高效液相色譜儀的發(fā)展和在藥物分析中的應(yīng)用

章慶

（江蘇省淮安市公安局刑事科學(xué)研究所，江蘇淮安 223300）

1 高效液相色譜法的分類

1.1 吸附色譜法

在高效液相色譜法中，吸附色譜法是一種較為常見的檢測方法，它主要是以吸附劑作為固定相進(jìn)行的相關(guān)測試，其中硅膠是運(yùn)用最多的吸附色譜固定相，流動相則通常會選擇一種或者多種有機(jī)溶劑的混合溶劑。不同的組分因與不同的固定相吸附力在吸附色譜中會被分離，在組分極性越大時，固定相吸附力也將越強(qiáng)，它所保留的時間也將更長。流動相的極性若越大，則具有更強(qiáng)的洗脫力，同時，組分的保留時間將會越短。

1.2 離子交換色譜法

離子交換色譜法是一類以離子交換劑為固定相的色譜法，離子交換劑與組分會因不同的親和力而得以分離。在柱填料中含有極性可離子化的基團(tuán)，如季銨離子、羧酸以及磺酸等，這些在適宜的pH值下會得到解離，并且吸引相反電荷的物質(zhì)。因為離子型物質(zhì)可以與柱填料產(chǎn)生相關(guān)的關(guān)系，從而能夠分離。在樣品中，各類組分會由于離子交換平衡常數(shù)的差異而分離，離子交換色譜的流動相通常為一定pH值的緩沖溶液，在有些時候也會加入少量的有機(jī)溶劑（如乙腈、乙醇、四氫呋喃等），從而使組分在流動相中的溶解度增加。流動相的pH值對于離子交換劑的交換容量有一定的影響。流動相的pH值對于弱堿性或者弱酸性的被分離組分來說還會影響其電離情況，流動相的pH值應(yīng)保持待分離組處于離解狀態(tài)，如此方能被分離。在測定條件下，離子交換色譜法會呈現(xiàn)出離解狀態(tài)的組分，反相離子對色譜法在藥物分析中的運(yùn)用也相當(dāng)廣泛，它可運(yùn)用于磺胺類藥物、生物堿、維生素以及抗生素等藥物分析。

1.3 液-液分配色譜法

在液-液分配色譜法中，其流動相與固定相屬于不相溶的兩類溶劑，在其分離時，組分會分別溶入兩相，對于組織的不同，其分配系數(shù)也會有所不同，從而分離。就當(dāng)前來看，運(yùn)用得最為廣泛的化學(xué)鍵和固定相主要是將固定液的官能團(tuán)健合于載體上所制成的，運(yùn)用化學(xué)鍵全固定相的色譜法能夠運(yùn)用分配色譜的原理進(jìn)行解釋。鍵合相色譜法在高效液相色譜中有著舉足輕重的地位，同時也是運(yùn)用得較為廣泛的色譜法。依照流動相與固定相極性的差異可以分為反相色譜法與正相色譜法兩類。

反相色譜法指的是流動相極性比固定相極性大的分配色譜法，反相色譜法往往運(yùn)用非極性固定相，十八烷基硅烷鍵合硅膠是一種較常用的非極性固定相，此外，辛烷基硅烷鍵合硅膠也運(yùn)用得相當(dāng)多。流動相則采用甲醇、水、四氫呋喃或乙腈等混合溶劑。極性較大的組分在反相色譜中會由于分配系數(shù)較小選而先從色譜柱流出，極性較小的組分將隨后流出。有機(jī)溶劑在流動相中的比例上升時，流動相極性會有所降低，洗脫力則會得到增強(qiáng)。反相色譜法在整個高效液相色譜法中運(yùn)用得較廣泛。

正相色譜法指的是流動相極性小于固定相極性的分配色譜法，正相色譜法中較常見的固定相為氨基鍵合硅膠、氰基鍵合硅膠等極性的化學(xué)鍵合固定相，正相色譜的流動相通常屬于極性較小的有機(jī)溶劑。極性小的組分在正相色譜中會因為分配系數(shù)值較低而選擇于極性大的組分流出。通常情況下，正相色譜法被運(yùn)用在溶于有機(jī)溶劑的中等極性或極性分子型物質(zhì)的分離。

2 高效液相色譜法在藥物分析中的運(yùn)用

2.1 運(yùn)用于藥物鑒別中

在高效液相色譜法中，組分與保留時間的性質(zhì)以及結(jié)構(gòu)有一定的關(guān)聯(lián)，它屬于一類定性參數(shù)，可以用來鑒別藥物。比如，我國藥典收載的藥物頭孢羥氨芐的鑒別中有這樣的規(guī)定：在含量測量項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間必須與對照品主峰的保留時間相同。頭孢噻酚鈉、頭孢拉定等頭孢類藥物、曲安奈德注射液以及地西泮注射液等多種藥物都可以運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行鑒別。有研究學(xué)者[1]運(yùn)用高效液相色譜法指紋圖譜法來鑒別樹膠與蜂膠，還有一些研究學(xué)者[2]運(yùn)用高效液相色譜法來測定一類新型抗腫瘤藥temxolo-mide（替莫唑胺），并為新藥申報提供有效的數(shù)據(jù)。這些運(yùn)用對于藥物的開發(fā)與鑒別提供了良好的手段與思路。

2.2 運(yùn)用于蒽醌類化合物的分析中

蒽醌類活性成分在中藥中主要存在于何首烏中，它的具體成分為蒽醌類以及相關(guān)衍生物，有相關(guān)科學(xué)家[3]對各產(chǎn)地的何首烏進(jìn)行過質(zhì)量的研究，并且通過高效液相色譜的方式來測定何首烏游離型以及結(jié)合蒽醌類成分的含量情況，在對其展開嚴(yán)格測定后顯示出，何首烏蒽醌類中大黃素甲醚、大黃素與其中含有的蘆薈大黃素、大黃酸以及大黃酚相比，其含量更高。同時，根據(jù)炮制方法與產(chǎn)地的不同，結(jié)合型與游離型的蒽醌類含量比例也會產(chǎn)生相應(yīng)的變化。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，各類檢測技術(shù)的不斷提升，一些研究學(xué)者[4]已經(jīng)掌握了采用非水反相液相色譜法對活性蒽醌類成分加以測定的方式，運(yùn)用此類方法可以更好地完善并簡化技術(shù)的使用步驟，為此，高效液相色譜儀檢測器在檢測分析藥物時可以縮短時間，讓操作更便捷，這在蒽醌類成分的測定中有良好的幫助作用。

2.3 運(yùn)用于黃酮類化合物的分析中

黃酮類化合物的數(shù)量相當(dāng)大，黃酮類化合物在植物體內(nèi)通常與糖類成分相結(jié)合，然而，它存在的形式最終會變?yōu)橐攒赵问剑诟饘僦参镔|(zhì)量的評定過程中，一般會以異黃酮成分當(dāng)作具體的參考依照來進(jìn)行。相關(guān)研究學(xué)者[5]為了測定多種葛屬植物中的異黃酮成分含量，選擇了其中七類葛屬植物，檢測方式則以反相高效液相色譜法為主。并得出葛屬植物中異黃酮成分含量有較大的差異性，它對于葛根質(zhì)量的評價提供了相關(guān)的依據(jù)。

2.4 運(yùn)用于有機(jī)酸類物質(zhì)分析中

高效液相色譜儀檢測器被廣泛運(yùn)用于臨床藥物的檢測中，通過高效液相色譜儀能夠使相關(guān)研究工作人員更好地測定藥物中的各類有機(jī)酸含量。有機(jī)酸類物質(zhì)有著較大的生理活性，半數(shù)以上的都是從一些藥性植物所提取而出的，再將其與治療的藥物相結(jié)合。有些藥物中含桂皮酸，此類物質(zhì)屬于有機(jī)酸類，它在冠心蘇合膠囊以及冠心蘇合丸中均有一定量的成分，這也是研究工作人員運(yùn)用高效液相色譜儀檢測而出的。為將此類成分測出，研究人員[6]在對其加以研究時會運(yùn)用100%的甲醇當(dāng)作提取溶劑加以研究，同時還會加入適量的冰醋酸來分離被測物質(zhì)。從結(jié)果來看，高效液相色譜法實施研究工作可以保證冠心蘇合膠囊以及冠心蘇合丸中的桂皮酸的高回收率，這對于研究工作的開展起到了一定的推動作用[7]。

3 高效液相色譜法在藥物分析中的發(fā)展

3.1 聯(lián)用技術(shù)

在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中，計算機(jī)各類軟件得到了相應(yīng)的開發(fā)，這使得高效液相色譜與各類檢測儀器有了一定的聯(lián)用，使得高效液相色譜的運(yùn)用范圍得到了有效拓展。比如，高效液相色譜與HPLC-MS（質(zhì)譜）聯(lián)用技術(shù)是一類以高效液相色譜為分離手段，并且質(zhì)譜為鑒定工具的分離分析技術(shù)，它有著極高的專屬性，在藥物檢測中具備著極高的靈敏度，加快定量測量的速度，并對混合物存在的各類微量組分加以分析，高效液相色譜與HPLC-MS（質(zhì)譜）聯(lián)用技術(shù)在國外已經(jīng)成為低濃度生物藥品代謝物與藥物的主要測定方法。HPLC-CL（高效液相色譜聯(lián)用化學(xué)發(fā)光）技術(shù)是一類分析超痕量與痕量的技術(shù)，它可以分析含量相對較低、復(fù)雜的混合物組分。ELSD（蒸發(fā)光散射檢測器）對于一切不揮發(fā)溶質(zhì)均有檢測效果，具有較高的靈敏度，其檢出限為10 ng，不會受溫度以及溶劑成分的影響，也可以在梯度洗脫中使用。ELSD與高效液相色譜的聯(lián)用情況十分常見。

3.2 微柱高效液相色譜法

高效液相色譜法盡管有著一系列的優(yōu)點，同時還有些不足之處，比如流動相的消耗較大，所使用的溶劑通常含有毒性物質(zhì)或者價格偏高等。尤其對那些復(fù)雜樣品進(jìn)行分析時，單相分離分析法通常不能得到很好的完成。而微柱高效液相色譜法的填充粒度較小，同時也十分密集，它與理論塔板數(shù)的增多有著相同的效用，以此來提升色譜柱的整體柱效。運(yùn)用內(nèi)徑低的柱子能夠控制縱向擴(kuò)散情況，降低峰展寬效應(yīng)，最終縮短了整體的分析時間，同時也提升了檢測靈敏度。運(yùn)用微柱并且還可對極少量樣品加以分析，這樣減少了流動相的使用量，并且在環(huán)境保護(hù)與溶劑節(jié)約上有一定的幫助。

4 結(jié)語

高效液相色譜法是當(dāng)前臨床藥物分析運(yùn)用得最為廣泛、最快捷、高效的檢測方法，它有著極強(qiáng)的專屬性以及較高的靈敏度，不僅可以分離藥物，同時還可運(yùn)用于定性定量分型中，適用范圍較大[8]，為此，它在藥物成分的測定與分離方面可以發(fā)揮其基本優(yōu)勢。此外，隨著專家系統(tǒng)的運(yùn)用以及計算機(jī)軟件的開發(fā)，高效液相色譜法將會逐漸成為質(zhì)量規(guī)范化以及國際化的主要途徑。