• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    MUC2在結(jié)腸炎小鼠中的保護(hù)作用和血清抗CBir1抗體的表達(dá)*

    2018-04-02 07:34:57張目涵樓江明趙美華馮百歲
    中國病理生理雜志 2018年3期
    關(guān)鍵詞:結(jié)腸染色黏膜

    賀 欣,張目涵,路 瑤,樓江明,趙美華,馬 娜,馮百歲

    (鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院炎癥性腸病中心,吳階平醫(yī)學(xué)基金會(huì)中國炎癥性腸病聯(lián)盟河南省炎癥性腸病中心,河南 鄭州 450014)

    炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種病因尚不是十分清楚的累及腸道各個(gè)部位的特發(fā)性炎癥性疾病,其具體發(fā)病機(jī)制可能是遺傳基因易感性、腸黏膜免疫平衡紊亂和腸道內(nèi)微生物菌群失調(diào)等多種因素共同導(dǎo)致了腸黏膜屏障的損傷,并進(jìn)一步加劇了IBD疾病發(fā)病的過程[1-2]。由2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型是模擬IBD發(fā)病機(jī)制的傳統(tǒng)疾病模型,其中TNBS與50 %乙醇溶液混合后共同對(duì)小鼠的結(jié)腸炎模型進(jìn)行誘導(dǎo)[3]。黏蛋白2(mucin 2,MUC2)是一種主要附著在腸道黏液層表面上的高度糖基化修飾的大分子黏液狀糖蛋白物質(zhì)。MUC2的蛋白主體不僅可以潤滑和保護(hù)腸黏膜上皮,并且附著在黏蛋白表面上的糖鏈還可以參與細(xì)胞間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和腸黏膜相關(guān)免疫因子的調(diào)控[4]。而細(xì)菌鞭毛蛋白作為存在于腸道微生物表面鞭毛上的主要組成成分,同樣也成為IBD疾病發(fā)生過程中的重要毒性成分和抗原成分[5]。近年來已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)血清內(nèi)的細(xì)菌免疫標(biāo)志物抗CBir1鞭毛蛋白抗體可以作為代表腸道內(nèi)細(xì)菌鞭毛蛋白的主要血清標(biāo)志物[6]。因此,本實(shí)驗(yàn)在TNBS誘導(dǎo)的經(jīng)典結(jié)腸炎小鼠模型的基礎(chǔ)上進(jìn)一步使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和卵清蛋白(ovalbumin,OVA)作為TNBS模型的激活劑,并以酮替芬(ketotifen)作為TNBS模型的抑制劑,通過使用PAS染色法和免疫組織化學(xué)法對(duì)各模型組小鼠腸組織MUC2的表達(dá)進(jìn)行測定,并用ELISA方法進(jìn)一步測量各組小鼠血清中細(xì)菌免疫標(biāo)志物抗CBir1抗體的水平,對(duì)MUC2在各種結(jié)腸炎小鼠模型中的保護(hù)作用進(jìn)行探究,并對(duì)腸道內(nèi)MUC2與細(xì)菌鞭毛蛋白之間表達(dá)量的相關(guān)性進(jìn)行進(jìn)一步的了解。

    材 料 和 方 法

    1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑

    6~8周齡SPF級(jí)健康雄性BALB/c小鼠共60只,購于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。TNBS、LPS、OVA和富馬酸酮替芬購于Sigma;小鼠抗CBir1抗體ELISA試劑盒購于R&D;山羊抗小鼠MUC2抗體購于UCL;過碘酸溶液、Schiff試劑、蘇木素染色液和4%多聚甲醛溶液購于鼎國生物有限公司;阿利新藍(lán)溶液購于博奧森生物技術(shù)公司。

    2 方法

    2.1實(shí)驗(yàn)分組60只小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照(normal control)組、TNBS組、LPS+OVA+TNBS組和酮替芬+TNBS組,共4組,每組15只。各組小鼠均為雄性,且各組小鼠體重等一般情況情況沒有差別。其中正常對(duì)照組在第1天、第8天和第15天分別用100 μL生理鹽水進(jìn)行灌腸;TNBS組在第1天用2.0 mg TNBS和50%乙醇混合成100 μL溶液灌腸,第8天用2.5 mg TNBS和50%乙醇混合成100 μL溶液灌腸,第15天用3.0 mg TNBS和50%乙醇混合成100 μL溶液灌腸;LPS+OVA+TNBS組在TNBS組灌腸基礎(chǔ)上將10 μg LPS和20 μg OVA共同溶于100 μL生理鹽水中,并分別于第7天、第9天、第12天和第15天時(shí)對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射,之后再將50 μg OVA溶于100 μL生理鹽水后于第18~21天期間每日繼續(xù)對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射;酮替芬+TNBS組在TNBS組灌腸基礎(chǔ)上將0.5 mg酮替芬溶于100 μL生理鹽水中,并在每次灌腸前30 min對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射。

    2.2小鼠疾病活動(dòng)情況的評(píng)估每日測定小鼠的體重變化并進(jìn)行比較,同時(shí)觀察各組小鼠的大便性狀以及大便潛血的情況。根據(jù)McCarthy等[7]在文獻(xiàn)中制定的疾病活動(dòng)度指數(shù)(disease activity index,DAI)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)得出每組小鼠的平均 DAI評(píng)分,以評(píng)估各組小鼠的疾病活動(dòng)情況。根據(jù)DAI 評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn),動(dòng)物無體重下降,大便性狀正常,無大便潛血/肉眼血便者為0分;動(dòng)物體重下降達(dá)1%~5%,大便松散,潛血陽性者為1分;動(dòng)物體重下降達(dá)6%~10%,大便松散,潛血陽性者為2分;動(dòng)物體重下降達(dá)11%~15%,稀便,肉眼血便者為3分;動(dòng)物體重下降>15%,稀便,肉眼血便者為4分。

    2.3標(biāo)本的采集和處理第22天時(shí)用摘除眼球的方式處死小鼠。收集各組小鼠血液并行2 000~2 500 r/min 離心20 min,之后收集上清液保存在-20 ℃冰箱中以備檢測。同時(shí)取小鼠中段結(jié)腸組織,4%多聚甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,并制成石蠟切片后放置在4 ℃冰箱保存。將HE染色后的切片放置在光學(xué)顯微鏡下觀察各組切片的組織病理學(xué)改變,并根據(jù)Dieleman等[8]制定的組織學(xué)指數(shù)(histological index,HI)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分:無炎癥、無病變、無隱窩破壞者計(jì)0分;輕度炎癥、病變深度達(dá)黏膜下層、基底 1/3 隱窩被破壞、病變范圍達(dá)1%~25%者計(jì)1分;重度炎癥、病變深度達(dá)肌層、基底 2/3 隱窩被破壞、病變范圍達(dá)26%~50%者計(jì)2分;重度炎癥、病變深度達(dá)漿膜層、僅有完整表面上皮、病變范圍達(dá)51%~75%者計(jì)3分;全部隱窩和上皮被破壞、病變范圍達(dá)76%~100%者計(jì)4分。

    2.4PAS染色法檢測結(jié)腸組織MUC2的表達(dá)取小鼠結(jié)腸組織石蠟切片,脫蠟后加入1%阿利新藍(lán)染液進(jìn)行30 min染色。蒸餾水洗凈后加入過碘酸液靜置10 min,充分水洗后再加入Schiff試劑繼續(xù)染色15 min。吸干Schiff試劑后水洗,之后用蘇木素染液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。脫水,透明,并用中性樹膠封片進(jìn)行封固。每組于光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取3個(gè)PAS染色的組織隱窩區(qū)域進(jìn)行觀察,其中滿杯狀細(xì)胞的鏡下充滿了PAS染色的顆粒和黏液,空杯狀細(xì)胞在PAS染色后顆粒和黏液缺失,并且細(xì)胞的頂端表面出現(xiàn)深凹變化。

    2.5免疫組化方法檢測結(jié)腸組織MUC2的表達(dá)取小鼠結(jié)腸組織石蠟切片,脫蠟和水化后于37 ℃條件下滴加山羊抗小鼠MUC2抗體,4 ℃冰箱過夜并于第2天加入生物素標(biāo)記的 Ⅱ 抗孵育。PBS沖洗后用DAB顯色液進(jìn)行顯色。之后用蘇木素對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色1 min,脫水,封片。在顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野觀察,以胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)棕褐色顆粒的細(xì)胞作為陽性細(xì)胞,其中陽性細(xì)胞在視野中的百分比0~25%為0分,26%~50%為1分,50%~75%為2分,>75%為3分。染色強(qiáng)度輕度著色記為1分,中度著色記為2分,重度著色記為3分。以上兩項(xiàng)判定標(biāo)準(zhǔn)中得分之和大于等于3分為陽性,小于3分為陰性。

    2.6血清抗CBir1抗體的ELISA檢測設(shè)置空白孔和待測樣品孔,并分別在孔內(nèi)進(jìn)行加樣,加樣后進(jìn)行封板并在37 ℃環(huán)境中孵育30 min。之后用洗滌液洗板5次,并在各個(gè)孔中均加入顯色劑A和顯色劑B各50 μl,于37 ℃陰暗處顯色15 min,最后加入終止液終止。用酶標(biāo)儀中的450 mm波長分別測量各個(gè)孔的吸光度(A),并最終得出樣品的實(shí)際濃度。

    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,定量資料采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,方差齊性用Levene方法檢驗(yàn),多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,有意義的數(shù)據(jù)采用LSD-t法進(jìn)一步兩兩比較。率的比較采用卡方檢驗(yàn),以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié)  果

    1 各組小鼠一般狀況及DAI評(píng)分比較

    正常對(duì)照組的15只小鼠食量正常,反應(yīng)靈活,體重有所增加;TNBS組的15只小鼠在灌腸后均出現(xiàn)不同程度的身體蜷縮、食量減少,軟便或稀便增多和體重下降等癥狀,并于灌腸后出現(xiàn)2只小鼠死亡的現(xiàn)象;LPS+OVA+TNBS組的15只小鼠較TNBS組體重下降更明顯,消瘦和血便更加明顯,有5只小鼠先后在造模過程中死亡,將死亡小鼠進(jìn)行腸道解剖后肉眼觀察小鼠全部結(jié)腸段均出現(xiàn)血紅色;而酮替芬+TNBS組小鼠與TNBS組相比癥狀減輕,食量和體重有所恢復(fù),并且大便性狀好轉(zhuǎn)。對(duì)各組進(jìn)行DAI評(píng)分見表 1。

    2 各組小鼠結(jié)腸黏膜組織學(xué)改變

    光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠結(jié)腸組織切片可見,正常對(duì)照組結(jié)腸黏膜完整,結(jié)構(gòu)清晰,腺體排列規(guī)則并且僅見很少量炎性細(xì)胞浸潤;TNBS組結(jié)腸可見黏膜上皮小片狀壞死,黏膜層內(nèi)大量淋巴細(xì)胞浸潤并且杯狀細(xì)胞數(shù)量減少。LPS+OVA+TNBS組小鼠組結(jié)腸組織學(xué)損傷程度比TNBS組更加嚴(yán)重,結(jié)腸黏膜正常腺體結(jié)構(gòu)消失,黏膜下層和肌層均可見淋巴細(xì)胞等炎性滲出物,并且炎癥波及腸壁全層;酮替芬+TNBS組與TNBS組相比黏膜層炎癥程度較輕,但仍有少量淋巴細(xì)胞浸潤,并且杯狀細(xì)胞仍有所減少,見圖1。各組小鼠結(jié)腸黏膜的HI評(píng)分見表1。

    表1 各組小鼠一般狀況、DAI評(píng)分和結(jié)腸黏膜HI評(píng)分的比較Table 1.General status,DAI score and HI score of colonic mucosa in each group

    *P<0.05vsnormal control group;△P<0.05vsTNBS group.

    Figure 1.HE staining of colonic mucosa in each group (×200).
    圖1各組小鼠結(jié)腸黏膜HE染色

    3 各組小鼠腸組織PAS染色和MUC2含量的比較

    各組的PAS染色結(jié)果可見,正常對(duì)照組的結(jié)腸隱窩內(nèi)均可發(fā)現(xiàn)大量杯狀細(xì)胞中的MUC2被染成橘紅色;TNBS組中可見杯狀細(xì)胞有所減少,基底隱窩處可發(fā)現(xiàn)細(xì)長中斷的MUC2;LPS+OVA+TNBS組中已經(jīng)出現(xiàn)黏膜破裂的表現(xiàn),并且尚未發(fā)現(xiàn)有明顯的杯狀細(xì)胞和MUC2的染色;酮替芬+TNBS組與TNBS組相比MUC2的含量有所增高,但與正常對(duì)照組相比黏蛋白的含量和杯狀細(xì)胞數(shù)量仍有所減少,見圖2。

    Figure 2.PAS staining for observing the content of MUC2 in the intestinal tissues of the mice with different treatments (×100).
    圖2PAS染色中各組小鼠腸道組織MUC2含量的比較

    4 小鼠腸組織免疫組化染色中MUC2的表達(dá)

    免疫組化結(jié)果可見,正常對(duì)照組的MUC2表達(dá)于大量結(jié)腸黏膜隱窩的杯狀細(xì)胞內(nèi)和少量上皮細(xì)胞內(nèi),并且染色陽性結(jié)果位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi);而與正常對(duì)照組相比,TNBS組、LPS+OVA+TNBS組和酮替芬+TNBS組染色強(qiáng)度均有不同程度減弱并且MUC2的含量均有降低。運(yùn)用上述的半定量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行分析顯示,與正常對(duì)照組相比,TNBS組、LPS+OVA+TNBS組、酮替芬+TNBS組結(jié)腸黏膜MUC2表達(dá)陽性率均明顯降低;與TNBS組相比,LPS+OVA+TNBS組結(jié)腸黏膜MUC2表達(dá)陽性率進(jìn)一步降低,而酮替芬+TNBS組結(jié)腸黏膜MUC2表達(dá)陽性率則有所回升(P<0.05),見圖3、表2。

    Figure 3.The content of MUC2 in the colon tissues of each group in the mice (immunohistochemical staining,×400).
    圖3各組小鼠結(jié)腸組織中MUC2含量的比較

    5 各組小鼠血清抗CBir1抗體的濃度結(jié)果

    與正常對(duì)照組相比,TNBS組、LPS+OVA+TNBS組和酮替芬+TNBS組的血清抗CBir1抗體濃度明顯增高;并且與TNBS組相比,LPS+OVA+TNBS組的血清抗CBir1抗體濃度更加增高,酮替芬+TNBS組血清抗CBir1抗體濃度則有所降低(P<0.05),見表2。

    討  論

    IBD是一類發(fā)病原因不清,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,并且目前沒有很好的治愈性措施的疾病,近年來其在我國的發(fā)病率有著明顯增高的趨勢[9]。由TNBS溶液誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型是可以模擬IBD發(fā)病過程的經(jīng)典模型之一,其在腸道內(nèi)主要通過誘發(fā)Th1型免疫反應(yīng)從而在腸道免疫調(diào)節(jié)紊亂方面促進(jìn)了小鼠結(jié)腸炎的發(fā)展[10]。LPS又被稱為細(xì)菌內(nèi)毒素,是構(gòu)成革蘭陰性厭氧菌細(xì)胞壁的主要成分[11]。LPS主要通過作用于細(xì)胞膜上的Toll樣受體家族和后續(xù)的骨髓樣分化因子88等胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,從而進(jìn)一步誘導(dǎo)了淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞等各種免疫細(xì)胞合成和釋放細(xì)胞因子,介導(dǎo)腸道內(nèi)的炎癥反應(yīng)過程[12]。而OVA是一種通常被用來與半抗原相偶聯(lián)從而合成完全抗原的載體蛋白,當(dāng)LPS與這類載體蛋白結(jié)合之后便可以加強(qiáng)對(duì)后續(xù)免疫應(yīng)答的修飾[13]。已經(jīng)有哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病的動(dòng)物模型中使用了LPS和OVA共同誘導(dǎo)氣道表面微生物菌群的失調(diào),并最終誘發(fā)了呼吸道炎癥反應(yīng)的發(fā)生[14]。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也可以發(fā)現(xiàn),LPS+OVA+TNBS模型組小鼠的DAI評(píng)分和HI評(píng)分與TNBS組相比均有所上升,說明了在TNBS傳統(tǒng)模型的基礎(chǔ)上加用LPS和OVA,可以對(duì)TNBS模型小鼠在腸道微生物失調(diào)方面進(jìn)一步對(duì)腸黏膜進(jìn)行破壞。酮替芬是一種可以作用于肥大細(xì)胞細(xì)胞膜上的炎癥反應(yīng)保護(hù)劑,其主要通過減少肥大細(xì)胞細(xì)胞膜的變構(gòu)從而阻止其釋放炎癥反應(yīng)相關(guān)的過敏性介質(zhì)[15-16]。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)在IBD的小鼠模型中肥大細(xì)胞的數(shù)量可以增加到10倍以上[17]。而本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也發(fā)現(xiàn),酮替芬+TNBS組的DAI評(píng)分和HI評(píng)分雖然與正常對(duì)照組相比依然有所增高,但是與TNBS組模型組相比則明顯降低,說明了酮替芬可以通過抑制TNBS模型小鼠腸黏膜內(nèi)肥大細(xì)胞激活的方式從而緩解腸道炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

    表2各組小鼠MUC2在結(jié)腸組織中的免疫組化定量和血清抗CBir1抗體濃度的比較
    Table 2.The expression level of MUC2 in colonic tissue of mice determined by immunohistochemical method and serum anti-CBir1 antibody concentration measured by ELISA (Mean±SD.n=15)

    GroupMUC2positiveAnti?CBir1antibody(ng/L)Normalcontrol13(86.7%)26.34±2.41TNBS6(40.0%)?45.99±3.92?LPS+OVA+TNBS4(26.7%)?△51.83±3.62?△Ketotifen+TNBS11(73.3%)?△32.45±2.66?△

    *P<0.05vsnormal control group;△P<0.05vsTNBS group.

    黏蛋白是一類廣泛存在于各個(gè)組織和器官中的高相對(duì)分子質(zhì)量并且高度糖基化修飾的蛋白家族。正常情況下的黏蛋白不僅其蛋白主體可以對(duì)上皮細(xì)胞和組織進(jìn)行潤滑和保護(hù),并且附著在蛋白主體上的眾多糖鏈還可以在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、淋巴循環(huán)、抗原提呈甚至是活化免疫細(xì)胞等各方面均發(fā)揮重要作用[18]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的黏蛋白共有20多種,其中來自于腸道內(nèi)的MUC2是參與構(gòu)成腸黏膜屏障最重要的糖蛋白。MUC2主要在腸道杯狀細(xì)胞中產(chǎn)生并在其內(nèi)部進(jìn)行糖基裝配和分泌,因此附著在MUC2主體上的糖鏈也為腸道內(nèi)正常菌群和一些免疫球蛋白的黏附提供了位點(diǎn)[4,19]。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)腸黏膜MUC2的缺失可以引發(fā)結(jié)腸癌和細(xì)菌性腹瀉等腸道內(nèi)相關(guān)疾病的發(fā)生[20-21],從而推測MUC2在IBD的發(fā)生發(fā)展中也可以起到重要的腸道保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)的PAS染色結(jié)果中,可見TNBS組與正常對(duì)照組相比出現(xiàn)了細(xì)長中斷的基底隱窩黏蛋白并且杯狀細(xì)胞數(shù)量也相對(duì)有所減少;更加嚴(yán)重的LPS+OVA+TNBS組已經(jīng)出現(xiàn)黏膜破裂現(xiàn)象,并且沒有發(fā)現(xiàn)明顯的杯狀細(xì)胞和黏蛋白的染色;而酮替芬+TNBS組黏蛋白的含量要比TNBS組高。之后進(jìn)一步用免疫組化方法再次對(duì)腸道組織MUC2的表達(dá)進(jìn)行觀察后發(fā)現(xiàn),TNBS組、LPS+OVA+TNBS組和酮替芬+TNBS組與正常對(duì)照組相比MUC2的表達(dá)均有所減少;LPS+OVA+TNBS組與TNBS組相比,結(jié)腸黏膜MUC2的表達(dá)量更加減少;而酮替芬+TNBS組與TNBS組相比結(jié)腸黏膜MUC2的表達(dá)量則有所回升,并且半定量分析差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    除腸黏膜免疫反應(yīng)失衡以外,腸道微生物菌群的失調(diào)在IBD發(fā)病機(jī)制中也具有非常關(guān)機(jī)鍵的地位。細(xì)菌鞭毛蛋白是存在于細(xì)菌表面絡(luò)合物的重要物質(zhì),其最先在自發(fā)性結(jié)腸炎的小鼠模型中發(fā)現(xiàn),并代表著細(xì)菌的活力和黏附方面的能力。已經(jīng)有研究表明細(xì)菌鞭毛蛋白可以在組織內(nèi)激活TLR5受體,從而促發(fā)后續(xù)炎癥反應(yīng)[22-23]。而最近也有研究發(fā)現(xiàn)其在IBD的發(fā)病過程中也具有重要意義[24]。在腸道細(xì)菌介導(dǎo)下的炎癥反應(yīng)過程中會(huì)出現(xiàn)很多具有代表性的血清免疫標(biāo)志物,其中最典型的標(biāo)志物抗CBir1抗體既是對(duì)特定細(xì)菌產(chǎn)生免疫反應(yīng)之后在血清中表達(dá)的產(chǎn)物,也是反映人體腸道和微生物菌群之間發(fā)生相互作用的一種標(biāo)志性物質(zhì)[25]。本實(shí)驗(yàn)用ELISA的方法對(duì)血清抗CBir1抗體的濃度進(jìn)行了檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)LPS+OVA+TNBS模型組中抗CBir1抗體的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組和TNBS組,而酮替芬+TNBS組與TNBS組相比抗CBir1的表達(dá)量則有所降低。同時(shí)在上述免疫組化染色的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中還可以發(fā)現(xiàn)MUC2在腸道的潰瘍部位及其附近水腫區(qū),或是隱窩膿腫的隱窩上皮增生處等表達(dá)均有減低,因此更加說明了細(xì)菌鞭毛蛋白可以破壞各組小鼠腸黏膜內(nèi)以MUC2為主的黏液狀保護(hù)層并趁機(jī)從破潰的腸道中進(jìn)入血液,使得后續(xù)微生物和免疫反應(yīng)可以更加直接地對(duì)腸道進(jìn)行損害。而腸道內(nèi)完整的MUC2則可以阻擋細(xì)菌鞭毛蛋白等有害物質(zhì)的入侵從而對(duì)腸道進(jìn)行保護(hù)。

    綜上所述,本實(shí)驗(yàn)在小鼠結(jié)腸炎TNBS模型的基礎(chǔ)上用LPS和OVA作為激活劑并用酮替芬作為抑制劑進(jìn)一步進(jìn)行干預(yù),從而說明了MUC2不僅可以在各種結(jié)腸炎模型中起到附著于腸道黏液層的物理保護(hù)作用,還可以在IBD的免疫失衡和微生物菌群失調(diào)等因素中發(fā)揮著抗炎反應(yīng)的調(diào)控。并且腸黏膜MUC2的分泌與腸道內(nèi)破壞性物質(zhì)細(xì)菌鞭毛蛋白的表達(dá)也存在著一定負(fù)相關(guān)。有關(guān)MUC2與腸黏膜屏障和細(xì)菌鞭毛蛋白等物質(zhì)的具體關(guān)系和作用機(jī)制仍不是十分清楚,因此有待于更多的后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)此進(jìn)行更加深入的研究。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]Mao R,Hu PJ.The future of IBD therapy:where are we and where should we go next?[J].Dig Dis,2016,34(1-2):175-179.

    [2]Loddo I,Romano C.Inflammatory bowel disease:gene-tics,epigenetics,and pathogenesis[J].Front Immunol,2015,6:551.

    [3]Tomasello G,Sinagra E,Raimondo D,et al.Validation of a modified model of TNBS-induced colitis in rats.How to induce a chemical colitis in rats[J].Acta Biomed,2015,86(1):92-96.

    [4]Shan M,Gentile M,Yeiser JR,et al.Mucus enhances gut homeostasis and oral tolerance by delivering immunoregulatory signals[J].Science,2013,342(6157):447-453.

    [5]Peloquin JM,Nguyen DD.The microbiota and inflammatory bowel disease:insights from animal models[J].Anaerobe,2013,24:102-106.

    [6]Choung RS,Princen F,Stockfisch TP,et al.Serologic microbial associated markers can predict Crohn’s disease behaviour years before disease diagnosis[J].Aliment Pharmacol Ther,2016,43(12):1300-1310.

    [7]McCarthy J,O’Mahony L,O’Callaghan L,et al.Double blind,placebo controlled trial of two probiotic strains in interleukin 10 knockout mice and mechanistic link with cytokine balance[J].Gut,2003,52(7):975-980.

    [8]Dieleman LA,Palmen MJ,Akol H,et al.Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines[J].Clin Exp lmmunol,1998,114(3):385-391.

    [9]Gearry RB.IBD and environment:are there differences between east and west[J].Dig Dis,2016,34(1-2):84-89.

    [10] Kiesler P,Fuss IJ,Strober W.Experimental models of inflammatory bowel diseases[J].Cell Mol Gastroenterol Hepatol,2015,1(2):154-170.

    [11] Han C,Ding Z,Shi H,et al.The role of probiotics in lipopolysaccharide induced autophagy in intestinal epithelial cells[J].Cell Physiol Biochem,2016,38(6):2464-2478.

    [12] Guo S,Nighot M,Al-Sadi R,et al.Lipopolysaccharide regulation of intestinal tight junction permeability is mediated by TLR4 signal transduction pathway activation of FAK and MyD88[J].J Immunol,2015,195(10):4999-5010.

    [13] Jardi F,Aguilera M,Vergara P,et al.Lipopolysaccha-rides facilitate colonic motor alterations associated to the sensitization to a luminal antigen in rats[J].J Neurogastroenterol Motil,2015,21(2):222-235.

    [14] Katsura Y,Harada N,Harada S,et al.Characteristics of alveolar macrophages from murine models of OVA-induced allergic airway inflammation and LPS-induced acute airway inflammation[J].Exp Lung Res,2015,41(7):370-382.

    [15] Baba A,Tachi M,Ejima Y,et al.Anti-allergic drugs tranilast and ketotifen dose-dependently exert mast cell-stabilizing properties[J].Cell Physiol Biochem,2016,38(1):15-27.

    [16] Hung CH,Suen JL,Hua YM,et al.Suppressive effects of ketotifen on Th1-and Th2-related chemokines of monocytes[J].Pediatr Allergy Immunol,2007,18(5):378-384.

    [17] Boeckxstaens G.Mast cells and inflammatory bowel disease[J].Curr Opin Pharmacol,2015,25:45-49.

    [18] Corfield AP.Mucins:a biologically relevant glycan barrier in mucosal protection[J].Biochim Biophys Acta,2015,1850(1):236-252.

    [19] Gouyer V,Dubuquoy L,Robbe-Masselot C,et al.Delivery of a mucin domain enriched in cysteine residues strengthens the intestinal mucous barrier[J].Sci Rep,2015,5:9577.

    [20] Krishn SR,Kaur S,Smith LM,et al.Mucins and associated glycan signatures in colon adenoma-carcinoma sequence:prospective pathological implication(s) for early diagnosis of colon cancer[J].Cancer Lett,2016,374(2):304-314.

    [21] Engevik MA,Yacyshyn MB,Engevik KA,et al.HumanClostridiumdifficileinfection:altered mucus production and composition[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2015,308(6):G510-G524.

    [22] Peloquin JM,Nguyen DD.The microbiota and inflammatory bowel disease:insights from animal models[J].Anaerobe,2013,24:102-106.

    [23] Chaichana P,Chantratita N,Brod F,et al.A nonsense mutation in TLR5 is associated with survival and reduced IL-10 and TNF-α levels in human melioidosis[J].PLoS Negl Trop Dis,2017,11(5):e0005587.

    [24] Alexander KL,Targan SR,Elson CO 3rd.Microbiota activation and regulation of innate and adaptive immunity[J].Immunol Rev,2014,260(1):206-220.

    [25] Wallis D,Asaduzzaman A,Weisman M,et al.Elevated serum anti-flagellin antibodies implicate subclinical bowel inflammation in ankylosing spondylitis:an observational study[J].Arthritis Res Ther,2013,15(5):R166.

    猜你喜歡
    結(jié)腸染色黏膜
    微小RNA在先天性巨結(jié)腸中的研究進(jìn)展
    Tiger17促進(jìn)口腔黏膜成纖維細(xì)胞的增殖和遷移
    提壺揭蓋法論治熱結(jié)腸腑所致咳嗽
    內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)治療胃竇黏膜脫垂10 例臨床效果報(bào)道
    平面圖的3-hued 染色
    簡單圖mC4的點(diǎn)可區(qū)別V-全染色
    內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)在早期胃癌診療中的應(yīng)用
    油紅O染色在斑馬魚體內(nèi)脂質(zhì)染色中的應(yīng)用
    經(jīng)肛門結(jié)腸拖出術(shù)治療先天性巨結(jié)腸護(hù)理體會(huì)
    “瀉劑結(jié)腸”的研究進(jìn)展
    亚洲精品影视一区二区三区av| 国产老妇女一区| 日韩欧美精品v在线| 国产高清国产精品国产三级 | ponron亚洲| 久久亚洲精品不卡| 亚洲高清免费不卡视频| 国产久久久一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲av成人av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 中文亚洲av片在线观看爽| 26uuu在线亚洲综合色| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产成人freesex在线| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产欧美人成| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费av毛片视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产人妻一区二区三区在| 国产麻豆成人av免费视频| 又爽又黄无遮挡网站| 直男gayav资源| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 中文亚洲av片在线观看爽| 日韩av在线免费看完整版不卡| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人91sexporn| 国产精品三级大全| 在线观看美女被高潮喷水网站| 我要搜黄色片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 少妇熟女aⅴ在线视频| 婷婷色麻豆天堂久久 | 一级爰片在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品午夜福利在线看| 2021少妇久久久久久久久久久| 高清在线视频一区二区三区 | 我要搜黄色片| 久久久国产成人精品二区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产熟女欧美一区二区| 精品酒店卫生间| 国产午夜福利久久久久久| 国产三级中文精品| 日本wwww免费看| 国产一区二区在线av高清观看| 久久综合国产亚洲精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产精品久久久久久久久免| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久精品91蜜桃| av免费观看日本| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 春色校园在线视频观看| 国产色婷婷99| 村上凉子中文字幕在线| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美97在线视频| 一区二区三区高清视频在线| 一级毛片久久久久久久久女| 高清毛片免费看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 丰满少妇做爰视频| 免费人成在线观看视频色| 在线观看av片永久免费下载| 日日干狠狠操夜夜爽| 老司机福利观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 美女黄网站色视频| 久久人人爽人人片av| 色5月婷婷丁香| 精品人妻视频免费看| 国产高清有码在线观看视频| 99热这里只有精品一区| 亚洲中文字幕日韩| 国产视频首页在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品永久免费网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 岛国毛片在线播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品一及| 午夜激情福利司机影院| 国产精品.久久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精华一区二区三区| 色5月婷婷丁香| 日韩中字成人| 国内精品宾馆在线| 国产午夜精品论理片| 久久国产乱子免费精品| 免费搜索国产男女视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲av中文av极速乱| 视频中文字幕在线观看| 级片在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 在线a可以看的网站| 欧美日本亚洲视频在线播放| 精品午夜福利在线看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男人舔女人下体高潮全视频| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲在线观看片| 在线观看av片永久免费下载| 91久久精品国产一区二区成人| 高清毛片免费看| 成年女人看的毛片在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 老司机福利观看| 国产老妇女一区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av二区三区四区| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | .国产精品久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产午夜福利久久久久久| 成人特级av手机在线观看| 久久草成人影院| 精品不卡国产一区二区三区| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产单亲对白刺激| 国产成人精品久久久久久| 国产视频首页在线观看| 天堂影院成人在线观看| 国产三级在线视频| 亚洲av成人av| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产成人一区二区在线| 性色avwww在线观看| 亚洲综合精品二区| 精品人妻熟女av久视频| 国产av一区在线观看免费| 国产成人一区二区在线| 22中文网久久字幕| 97超视频在线观看视频| 丝袜美腿在线中文| 久久99热6这里只有精品| 麻豆一二三区av精品| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美激情在线99| 毛片一级片免费看久久久久| 久久草成人影院| 成人一区二区视频在线观看| 看十八女毛片水多多多| 哪个播放器可以免费观看大片| 激情 狠狠 欧美| 三级毛片av免费| 免费av观看视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产亚洲av嫩草精品影院| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产午夜福利久久久久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 在现免费观看毛片| 十八禁国产超污无遮挡网站| 精品国产露脸久久av麻豆 | av在线老鸭窝| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲在线观看片| 久久精品91蜜桃| 美女黄网站色视频| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲av不卡在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲av中文av极速乱| 久久久久久国产a免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产日韩欧美在线精品| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久久久久黄片| 精品久久久久久久末码| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲伊人久久精品综合 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲无线观看免费| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久国产成人精品二区| 欧美三级亚洲精品| 免费搜索国产男女视频| 18+在线观看网站| 精品一区二区免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 男人舔奶头视频| 亚洲高清免费不卡视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲av免费在线观看| 超碰97精品在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品精品国产色婷婷| 午夜久久久久精精品| 久久99精品国语久久久| 成人性生交大片免费视频hd| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 我要搜黄色片| 久久久欧美国产精品| 亚洲伊人久久精品综合 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 岛国在线免费视频观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 高清av免费在线| 99热这里只有精品一区| 神马国产精品三级电影在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 夫妻性生交免费视频一级片| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费在线观看成人毛片| 欧美精品一区二区大全| 久久6这里有精品| a级一级毛片免费在线观看| 久久99热这里只有精品18| 久久久久性生活片| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 男女下面进入的视频免费午夜| 51国产日韩欧美| 欧美最新免费一区二区三区| 成人午夜高清在线视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 99久久中文字幕三级久久日本| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品一区二区性色av| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费av毛片视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产精品一区二区性色av| 国产成人a∨麻豆精品| 免费av观看视频| 国产成年人精品一区二区| 久久久久久久国产电影| 亚洲国产精品sss在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 一级二级三级毛片免费看| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲精品乱久久久久久| 国产91av在线免费观看| av国产免费在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 秋霞在线观看毛片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲av一区综合| 可以在线观看毛片的网站| 日日撸夜夜添| 99久久人妻综合| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品一二三区在线看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 免费无遮挡裸体视频| 免费大片18禁| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产视频首页在线观看| 青春草视频在线免费观看| 亚洲综合色惰| 高清在线视频一区二区三区 | 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 精品人妻视频免费看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产成人a区在线观看| av播播在线观看一区| 国产淫片久久久久久久久| 老司机影院毛片| 日日干狠狠操夜夜爽| 97超碰精品成人国产| 国产亚洲91精品色在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产成人91sexporn| 老司机福利观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 桃色一区二区三区在线观看| 久久久午夜欧美精品| 成人性生交大片免费视频hd| 国产高潮美女av| 成人无遮挡网站| 看免费成人av毛片| 嫩草影院新地址| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲国产欧美人成| 啦啦啦韩国在线观看视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 韩国高清视频一区二区三区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 午夜爱爱视频在线播放| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 午夜福利视频1000在线观看| av.在线天堂| 性插视频无遮挡在线免费观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产伦一二天堂av在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品人妻久久久久久| 精品久久国产蜜桃| 午夜视频国产福利| 日韩强制内射视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久久久午夜电影| 亚洲人成网站在线观看播放| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲精品国产成人久久av| 国产探花在线观看一区二区| АⅤ资源中文在线天堂| 久久这里有精品视频免费| 国产成人精品婷婷| 亚洲三级黄色毛片| 精品久久国产蜜桃| 国产午夜精品一二区理论片| 中文字幕熟女人妻在线| 国产成人一区二区在线| 九九热线精品视视频播放| a级一级毛片免费在线观看| 天堂√8在线中文| 精品久久久噜噜| 亚洲精品乱久久久久久| 18禁动态无遮挡网站| 欧美精品一区二区大全| 蜜臀久久99精品久久宅男| 日本色播在线视频| 欧美激情在线99| 天堂网av新在线| av免费观看日本| 在现免费观看毛片| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲18禁久久av| 欧美丝袜亚洲另类| 熟女电影av网| av在线天堂中文字幕| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 只有这里有精品99| 禁无遮挡网站| 91狼人影院| 国产成年人精品一区二区| 成人鲁丝片一二三区免费| 日本免费在线观看一区| 嫩草影院新地址| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲国产欧美在线一区| 成人鲁丝片一二三区免费| 日本-黄色视频高清免费观看| 老司机福利观看| www.av在线官网国产| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久久久网色| 亚洲成av人片在线播放无| 热99在线观看视频| 99热6这里只有精品| 亚洲最大成人中文| 床上黄色一级片| 直男gayav资源| 精品人妻视频免费看| 1024手机看黄色片| 久久久久久久久久久免费av| 综合色av麻豆| 日本一本二区三区精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美xxxx性猛交bbbb| 插逼视频在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 日韩一区二区视频免费看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 免费在线观看成人毛片| 一级黄色大片毛片| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久鲁丝午夜福利片| 综合色丁香网| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产黄a三级三级三级人| 少妇的逼水好多| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产探花极品一区二区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产老妇女一区| 毛片女人毛片| 午夜日本视频在线| 免费看日本二区| 精品国产三级普通话版| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲av成人av| 在线播放无遮挡| 日本免费a在线| 伦理电影大哥的女人| 午夜福利在线观看吧| 欧美三级亚洲精品| 最近的中文字幕免费完整| 2021天堂中文幕一二区在线观| 免费看日本二区| 草草在线视频免费看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲av福利一区| 可以在线观看毛片的网站| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品久久视频播放| 成人毛片60女人毛片免费| 最近的中文字幕免费完整| 久久99蜜桃精品久久| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久99热这里只有精品18| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲最大成人av| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 久久精品91蜜桃| 国产成人aa在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 99热网站在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产高清不卡午夜福利| 午夜爱爱视频在线播放| 国产真实伦视频高清在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 极品教师在线视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| .国产精品久久| 精品欧美国产一区二区三| 91久久精品电影网| 男人狂女人下面高潮的视频| www.色视频.com| 国产探花在线观看一区二区| 青青草视频在线视频观看| 国产黄片美女视频| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 国产高潮美女av| 欧美3d第一页| 99久久中文字幕三级久久日本| 99久久精品一区二区三区| 国产亚洲最大av| 九草在线视频观看| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲av成人av| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 精品人妻偷拍中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 在线免费观看的www视频| 中文字幕av在线有码专区| 成人午夜高清在线视频| 精品一区二区三区人妻视频| 色视频www国产| 精品一区二区免费观看| 国产在线男女| 男女视频在线观看网站免费| ponron亚洲| 极品教师在线视频| 亚洲国产欧美在线一区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产久久久一区二区三区| 一边亲一边摸免费视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 日本五十路高清| 别揉我奶头 嗯啊视频| 精品久久久久久久久av| 国内精品一区二区在线观看| 美女高潮的动态| 日日撸夜夜添| 欧美日本视频| 97热精品久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产v大片淫在线免费观看| 亚州av有码| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 97热精品久久久久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲欧洲日产国产| 少妇高潮的动态图| 国产精品一区www在线观看| 日本色播在线视频| 日韩视频在线欧美| 两个人视频免费观看高清| 国产免费福利视频在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 高清视频免费观看一区二区 | 国产成人a区在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一区二区三区四区激情视频| 99久国产av精品国产电影| av在线亚洲专区| 激情 狠狠 欧美| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| av在线亚洲专区| 久久99热这里只频精品6学生 | 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久午夜欧美精品| 欧美丝袜亚洲另类| 91aial.com中文字幕在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美日韩精品成人综合77777| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产91av在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲av.av天堂| 亚洲人成网站高清观看| 天美传媒精品一区二区| 日本黄大片高清| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 少妇的逼好多水| 三级经典国产精品| 99热全是精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产免费男女视频| av女优亚洲男人天堂| 成人国产麻豆网| 波多野结衣巨乳人妻| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品福利在线免费观看| 久久人妻av系列| 日本av手机在线免费观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品日韩av在线免费观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产亚洲一区二区精品| 精品午夜福利在线看| 国产毛片a区久久久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 成人三级黄色视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 97超视频在线观看视频| 亚洲国产欧美人成| 真实男女啪啪啪动态图| 国产男人的电影天堂91| 可以在线观看毛片的网站| a级毛片免费高清观看在线播放| 在线播放无遮挡| 69人妻影院| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久久色成人| 久久久午夜欧美精品| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲av.av天堂| 国产欧美日韩精品一区二区| 免费观看人在逋| av天堂中文字幕网| 午夜福利视频1000在线观看| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品456在线播放app| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久久久久久久久免费av| 日本欧美国产在线视频| 国产精品国产三级专区第一集| 中文字幕制服av| 在线免费观看的www视频| 中文字幕av在线有码专区| 岛国在线免费视频观看| 日本免费在线观看一区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日韩欧美在线乱码| 午夜精品在线福利| 久久这里只有精品中国| 亚洲,欧美,日韩| 水蜜桃什么品种好| 亚洲av.av天堂| 黄色配什么色好看| 秋霞在线观看毛片| 欧美精品国产亚洲| 久久久久久久久久久免费av| 成年免费大片在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99视频精品全部免费 在线| 18禁动态无遮挡网站| 最近视频中文字幕2019在线8|