白、粗脂肪、磷、鈣的含量，降低粗灰分、粗纖維、無氮浸出物的含量。孟杰等[11]研究不同濃度Zn、B、Mo配施對北柴胡（Bupleurum chinense）產(chǎn)量及柴胡皂苷a、d含量的影響發(fā)現(xiàn)，適宜配比的Zn、B、Mo配施對北柴胡干物質(zhì)積累及柴胡皂苷a、d總量有積極的調(diào)節(jié)作用，施Zn 48.45 g/hm2、B 355.05 g/hm2、Mo 86.40 g/hm2時產(chǎn)量最大，施Zn 36.15 g/hm2、B 343.05 g/hm2、Mo 106.35 g/hm2時品質(zhì)最佳。曾小燕[12]研究發(fā)現(xiàn)在甜菊分枝初期噴施高錳酸鉀（3 mg/g）或鉬酸銨（3 mg/g）或硼酸（0.5 mg/g）均可顯著增加R-A、總苷和游離氨基酸含量，在分枝盛期噴施3 mg/g氯化鋅可顯著增加R-A、游離氨基酸和粗纖維含量。盡管眾多研究表明微量元素有助于植物有效成分的積累，然而目前在甜菊栽培營養(yǎng)研究方面缺乏對微量元素對甜菊生長及甜菊糖苷含量影響的系統(tǒng)研究。為此，本文采用盆栽試驗(yàn)方法，研究鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊生長和糖苷含量的影響，以期為生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)甜菊、提高經(jīng)濟(jì)效益提供科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1　試驗(yàn)材料

供試材料為甜菊品種‘中山4號’（‘Zhongshan No.4’）扦插繁殖的當(dāng)年生植株，種源來自江蘇省中國科學(xué)院植物研究所甜菊種質(zhì)資源圃。

1.2　試驗(yàn)方法

于2015年4月22日至7月21日在普通溫室進(jìn)行盆栽試驗(yàn)。選取株高和莖粗基本一致的甜菊扦插苗栽植于塑料盆（高20.0 cm、口徑20.0 cm、底徑14.5 cm，底部有小孔）中，盆底有托盤，每盆裝3.0 kg栽培基質(zhì)。栽培基質(zhì)為園土、草炭、珍珠巖和河沙，混合基質(zhì)體積比為5∶2∶2∶1；園土取自江蘇省中國科學(xué)院植物研究所南京中山植物園林下，其基本理化性質(zhì)為：有機(jī)質(zhì)含量1.99%，全氮、速效磷和速效鉀含量（mg/kg）分別為1000.00、1.67和 122.12，全量鋅 56.00 mg/kg，全量錳 962.00 mg/kg，全量硼和全量鉬未檢出，pH 6.0。

1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)大量元素氮、磷、鉀肥施入量分別為純N 600 mg/kg、P2O5300 mg/kg和K2O 600 mg/kg。微量元素 Zn、Mn和 Mo設(shè)質(zhì)量分?jǐn)?shù) 均 為 0% 、0．1% 、0．2% 和 0．3%共4個水平；微量元素B設(shè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0%、0．05%、0．1%和 0．2%共4個水平，構(gòu)成4因素4水平的正交設(shè)計(jì)表共16個處理 （表1），其中，氮肥為尿素，磷肥為過磷酸鈣，鉀肥為氯化鉀，鋅肥為七水合硫酸鋅，硼肥為硼酸，錳肥為一水合硫酸錳，鉬肥為鉬酸銨。移栽時將全部磷肥和50%鉀肥作為基肥一次施入，5月12日施入 30%氮肥，6月 12日施入40%氮肥和50%鉀肥，7月2日施入30%氮肥；微量元素肥料分別于6月19日和7月15日噴施；每處理設(shè)3次重復(fù)。實(shí)驗(yàn)過程中采取常規(guī)水分管理，并及時將托盤內(nèi)的溢出溶液倒回，以防養(yǎng)分流失。

1.2.2測定指標(biāo)及方法

1.2.2.1生長指標(biāo)測定試驗(yàn)結(jié)束時，用直尺測定株高，即從地面到植株頂端的高度；用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測定莖粗，即植株中部（株高1/3～2/3處）的直徑；用直尺測定葉長和葉寬，植株中部葉片葉基至葉尖的長度即為葉長，葉片最寬處的長度即為葉寬。分別收集各單株的莖和葉，洗凈后于105℃殺青15 min，再于75℃烘干至恒質(zhì)量。

1.2.2.2光合色素含量測定采用95%乙醇浸提法[13]，取新鮮的甜菊葉片0．1 g剪碎，共取3份，分別置于15 mL帶塞試管中，每個試管中加入5 mL 95%乙醇溶液，并使葉片完全浸沒在溶液中，加上塞子，置于暗處24 h，待試管中的甜菊葉片顏色變成白色時，進(jìn)行比色測定。將色素提取液倒入比色杯中，以95%乙醇溶液為對照，在紫外分光光度計(jì)上波長665 nm、649 nm、470 nm下測定吸光度。95%乙醇浸提液中色素濃度（mg/L）計(jì)算公式：

表1　盆栽試驗(yàn)處理和施肥量Table 1　Treatments and application rates of pot experiment

1.2.2.3糖苷含量測定采用高效液相色譜法[13-14]。儀器為上海伍豐LC100高效液相色譜（包括紫外檢測器和色譜工作站）， 色譜柱為 Hypersil-NH2 （250．0 mm×4．6 mm，5 μm）（大連依利特分析儀器有限公司），St和R-A標(biāo)準(zhǔn)品均購自日本和光純藥工業(yè)株氏會社，純度均大于99．0%。

于現(xiàn)蕾期收獲各處理甜菊植株葉片烘干，干燥密封保存至使用。取貯存的甜菊干葉，于烘箱中70℃烘至恒重，用研缽磨成粉末，準(zhǔn)確稱取粉末0．2 g，裝入15 mL具塞試管中，加入10 mL 80%乙醇，搖勻，80℃水浴30 min，期間搖勻幾次，冷卻后于低速離心機(jī)中離心10 min，吸取上清1 mL至離心管中，開蓋置于烘箱中70℃過夜，使溶劑揮發(fā)干凈，加1 mL色譜甲醇充分溶解提取物，經(jīng)0．22 μm濾膜過濾后待測。3次重復(fù)。

分別精確稱取St（Stevioside）和R-A標(biāo)準(zhǔn)品，用色譜甲醇配成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，經(jīng)0．22 μm 濾膜過濾，分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液 4、8、12、16、20 μL 依次進(jìn)樣分析，流速 1．2 mL/min，流動相為乙腈∶水=80∶20，測定波長210 nm。以樣品濃度為縱坐標(biāo)y，峰面積為橫坐標(biāo)x繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

采用與標(biāo)準(zhǔn)品溶液相同的色譜條件對甜菊葉樣品中的St、R-A含量進(jìn)行測定，進(jìn)樣量20 μL，依據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用外標(biāo)法計(jì)算干葉樣品中St和R-A的含量。

1.3　數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel2010軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并采用SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)（P ＜ 0．05）。

2　結(jié)果與分析

2.1　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊生長的影響

由盆栽試驗(yàn)結(jié)果（如表2）可見，M2、M4和M9處理甜菊株高顯著高于對照，其中，M4處理甜菊株高最大，比對照增加15.8%；其余各處理甜菊株高均與對照無顯著差異。除M3和M6處理外，其余各處理甜菊莖粗均顯著高于對照，其中，M16處理甜菊莖粗最大，比對照增加39.8%；M7、M8、M9和M11處理間以及M2、M5、M13和M14處理間莖粗均無顯著差異。M12和M14處理甜菊葉長均顯著高于對照，M12處理甜菊葉長最大，比對照增加16.3%；其余各處理葉長均與對照無顯著差異。M3、M7、M12、M14和M16處理甜菊葉寬均顯著高于對照，其中，M7處理甜菊葉寬最大，比對照增加32.6%；其余各處理葉寬均與對照無顯著差異。

表2　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊生長的影響Table 2　Effects of combined fertilization of Zn, B, Mn and Mo on stevia growth

分析不同鋅、硼、錳、鉬水平對甜菊生長的影響（表3），其中甜菊株高R值大小順序?yàn)椋篫n>Mo>Mn>B，說明影響甜菊株高的重要性順序?yàn)椋篫n>Mo>Mn>B。4種肥料對株高的影響均未達(dá)到顯著水平。

甜菊莖粗R值大小順序?yàn)椋篫n>B>Mo>Mn，說明影響甜菊莖粗的重要性順序?yàn)椋篫n>B>Mo>Mn。施Zn對甜菊莖粗有顯著影響，Zn3和Zn4處理甜菊莖粗顯著大于Zn1處理，分別比Zn1處理增加16.6%和12.5%；B、Mn和Mo對甜菊莖粗均無顯著影響，B4處理甜菊莖粗最大，比B1處理增加9.3%；Mn2處理甜菊莖粗最大，比Mn1處理增加5.1%；Mo2處理甜菊莖粗最大，比Mo1處理增加3.8%。甜菊葉長R值大小順序?yàn)椋篗o>B>Zn>Mn，說明影響甜菊葉長的重要性順序?yàn)椋篗o>B>Zn>Mn；甜菊葉寬R值大小順序?yàn)椋築>Mo>Mn>Zn，說明影響甜菊葉寬的重要性順序?yàn)椋築>Mo>Mn>Zn。盡管4種肥料處理下甜菊葉長葉寬差異沒有達(dá)到顯著，但施用微肥對甜菊葉長葉寬仍有一定的影響。

2.2　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊葉片光合色素含量的影響

光合色素含量分析結(jié)果表明（表4），M16處理甜菊葉片中葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素和類胡蘿卜素含量均最高，分別比對照顯著增加64.9%、44.7%、58.5%和64.8%。M8、M11和M16處理葉綠素a含量顯著高于對照，其余各處理葉綠素a含量均與對照無顯著差異；M11和M16處理葉綠素b和總?cè)~綠素含量均顯著高于對照，其余各處理葉綠素b和總?cè)~綠素含量均與對照無顯著差異；M2、M4、M5、M8、M10和M16處理類胡蘿卜素含量顯著高于對照，其余各處理類胡蘿卜素含量均與對照無顯著差異。

表3　不同鋅、硼、錳、鉬水平對甜菊生長的影響Table 3　Effects of Zn, B, Mn and Mo fertilization on stevia growth

表4　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊葉片中光合色素含量的影響Table 4　Effects of Zn, B, Mn and Mo formula fertilization on photosynthetic pigment contents of stevia leaves

根據(jù)不同鋅、硼、錳、鉬水平對甜菊葉片中光合色素含量的影響分析（表5）可知，甜菊葉片中葉綠素a含量R值大小順序?yàn)椋篗o>Zn>B>Mn，說明影響甜菊葉片中葉綠素a含量的重要性順序?yàn)椋篗o>Zn>B>Mn。Zn、B和Mn對葉綠素a含量的影響均未達(dá)到顯著水平；施Mo對葉綠素a含量有顯著影響，Mo2和Mo3處理葉綠素a含量顯著高于Mo1處理，其中，Mo3處理葉綠素a含量最高，比對照增加25.6%。

甜菊葉片中葉綠素b含量R值大小順序?yàn)椋篗o>Mn>Zn>B，說明影響葉綠素b含量的重要性順序?yàn)椋篗o>Mn>Zn>B。Zn、B和Mn對葉綠素b含量的影響均未達(dá)到顯著水平；施Mo對葉綠素b含量影響顯著，Mo2和Mo3處理葉綠素b含量顯著高于Mo1處理，其中，Mo2處理葉綠素b含量最高，比對照增加22.9%。

甜菊葉片中總?cè)~綠素含量R值大小順序?yàn)椋篗o>Zn>Mn>B，說明影響總?cè)~綠素含量的重要性順序?yàn)椋篗o>Zn>Mn>B。Zn、B和Mn對總?cè)~綠素含量的影響均未達(dá)到顯著水平；施Mo對總?cè)~綠素含量影響顯著，Mo2和Mo3處理總?cè)~綠素含量均顯著高于Mo1處理，其中，Mo3處理總?cè)~綠素含量最高，比對照增加24.4%。

甜菊葉片中類胡蘿卜素含量R值大小順序?yàn)椋築>Mo>Mn>Zn，說明影響類胡蘿卜素含量的重要性順序?yàn)椋築>Mo>Mn>Zn。施B對類胡蘿卜素含量影響顯著，其中，B4處理類胡蘿卜素含量最高，比對照增加25.8%。

2.3　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊葉片中糖苷含量的影響

試驗(yàn)采用HPLC法測定不同鋅、硼、錳、鉬配施處理下各組甜菊葉片中St和R-A苷含量（表6），結(jié)果表明，M9、M13和M15處理的St含量均顯著低于對照，其余各處理St含量均與對照無顯著差異。M7和M9處理R-A含量顯著高于對照，其中，M7處理R-A含量最高，比對照增加42.0%。M3和M7處理總苷含量顯著高于對照，其中，M7 處理總苷含量最高，比對照增加 29.3%。 M2、M5、M6、M7、M9、M10、M12 和 M13 處理的St/總苷均顯著低于對照，以 M9 處理 St/總苷最低；反之，M2、M5、M6、M7、M9、M10、M12 和 M13 處理的 R-A/總苷均顯著高于對照，以M9處理R-A/總苷最高，比對照增加14.6%。

表5　不同鋅、硼、錳、鉬水平對甜菊葉片光合色素含量的影響Table 5　Effects of Zn, B, Mn and Mo fertilization on photosynthetic pigment contents of stevia leaves

表6　鋅、硼、錳、鉬肥配施對甜菊葉片中糖苷含量的影響Table 6　Effects of Zn, B, Mn and Mo formula fertilization on steviol glycosides content of stevia leaves

不同鋅、硼、錳、鉬水平對甜菊葉片中糖苷含量的影響分析如表7，可知甜菊St含量R值大小順序?yàn)椋篫n>B=Mo>Mn，說明影響St含量的重要性順序?yàn)椋篫n>B=Mo>Mn。B、Mn 和 Mo對 St含量的影響均未達(dá)到顯著水平；隨施Zn量的增加，St含量呈下降趨勢，各施鋅處理St含量均低于Zn1處理，且Zn4處理顯著低于Zn1處理。

甜菊R-A含量R值大小順序?yàn)椋篫n>Mn>B>Mo，說明影響R-A含量的重要性順序?yàn)椋篫n>Mn>B>Mo。4種肥料對R-A含量的影響均未達(dá)到顯著水平。

甜菊總苷含量R值大小順序?yàn)椋篫n>Mn>B>Mo，說明影響甜菊總苷含量的重要性順序?yàn)椋篫n>Mn>B>Mo。 B、Mn和Mo對甜菊總苷含量的影響均未達(dá)到顯著水平；隨施Zn量的增加，甜菊總苷含量呈先升后降趨勢，Zn3處理達(dá)到最大值，比Zn1處理增加3.3%，Zn4處理總苷含量低于Zn1處理。

甜菊St/總苷與R-A/總苷的R值大小順序均為：Zn>Mn>Mo>B，說明影響St/總苷、R-A/總苷的重要性順序?yàn)椋篫n>Mn>Mo>B。4種肥料對St/總苷、R-A/總苷均未達(dá)到顯著水平。

表7　不同鋅、硼、錳、鉬水平對甜菊葉片中糖苷含量的影響Table 7　Effects of Zn, B, Mn and Mo fertilization on steviol glycosides content of stevia leaves

3　討論

3.1　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊生長的影響效應(yīng)

微量元素參與蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂類、核酸等多種代謝活動，是植物體內(nèi)多種酶及其活化劑的組成成分，其豐缺對植物的生長發(fā)育有著不同程度的影響。鋅可以活化草酸乙酸氧化酶、烯醇化酶等，在光合、呼吸、氮代謝、激素合成等方面有重要作用；缺鋅時核糖核酸含量減少，蛋白質(zhì)合成受阻。硼對植物各種營養(yǎng)器官的建造是必需的，充足的硼對維持葉片功能起著重要作用；缺硼使葉片表面變形，氣孔關(guān)閉，葉綠體發(fā)育不全，線粒體基質(zhì)含量減少，疏導(dǎo)組織受阻。錳是維持葉綠體結(jié)構(gòu)的必需元素，是SOD的重要組成元素，對維持葉綠體細(xì)胞膜正常結(jié)構(gòu)有重要作用。鉬參與碳、氮素代謝，缺鉬使植株光合能力下降[15]。王蘇影等[16]研究發(fā)現(xiàn)葉面噴施鋅肥和錳肥均可促進(jìn)芝麻（Sesamum indicum）生長，使葉綠素含量和產(chǎn)量增加。曹秀霞等[17]研究發(fā)現(xiàn)增施硼肥可以提高旱地胡麻（Linum usitatissimum）植株的株高、主莖分枝、有效結(jié)果數(shù)和每果粒數(shù)等農(nóng)藝性狀以及植株鮮重和干重。本研究結(jié)果顯示，合理配施鋅、硼、錳、鉬可促進(jìn)甜菊生長發(fā)育，M4處理（Zn 0%、B 0.2%、Mn 0.3%和Mo 0.3%）甜菊株高最大，M16處理（Zn 0.3%、B 0.2%、Mn 0%和Mo 0.2%）甜菊莖粗、葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素和類胡蘿卜素含量均最大，M12處理（Zn 0.2%、B 0.2%、Mn 0.1%和Mo 0%）甜菊葉長最大，M7處理（Zn 0.1%、B 0.1%、Mn 0.3%和Mo 0%）甜菊葉寬最大。施用硼肥和錳肥對甜菊株高、莖粗、葉長、葉寬、各光合色素含量（除類胡蘿卜素含量）均無顯著影響；施鋅顯著影響甜菊莖粗，Zn 0.2%和Zn 0.3%處理甜菊莖粗顯著大于Zn 0%處理，其余施肥處理對甜菊莖粗無顯著影響；施鉬顯著影響甜菊葉片中葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量，Mo 0.2%處理葉綠素a和總?cè)~綠素含量均最高，Mo 0.1%處理葉綠素b含量最高；其余施肥處理對甜菊各光合色素含量無顯著影響。經(jīng)方差分析檢驗(yàn)，鉬影響很大，鋅、硼和錳對甜菊葉片中葉綠素含量的影響也較大，但均未達(dá)到顯著水平，推測可能由于各個元素所構(gòu)成的酶的種類與功能不同，從而影響整個植株代謝過程所導(dǎo)致。

3.2　鋅、硼、錳、鉬配施對甜菊糖苷含量的影響效應(yīng)

施用微量元素肥料對改善植物有效部位的品質(zhì)有重要影響。鋅是多種酶的活化劑，與蛋白質(zhì)合成、成熟葉片礦質(zhì)元素含量和碳水化合物代謝有關(guān)；正常的硼營養(yǎng)能改善植株各器官有機(jī)物的供應(yīng)狀況，加速體內(nèi)糖的合成與運(yùn)轉(zhuǎn)，缺硼時植株體內(nèi)糖類物質(zhì)的合成與運(yùn)輸受到抑制；錳是許多肽酶的活化離子，可促進(jìn)氨基酸合成肽鍵，有利于蛋白質(zhì)的合成[18]。施鉬能提高植株中碳水化合物和可溶性糖含量，同時能提高多種氨基酸含量[19]。本研究結(jié)果顯示，M9、M13和M15處理St含量顯著低于對照；M7處理（Zn 0.1%、B 0.1%、Mn 0.3%和Mo 0%）R-A和總苷含量均最高；M9處理（Zn 0.2%、B 0%、Mn 0.2%和Mo 0.3%）St/總苷最低，而R-A/總苷最高。經(jīng)方差分析檢驗(yàn)，鋅對各指標(biāo)影響的重要性最大，施用硼肥、錳肥和鉬肥對甜菊St、R-A、總苷含量、St/總苷和R-A/總苷均無顯著影響；施用鋅肥對甜菊R-A含量、St/總苷和R-A/總苷均無顯著影響，但施鋅對甜菊St和總苷含量影響顯著，隨鋅肥施用量的增加，甜菊St含量呈下降趨勢，總苷含量呈先升后降趨勢，Zn 0.2%處理達(dá)到最大值。

綜上所述，在甜菊生長期間，應(yīng)合理施肥，在甜菊分枝初期和分枝盛期葉面噴施七水合硫酸鋅0.2%～0.3%，硼酸0%～0.1%，一水合硫酸錳0.2%～0.3%，鉬酸銨0.2%~0.3%有助于植株生長和糖苷積累。

參考文獻(xiàn)：

[1]Ashok Kumar Yadav，S.Singh，D.Dhyani，et al.A review on the improvement of stevia[Stevia rebaudiana （Bertoni）][J].Canadian Journal of Plant Science，2011，91（1）：1-27.

[2]Geeraert B，Crombé F，Hulsmans M，et al.Stevioside inhibits atherosclerosis by improving insulin signaling and antioxidant defense in obese insulin-resistant mice[J].International Journal of Obesity，2010，34（3）：569-577.

[3]Akbarzadeh S，Eskandari F，Tangestani H，et al.The effect of Stevia rebaudiana on serum omentin and visfatin level in STZ-induced diabetic rats[J].Journal of Dietary Supplements，2015，12（1）：11-22.

[4]Ferri L A F，Alves-Do-Prado W，Yamada S S，et al.Investigation of the antihypertensive effect of oral crude stevioside in patients with mild essential hypertension[J].Phytotherapy Research Ptr，2006，20（9）：732-736.

[5]Jeppesen P B，Gregersen S，Rolfsen S E，et al.Antihyperglycemic and blood pressure-reducing effects of stevioside in the diabetic Goto-Kakizaki rat.[J].Metabolism Clinical&Experimental，2003，52（3）：372-378.

[6]Chatsudthipong V，Muanprasat C.Stevioside and related compounds：Therapeutic benefits beyond sweetness[J].Pharmacology&Therapeutics，2009，121（1）：41-54.

[7]Takasaki M，Konoshima T M，Tokuda H，et al.Cancer preventive agents.Part 8：Chemopreventive effects of stevioside and related compounds[J].Bioorganic&Medicinal Chemistry，2009，17（2）：600-605.

[8]胡靄堂，陸景陵.植物營養(yǎng)學(xué)：第2版[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2003.

[9]王曉菁，牛艷，王彩艷，等.鐵、鋅噴施對寧夏枸杞中有效成分、微量元素含量的影響[J].北方園藝，2015（7）：153-156.

[10]胡華鋒，介曉磊，劉世亮，等.微肥配施對紫花苜蓿生產(chǎn)效應(yīng)的研究[J].甘肅農(nóng)大學(xué)報(bào)，2007，42（3）：85-90.

[11]孟杰，陳興福，楊文鈺，等.鋅硼鉬配施對北柴胡產(chǎn)量及柴胡皂苷a，d含量的影響[J].中國中藥雜志，2014，39（22）：4297-4303.

[12]曾小燕.栽培措施對甜菊品質(zhì)影響的研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2011.

[13]包亞英，胡秀英，郝雨杉，等.不同施肥處理對甜菊生長及糖苷含量和積累量的影響[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2016，25（1）：71-80.

[14]Yang Y，Huang S，Han Y，et al.Environmental cues induce changes of steviol glycosides contents and transcription of corresponding biosynthetic genes in Stevia rebaudiana[J].Plant Physiology&Biochemistry Ppb，2015，86（86C）：174-180.

[15]李煥忠，張吉立.5種微量元素對紫葉矮櫻葉綠素a含量影響的研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（16）：242-245.

[16]王蘇影，顏廷獻(xiàn)，徐寶慶，等.配施硼、鋅肥及施用方法對芝麻生長及產(chǎn)量的影響[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014（12）：35-37.

[17]曹秀霞，安維太，萬海霞.硼肥對旱地胡麻生長及產(chǎn)量的影響[J].北方園藝，2015（6）：154-157.

[18]劉武定.微量元素營養(yǎng)與微肥施用[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1995.

[19]聶兆君.鉬對小白菜抗壞血酸代謝及品質(zhì)的影響[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.